飼料化驗(yàn)員檢測(cè)方法手冊(cè)-14版-7

常規(guī)項(xiàng)目檢測(cè)指導(dǎo)書質(zhì)量監(jiān)控中心PAGE2PAGE1常規(guī)方法檢測(cè)指導(dǎo)書飼料常規(guī)檢測(cè)方法指導(dǎo)書(內(nèi)部資料)質(zhì)量安全檢測(cè)中心編制2017-5-31

目錄一飼料中水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)含量的測(cè)定 4二飼料中粗灰分的測(cè)定 7三飼料中粗蛋白的測(cè)定 8四飼料中鈣的測(cè)定 12五飼料中水溶性氯化物的測(cè)定 15六飼料中粗脂肪的測(cè)定 17七飼料中粗纖維的含量測(cè)定 18八中性洗滌纖維的測(cè)定 20九飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定 22十乳清粉中乳糖的測(cè)定 錯(cuò)誤！未定義書簽。十一飼料中磷含量的檢測(cè) 23十二飼料中磷酸氫鈣含量的檢測(cè) 25十三磷酸氫鈣中總磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的檢測(cè) 27十四磷酸氫鈣中總鈣的測(cè)定 30十五石粉中鈣與鎂的測(cè)定 31十六油脂檢測(cè) 33十七揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 40十八大豆制品中尿素酶活性的兩種快速檢測(cè)法 42酚紅法 42pH-增值法 43十九KOH溶解度的測(cè)定方法 44二十顆粒飼料中淀粉糊化度的測(cè)定方法 45二十一混合均勻度的測(cè)定 47二十二DDGS中水溶性物質(zhì)含量的測(cè)定 50二十三沸石粉吸氨值的測(cè)定 51二十四新陳小麥對(duì)比方法 51二十五黃曲霉毒素測(cè)定 53二十六赤酶烯酮毒素測(cè)定 57二十七DON毒素測(cè)定 62二十八T-2毒素測(cè)定 66二十九赭曲霉毒素測(cè)定 70三十伏馬毒素測(cè)定 75三十一飼料中真蛋白的測(cè)定 79三十二面粉中濕面筋的測(cè)定 80三十三魚粉的測(cè)定 82三十四鍋爐水的測(cè)定 84三十五滴定分析（容量分析）用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 79三十六試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備 96附表：市售酸堿試劑的濃度及比重 99乳糖測(cè)定附表 99附錄：安全操作規(guī)程 109一飼料中水分和其他揮發(fā)性物質(zhì)含量的測(cè)定1適用范圍本方法適用于動(dòng)物飼料，但以下情況除外：1.1奶制品；1.2礦物質(zhì)；1.3含有相當(dāng)數(shù)量的奶制品和礦物質(zhì)的混合物，如代乳品；1.4含有保濕劑（如丙二醇）的動(dòng)物飼料；1.5下列單一動(dòng)物飼料：1.5.1動(dòng)植物油脂；1.5.2油料籽實(shí)；1.5.3油料籽實(shí)餅粕；1.5.4谷物，不包括玉米及谷類產(chǎn)品；1.5.5玉米。2原理根據(jù)樣品性質(zhì)的不同，在特定條件下對(duì)樣品進(jìn)行干燥所損失的質(zhì)量在試樣中所占的比例。3儀器設(shè)備3.1分析天平：感量1mg。3.2稱量瓶：由耐腐蝕金屬或玻璃制成，帶蓋。其表面積能使樣品鋪開約0.3g/cm2。

3.3電熱鼓風(fēng)干燥箱：溫度可控制在103℃±2℃。3.4干燥器：具有干燥劑。3.5電熱真空干燥箱：溫度可控制在80℃±2℃，真空度可達(dá)13kPa。應(yīng)備有通入干燥空氣導(dǎo)入裝置或以氧化鈣（CaO）為干燥劑的裝置。（20個(gè)樣品需300g氧化鈣）。4測(cè)定步驟4.1試樣準(zhǔn)備將稱量瓶放入103℃干燥箱中干燥30min±1min后取出，放在干燥器中冷卻至室溫。稱量其質(zhì)量，準(zhǔn)確至1mg。4.2配合飼料、濃縮飼料、飼料原料的水分測(cè)定稱取2-3g（精確到0.0002g）試樣于稱量瓶中，準(zhǔn)確至1mg，并攤勻（樣品鋪蓋在稱量瓶底的厚度要低于4mm）。將稱量瓶蓋放在下面或邊上與稱量瓶一同放入105℃干燥箱中。當(dāng)干燥箱溫度達(dá)103℃后，干燥4h±0.1h。將蓋蓋上，從干燥箱中取出，在干燥器中冷卻至室溫。稱量，準(zhǔn)確至1mg。4.3油脂、糖蜜（含脂肪量高或者含糖量高的原料）的水分測(cè)定4.3.1真空干燥法稱取2g樣品（精確到0.0002g）與稱量瓶中。將稱量瓶蓋放在下面或邊上與稱量瓶一同放入80℃的真空干燥箱中，減壓至13kPa以下。通入干燥空氣或放置干燥劑干燥試樣。在放置干燥劑的情況下，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的壓力后斷開真空泵。在干燥過程中保持所設(shè)定的壓力。