人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè)，共頁(yè)1、檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：人類免疫缺陷病毒抗體｛縮寫抗HIV（1+2）］測(cè)定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。標(biāo)本采集與處理標(biāo)本采集常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中，或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿，用肝素、EDTA或枸櫞酸鹽抗凝。檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。標(biāo)本保存接收標(biāo)本后在置1-2h后將標(biāo)本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達(dá)到3000rpm15min，離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15-25℃）下可穩(wěn)定48卜，普通冰箱中（2-8℃）穩(wěn)定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。不可使用熱滅活的標(biāo)本。已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4-8℃冰箱內(nèi)保存7d。標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)采血前使受檢者保持平靜、松弛，避免劇烈活動(dòng)。 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè)，共頁(yè)3．方法原理本實(shí)驗(yàn)采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶。當(dāng)待測(cè)標(biāo)本中存在HIV抗體時(shí)，該抗體和固化的抗原結(jié)合于反應(yīng)板上，并進(jìn)一步與酶結(jié)合物相結(jié)合，在TMB底物參與反應(yīng)的情況下，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。4．試劑及其他用品試劑：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒，由上海科華生物工程股份有限公司出品，試劑盒藥品批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字S20010012（96人份）。未打開的試劑盒保存于2-8℃，不可凍存。開啟的包被反應(yīng)板放入干燥劑密封后在2-8℃保存并盡快使用。未打開的試劑盒保存于2-8℃，不可凍存。微孔反應(yīng)板打開包裝后，應(yīng)立即將未試用的板條裝入有干燥劑的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶結(jié)合物、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、洗滌液、顯色劑A、顯色劑B和終止液，在沒(méi)有其他試劑污染的情況下，保存于原試劑瓶，并擰緊瓶蓋，置2-8℃中避光保存，可使用至標(biāo)簽標(biāo)識(shí)有效期。試劑盒組分微孔反應(yīng)板 抗-HIV陰性對(duì)照抗-HIV-1陽(yáng)性對(duì)照 抗-HIV-2陽(yáng)性對(duì)照酶結(jié)合物 顯色劑A顯色劑B 終止液洗滌液（蒸餾水1：25稀釋）封片說(shuō)明書其他試劑及用品加液器：型號(hào)。離心機(jī)： 型號(hào)。 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè)，共頁(yè)溫箱（或水浴箱）：型號(hào)。洗板機(jī)：型號(hào)。酶標(biāo)儀： 型號(hào)。5．室內(nèi)質(zhì)控與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則質(zhì)控品：采用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心臨床免疫室免疫質(zhì)控血清，濃度NCU/ml。質(zhì)控品重建方法：采購(gòu)來(lái)的質(zhì)控品按每周用量分裝-20℃凍存，復(fù)融后充分顛倒混勻。質(zhì)控品測(cè)定：在每一次（板）標(biāo)本中測(cè)定質(zhì)控血清。質(zhì)控規(guī)則：繪制質(zhì)控圖，求出SD和CV值。6．標(biāo)本檢測(cè)步驟洗滌液配制：將濃縮洗滌液用蒸餾水（或去離子水）作1：25稀釋。加樣：每次實(shí)驗(yàn)設(shè)抗-HIV-1陽(yáng)性對(duì)照孔2孑（每孔100川）設(shè)抗-HIV-2陽(yáng)性對(duì)照孔1孔（100Nl）抗-川丫陰性對(duì)照孔1孔（100nl）。建議預(yù)留空白對(duì)照1孔（不加樣本和酶結(jié)合物，只加底物和終止液）。剩余各孔加待測(cè)樣本100nl。用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，將反應(yīng)板置37℃孵育60分鐘。洗板：手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30-60秒，甩干，重復(fù)5次后，在干凈的吸水紙是上拍干。洗板機(jī)洗板：采用洗板機(jī)洗板，選擇洗滌5次程序，用配置的工作濃度洗滌液注滿每孔，每次工作濃度洗滌液在反應(yīng)微孔中的停留時(shí)間為30-60秒，并確保每次吸凈無(wú)殘留，洗完后在干凈的吸水紙上拍干。 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè),共頁(yè)（4）在已加入待測(cè)樣本和陰、陽(yáng)性對(duì)照的孔中加入1003酶結(jié)合物?；靹?，用封片紙覆蓋反應(yīng)板，置37℃孵育30分鐘。（5）洗板：洗板步驟同步驟（3）（6）顯色：洗滌結(jié)束后立即在所有孔內(nèi)加入顯色劑A、顯色劑B各503,混勻。用封片紙覆蓋反應(yīng)板后，將反應(yīng)板置37℃孵育30分鐘。終止：在所有孔內(nèi)加入503終止液，振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充分混勻。比色：使用酶標(biāo)儀，取波長(zhǎng)450nm（建議使用雙波長(zhǎng)酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630nm或630nm相近的波長(zhǎng)），若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對(duì)照孔校零，然后讀取各孔OD值。（加終止液后，務(wù)必在10分鐘內(nèi)讀數(shù)）。7．結(jié)果判斷：Cutoff值計(jì)算：COV二抗-HIV-1陽(yáng)性對(duì)照平均OD值*10%（若陽(yáng)性對(duì)照OD值>2.5按2.5算）當(dāng)S>COV時(shí)，說(shuō)明該檢測(cè)樣本抗-HIV反應(yīng)呈陽(yáng)性。當(dāng)S<COV時(shí)，說(shuō)明該檢測(cè)樣本抗-HIV反應(yīng)呈陰性。8．檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍結(jié)果的報(bào)告結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的信息。如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。臨界值：對(duì)于處于陽(yáng)性判斷值邊緣即稍低于cutoff的樣本，難以判斷是 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè)，共頁(yè)否為感染早期，或?qū)嶋H為非感染者的標(biāo)本，此時(shí)，可以再次取血測(cè)定和（或）用另一種ELISA試劑盒檢測(cè)，從而明確測(cè)定結(jié)果。這種情況下，如果測(cè)定結(jié)果仍處于cutoff邊緣，則建議數(shù)月后再次測(cè)定，如仍無(wú)改變，則說(shuō)明無(wú)HIV感染。9．操作性能從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒需平衡至室溫后方可使用，余者應(yīng)按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時(shí)，待測(cè)樣本需平衡至室溫后再行測(cè)試。使用前試劑應(yīng)搖勻。顯色過(guò)程必須封片。所有封片紙不能重復(fù)使用。結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。不同批號(hào)的試劑不可混用。洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)時(shí)常檢查加液頭，確保其暢通無(wú)堵塞；洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。洗板機(jī)的管路用純化水沖洗，以防堵塞和腐蝕。樣本和酶結(jié)合物均應(yīng)用微量移液器加注，并經(jīng)常校對(duì)微量移液器準(zhǔn)確性。HIV檢測(cè)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀的讀數(shù)為準(zhǔn)。本試劑的使用單位必須是當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的HIV初篩實(shí)驗(yàn)室。本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。整個(gè)檢測(cè)工作必須符合HIV實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉感染。操作時(shí)必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。10．參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平陰性結(jié)果：提示沒(méi)有檢測(cè)到人類免疫缺陷病毒抗體。11．臨床意義適用于獻(xiàn)血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒抗體的篩查。12．結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系

醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：生效日期：年月日版本：第1版第頁(yè)，共頁(yè)12.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。審核者認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)