微生物的培養(yǎng)2

微生物的培養(yǎng)1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？3、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟7、如何倒平板？㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結構簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：一.微生物基礎知識1.細菌的形態(tài)細菌主要是以二分裂的方式進行增殖（如右圖）2.細菌的繁殖3.細菌的菌落⑴.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)4.病毒的結構:由核酸和蛋白質(zhì)構成。病毒的結構吸附注入合成釋放組裝5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五個階段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白質(zhì)→組裝→釋放6.病毒的營養(yǎng)方式：寄生微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：㈡.微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)及功能1.碳源2.氮源3.生長因子4.無機鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種?；苡袡C營養(yǎng)(化能異養(yǎng)型)以化學試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。分離酵母菌、霉菌等真菌細菌主要是以二分裂的方式進行增殖（如右圖）6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟是否進行了及時細致的觀察與記錄6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別常用的消毒與滅菌的方法微生物的接種的常用接種方法有：光能無機營養(yǎng)(光能自養(yǎng)型)凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見的生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。㈢.培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的營養(yǎng)基質(zhì)。1.培養(yǎng)基的類型和用途2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基：(是否運動)

無動力有動力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？微生物的接種的常用接種方法有：如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)及功能6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.平板劃線法和稀釋涂布平板法。以化學試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。分離導入了目的基因的受體細胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基back血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。㈣.無菌技術1.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。⑴消毒定義：利用化學或物理方法，殺死部份微生物的過程。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別⑵滅菌的定義：以化學試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌之過程。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法接種操作是否符合無菌要求①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；微生物生長不可缺少的微量有機物。平板劃線法和稀釋涂布平板法。利用化學或物理方法，殺死部份微生物的過程。微生物生長不可缺少的微量有機物。2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外:由核酸和蛋白質(zhì)構成。利用化學或物理方法，殺死部份微生物的過程。微生物需要的五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設計的。二.實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。倒平板操作㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法平板劃線的操作一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)則的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。2.稀釋涂布平板的操作方法4.菌種的保存接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。3.微生物的恒溫培養(yǎng)⑵.長期保存：甘油冷凍管藏法⑴.臨時保藏：三.結果分析與評價㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。㈡.接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。㈢.是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