當(dāng)干燥箱溫度達(dá)到80℃后，加熱4h±0.1h。小心地將干燥箱恢復(fù)至常壓。打開干燥箱，立即將稱量瓶蓋蓋上，從干燥箱中取出，放入干燥器中冷卻至室溫稱量（精確到0.0002g）。將試樣再次放入80℃的真空干燥箱中干燥30min±1min，直至連續(xù)兩次干燥質(zhì)量變化之差小于其質(zhì)量的0.2％。4.3.2快速法（適合于油脂）稱取1-2g（精確到0.0002g）試樣于稱量瓶中，準(zhǔn)確至1mg，并攤勻（樣品鋪蓋在稱量瓶底的厚度要低于4mm）。將稱量瓶蓋放在下面或邊上與稱量瓶一同放入103℃干燥箱中。當(dāng)干燥箱溫度達(dá)103℃后，干燥75min。將蓋蓋上，從干燥箱中取出，在干燥器中冷卻至室溫。稱量，準(zhǔn)確至1mg。4.4測(cè)定次數(shù)同一試樣進(jìn)行兩個(gè)平行測(cè)定。5測(cè)定結(jié)果的計(jì)算和表述數(shù)值以％計(jì)，按式（1）計(jì)算：……………(1)式中：m0——稱量瓶（包括蓋）的質(zhì)量，如使用砂和玻璃棒，也包括砂和玻璃棒的質(zhì)量，單位為克（g）；m1——稱量瓶（包括蓋）和干燥后試樣的質(zhì)量，單位為克（g）m2——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。6重復(fù)性兩個(gè)平行樣的測(cè)定值相差不得超過0.2%。否則重做。7注意事項(xiàng)7.1稱量時(shí)要保證稱量皿冷卻至室溫，防止稱量誤差并損害天平。7.2從烘箱中拿稱量皿時(shí)要戴厚棉手套，防止?fàn)C傷。7.3每次實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)馬上將稱樣皿清洗干凈。放在烘箱中烘干，置于干燥器內(nèi)保存，待用。7.4稱量的量為距稱量皿底面積1mm的高度（鋪滿瓶底）為宜，約2—3g，據(jù)測(cè)定樣品的容重不同樣品要鋪勻。7.5粉碎后的玉米在130±2℃烘箱內(nèi)烘4h冷卻后稱重（GB∕T10362—89），測(cè)的玉米水份為標(biāo)準(zhǔn)用以較正水份測(cè)定儀。7.6快速法測(cè)定水分：130±2℃40min8結(jié)果準(zhǔn)確度的保證8.1天平必須經(jīng)過校正。8.2控溫要準(zhǔn)，烘箱溫度要以溫度計(jì)的溫度為準(zhǔn)。8.3快速法必須以國標(biāo)法進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果在允許偏差之內(nèi)時(shí)方可使用。8.4玻璃干燥器中的硅膠需要經(jīng)常更換，使之保持為藍(lán)色。8.5統(tǒng)一在鼓風(fēng)狀態(tài)下，置于烘箱內(nèi)溫度計(jì)周圍烘網(wǎng)上，間隙均勻；利于散熱。烘箱里不能放大量有礙箱內(nèi)空氣流動(dòng)的物品。8.6稱取樣時(shí)戴手套。8.7稱量瓶要洗干凈，放入烘箱時(shí)要敞開蓋，離開烘箱立即用匹配的稱量皿蓋蓋住。8.8稱樣前要混合均勻，以確保平行樣分析結(jié)果在國標(biāo)允許的0.2%的范圍內(nèi)。二飼料中粗灰分的測(cè)定1適用范圍本方法適用于動(dòng)物飼料中粗灰分的測(cè)定。2原理試樣中的有機(jī)質(zhì)經(jīng)灼燒分解，對(duì)所得的灰分稱量。3儀器與設(shè)備3.1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；3.2高溫爐：電加熱，可控制溫度，帶高溫計(jì)。在550℃時(shí)溫差不超過20℃；3.3分析天平感量為0.0001g；3.4干燥箱：溫度控制在（103±2）℃；3.5電爐3.6坩堝，可耐600℃以上高溫；3.7干燥器：盛有有效的干燥劑。4測(cè)定步驟將坩堝放入高溫爐中，于550℃下灼燒至少30min。移入干燥器冷卻至室溫，稱量（精確至0.0002g）。稱取約2-3g試樣（精確至0.0002g）于坩堝中。將盛有試樣的坩堝放在電爐上小心加熱炭化至無煙，轉(zhuǎn)入預(yù)先加熱到550℃的高溫爐中灼燒4h，至樣品呈白色。灼燒完畢，待爐溫降至200℃以下，移入干燥器內(nèi)冷卻，稱重，準(zhǔn)確至0.001g。對(duì)同一試樣取兩份試料進(jìn)行平行測(cè)定。5分析結(jié)果計(jì)算和表述粗灰分含量（％）按式（2）計(jì)算：……………………（2）式中：m0──為恒質(zhì)空坩堝質(zhì)量，g；m1──為坩堝加試料的質(zhì)量，g；m2──為灰化后坩堝加灰分的質(zhì)量，g。所得結(jié)果應(yīng)表示至0.01%。6重復(fù)性和再現(xiàn)性粗灰分含量在5%以上，允許相對(duì)偏差為1%；粗灰分含量在5%以下，允許相對(duì)偏差為5%。7注意事項(xiàng)7.1馬弗爐高溫，放取坩堝時(shí)用坩堝鉗。7.2樣品碳化時(shí)要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。7.3含糖量較高的樣品灰化時(shí)要加幾滴豆油或棕櫚油，防止樣品膨脹溢出坩堝。7.4試樣放置時(shí)，要放置到溫度感應(yīng)器覆蓋的區(qū)域。7.5茂福爐關(guān)閉冷卻時(shí)，爐門應(yīng)輕輕打開，角度小于30度，逐漸讓爐溫冷卻到200℃下，再取樣。8準(zhǔn)確度的保證8.1保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的儀器準(zhǔn)確度。馬弗爐的溫度要保證550℃±20℃之間8.2若灼燒后發(fā)現(xiàn)坩堝內(nèi)仍有碳粒，冷卻后將坩堝內(nèi)樣品小心用蒸餾水或雙氧水潤(rùn)濕，在干燥箱中干燥蒸發(fā)至干，再放置高溫爐內(nèi)灼燒1h。冷卻后，稱重。8.3每次做完實(shí)驗(yàn)坩堝洗凈后，先放入烘箱中將水分烘干，再放入550℃的馬弗爐灼燒30分鐘，放入干燥器內(nèi)保存，以備待用。坩堝長(zhǎng)久未用應(yīng)重新恒重。8.4干燥器內(nèi)干燥劑要經(jīng)常更換、烘干。8.5試樣必須先碳化，不能直接放入高溫馬弗爐中。三飼料中粗蛋白的測(cè)定1適用范圍本方法適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料中粗蛋白含量的測(cè)定。2原理凱氏定氮法測(cè)定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用濃硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測(cè)出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計(jì)算出粗蛋白含量。3試劑3.1硫酸（GB625-77）：化學(xué)純3.2硫酸銅（GB665-78）：化學(xué)純3.3硫酸鉀（HG3-920-76）或硫酸鈉（HG3-908-76）：化學(xué)純3.4氫氧化鈉（GB628-78）：分析純，40g溶于100ml水中配成40%水溶液3.5硼酸（GB628-78）：分析純，20g溶于100ml水中配成2%溶液3.6混合指示劑：甲基紅（HG3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠（HG3-1200-79）0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合3.70.1mol/l鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液3.8硫酸銨（GB1396-28）：分析純3.9蔗糖（HG3-1001-76）：分析純4儀器設(shè)備4.1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；4.2分樣篩：孔徑0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量0.0001g；4.4消煮爐或電爐；4.5滴定管：酸式，10、25mL；4.6凱氏燒瓶：250mL；4.7凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式；4.8錐形瓶：150、250mL；4.9容量瓶：100mL；4.10消煮管：250mL；4.11定氮儀：以凱氏原理制造的各類型半自動(dòng)，全自動(dòng)蛋白質(zhì)測(cè)定儀。5分析步驟5.1半微量法5.1.1試樣的消煮稱取試樣0.2-0.3g（玉米、小麥稱0.7-1.0g；豆粕稱0.4g；魚粉羽毛粉稱0.2g；精確至0.0002g），放入凱氏燒瓶中，加入6.4g(硒：硫酸銅：無水硫酸鈉=0.02:1:15混合研磨至均勻)混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強(qiáng)火力（360～410℃）直至呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱40min，消化全過程至少2h。5.1.2氨的蒸餾（半微量法）將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶?jī)?nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加氫氧化鈉密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶?jī)?nèi)，然后停止蒸餾。5.1.3滴定用上述蒸餾法蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。5.2推薦法(全量法)5.2.1試樣的消煮稱取試樣0.2～0.5g（玉米、小麥稱0.7-1.0g；豆粕稱0.4g；魚粉羽毛粉稱0.3g；精確至0.0002g），放入消化管中，加2片消化片（硒粉和硫酸鉀混合物市場(chǎng)上有成品）或6.4g混合催化劑(硒：硫酸銅：無水硫酸鈉=0.02:1:15混合研磨至均勻)，12--15mL硫酸，于420-450℃下在消化爐上消化2.5h，取出冷卻后加入20mL蒸餾水，搖勻。5.2.2氨的蒸餾將帶消化液的消化管插在蒸餾裝置上，以25mL2%硼酸為吸收液，加入2滴混合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶?jī)?nèi)，然后向消化管中加入氫氧化鈉溶液進(jìn)行蒸餾。吸收液體積達(dá)到150mL時(shí)，降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶?jī)?nèi)。5.2.3滴定用0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。6空白測(cè)定稱取蔗糖0.5g，代替試樣，進(jìn)行空白測(cè)定，消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.2mL。7分析結(jié)果的計(jì)算和表述計(jì)算見下式（3）：（V2-V1）*C*0.014*6.25粗蛋白質(zhì)（%）=*100…………（3）m式中：V2──滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；V1──滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；c──鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；m──試樣質(zhì)量，g；0.0140──與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)摹⒁钥吮硎镜牡馁|(zhì)量。6.25──氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。8重復(fù)性當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在25%以上時(shí)，允許相對(duì)偏差為1%。當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10%～25%之間時(shí)，允許相對(duì)偏差為2%。當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10%以下時(shí)，允許相對(duì)偏差為3%。9注意事項(xiàng)9.1半微量法測(cè)定注意事項(xiàng)9.1.1消化時(shí)凱氏燒瓶應(yīng)置于通風(fēng)櫥處進(jìn)行。9.1.2蒸餾時(shí)蒸餾燒瓶中要加入幾顆玻璃珠防止爆沸。9.1.3蒸餾時(shí)蒸餾燒瓶的口上要插入一根玻璃管，玻璃管的下端要伸入蒸餾水的液面以下。9.1.4加堿時(shí)完要立即用玻璃塞塞好，且在入口處加氫氧化鈉密封。9.1.5半微量蒸餾裝置在使用之前要檢查是否漏氣。9.2推薦法注意事項(xiàng)9.2.1消化要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。9.2.2定氮儀不能漏氣。10結(jié)果準(zhǔn)確度的保證和評(píng)價(jià)10.1結(jié)果準(zhǔn)確度的保證10.1.1如果是新的可調(diào)節(jié)電爐可適當(dāng)調(diào)節(jié)其溫度，消化時(shí)間據(jù)實(shí)際情況而定。10.1.2每次做空白試驗(yàn)較正裝置。10.1.3定期做測(cè)定回收率實(shí)驗(yàn)具體方法：精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，選半微量法或推薦法“氨的蒸餾”中的步驟進(jìn)行操作，測(cè)得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。10.1.4蒸餾后的液體不能放置太長(zhǎng)時(shí)間，要及時(shí)滴定。10.1.5消化溫度應(yīng)控制在420℃～450℃內(nèi)。消化器控溫器應(yīng)良好，電阻絲應(yīng)使用專用配套電阻絲，拉伸應(yīng)均勻，使?fàn)t內(nèi)溫度均勻。10.1.6蒸餾完畢應(yīng)先取下接收瓶，然后在關(guān)閉電源，以免酸液倒流。10.1.7每天的粗蛋白測(cè)定必須至少一組做平行樣。10.2準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)10.2.1測(cè)定回收率加硫酸銨檢測(cè)回收率，如果合格，說明蒸餾裝置不漏氣和鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液溶液標(biāo)定正確。具體方法見10.1.3定期測(cè)回收率實(shí)驗(yàn)。用已知含氮量的樣品標(biāo)準(zhǔn)物（如含氮量在1.30%～1.40%之間的玉米粉）用半微量法或推薦法測(cè)定其含氮量，和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含氮量進(jìn)行比對(duì)，要求測(cè)定結(jié)果在要求范圍之內(nèi)。此方法可以評(píng)價(jià)整個(gè)過程的準(zhǔn)確度。10.2.2實(shí)驗(yàn)室比對(duì)和國家認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行同樣品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比對(duì)。此方法可以評(píng)價(jià)整個(gè)過程的準(zhǔn)確度。分公司對(duì)飼料中粗蛋白數(shù)據(jù)可疑樣品應(yīng)送集團(tuán)質(zhì)檢中心復(fù)測(cè)。四飼料中鈣的測(cè)定原理高溫將試樣中有機(jī)物破壞，鈣變成溶于水的離子，用三乙醇胺、乙二胺、鹽酸羥胺和淀粉溶液消除干擾離子的影響，在堿性溶液中以鈣黃綠素為指示劑，用乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液絡(luò)合滴定鈣，可快速測(cè)定鈣的含量。2試劑和溶液2.1鹽酸羥銨2.2鹽酸：1+1（v1+v2）2.3濃硝酸2.4氫氧化鉀溶液：200g/l2.5三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2）2.6乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）2.7淀粉溶液：10g/l，稱取1g可溶性淀粉放入200ml燒杯中，加5ml水潤(rùn)濕，加95ml沸水?dāng)嚢?，煮沸，冷卻備用2.8孔雀石綠水溶液：1g/L2.9鈣黃綠素-甲基百里香酚藍(lán)指示劑：0.1g鈣黃綠素與0.13g甲基百里香酚藍(lán)，5g氯化鉀研細(xì)，貯于磨口瓶中備用2.10鈣紅指示劑：0.1g鈣羧酸鹽+5g硫酸鉀或氯化鉀或氯化鈉或硫酸鈉2.11基準(zhǔn)氧化鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液2.12乙二胺四乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（EDTA），C=0.01mol/L鹽酸羥胺；3儀器和設(shè)備3.1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；3.2分樣篩：孔徑0.42mm（40目）；3.3分析天平：感量0.0001g；3.4高溫爐：電加熱，可控溫度在（550±20）℃；3.5坩堝：瓷質(zhì)；3.6容量瓶：100mL；3.7滴定管：酸式，25mL或50mL；3.8玻璃漏斗：6cm直徑；3.9定量濾紙：中速，7cm～9cm；3.10移液管：10，20mL；3.11燒杯：200mL；3.12凱氏燒瓶：250mL或500mL；4測(cè)定步驟試樣分解干法（推薦法）用測(cè)定灰分后的試樣加入1:1鹽酸溶液10ml及濃硝酸數(shù)6滴，小心煮沸，冷卻，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，冷卻，定容，搖勻?yàn)樵嚇臃纸庖?5測(cè)定方法5.1鈣黃綠素法：準(zhǔn)確移取試樣的分解液10ml,加水50ml，加淀粉溶液10ml,三乙醇胺2mL、乙二胺1ml、孔雀石綠1滴，滴加氫氧化鉀溶液至無色，再過量加10ml左右，加0.1g鹽酸羥胺（每加一種試劑都必須搖勻），加鈣黃綠素少許，在黑色背景下立即用EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至綠色熒光消失呈現(xiàn)紫紅色為滴定終點(diǎn)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。5.2鈣紅法：準(zhǔn)確移取試樣的分解液10ml，加水50ml，三乙醇胺5ml，孔雀石綠1滴，滴加氫氧化鉀溶液至無色，再過量加5-10ml左右，加0.1g鹽酸羥胺（每加一種試劑都必須邊加邊搖），溶解后鈣紅指示劑少許，立即用EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至粉紅色消失。同時(shí)做空白試驗(yàn)。40.08*V*C結(jié)果計(jì)算：Ca%=m式中:C—EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度V消耗EDTA標(biāo)液的體積m試樣質(zhì)量6允許差含鈣量在10%以上，允許相對(duì)偏差2%；含鈣量在5%～10%時(shí)，允許相對(duì)偏差3%；含鈣量1%～5%時(shí)，允許相對(duì)偏差5%；含鈣量1%以下，允許相對(duì)偏差10%。7注意事項(xiàng)7.1三乙醇胺、乙二胺、氫氧化鉀能腐蝕皮膚刺激眼睛，使用的時(shí)候要避免接觸皮膚，如果接觸皮膚則應(yīng)該先用濕抹布擦干凈，然后在用大量的水沖洗接觸處。7.2煮沸時(shí)必須要在通風(fēng)櫥處進(jìn)行。8結(jié)果準(zhǔn)確度的保證和評(píng)價(jià)8.1結(jié)果準(zhǔn)確度的保證8.1.1掩蔽劑（如乙二胺、三乙醇胺等）是在一定條件下才能起到它的掩蔽作用，要按固定的操作流程順序進(jìn)行操作，三乙醇胺掩蔽Fe3+；乙二胺掩蔽Cu2+、Mn3+、Zn2+。8.1.2配制備用的淀粉溶液不可超過一周，室溫高時(shí)淀粉溶液呈混濁或有異味時(shí)不可使用，需重新配制。可以再配置時(shí)每升淀粉溶液加3g硼酸。8.1.3定期配置一次鈣標(biāo)液對(duì)EDTA標(biāo)定。8.1.4鈣黃綠素指示劑加入要適量。8.1.5本實(shí)驗(yàn)所有儀器都不能用清洗粉洗刷。8.1.6絡(luò)合反應(yīng)速度慢，所以滴定時(shí)要慢慢滴用力搖，以防滴定結(jié)果偏高。8.1.7加入鈣黃綠素指示劑或鈣紅指示劑后要立即滴定。8.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置和標(biāo)定8.2.1C=0.01g/mlEDTA標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的配置：稱取3.8gEDTA二鈉放入200ml燒杯中加200ml水，加熱溶解冷卻后用水轉(zhuǎn)移到1000ml容量瓶中，稀釋至刻度。8.2.2氧化鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：準(zhǔn)確稱取800℃灼燒至恒重的基準(zhǔn)氧化鋅0.2g，加入20%鹽酸溶解，定容至250ml,搖勻。8.2.3EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：準(zhǔn)確吸取25ml基準(zhǔn)氧化鋅溶液，加入70ml水，2滴0.1%甲基紅指示劑，用10%氨水調(diào)節(jié)PH值到7-8，加入10mlPH=10的氨-氯化銨緩沖液，5滴0.5%鉻黑T指示劑，用配置好的EDTA標(biāo)液滴定至紫色變?yōu)樗{(lán)色，同時(shí)做空白試驗(yàn)。8.2.4計(jì)算m*(25/250)CEDTA=*1000（V-V0）*MM氧化鋅的物質(zhì)量m氧化鋅質(zhì)量V消耗EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V0—空白消耗的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積五飼料中水溶性氯化物的測(cè)定1適用范圍本方法適用于各種配合飼料、濃縮飼料和單一飼料，以及部分原料（乳清粉，魚粉等）。2方法原理樣品經(jīng)灰化完全后用水洗出氯離子（或經(jīng)稀釋后），取部分濾液用硝酸銀溶液直接滴定，用鉻酸鉀作指示劑。反應(yīng)式為：CL-+Ag+→AgCl↓（白色沉淀）2Ag+CrO42-→Ag2CrO4↓（磚紅色沉淀）3試劑3.110%鉻酸鉀指示劑：稱取10g鉻酸鉀溶于100ml3.2氯化鈉（GB12530-77）：基準(zhǔn)物于550℃灼燒1h，干燥器中冷卻保存，準(zhǔn)確稱取1.1690g溶解，用水稀釋至1000ml，此溶液為0.02mol/l氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液；3.30.02mol/l硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液：取硝酸銀（分析純）3.4g，溶于1000ml水中。貯存于棕色瓶中，即為0.02mol/l硝酸銀溶液。標(biāo)定：準(zhǔn)確取氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液10ml，于250ml錐形瓶中，加入50ml水及10滴鉻酸鉀指示劑，用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，出現(xiàn)橙紅色，且30秒不褪色為終點(diǎn)M*25硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積濃度N==M×0.4277/VV*0.05845*1000式中：M-氯化鈉的重量；V-消耗硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；0.05845為與1ml硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)穆然c克數(shù)。5測(cè)定稱2-5g左右樣品于50ml瓷質(zhì)坩堝中（精確至0.0001g,）在電爐上小心炭化至無煙，再放入馬弗爐，550℃灼燒3h，取出冷卻后用水稀釋至100ml容量瓶中，搖勻備用。精確移取上清液10ml(必要時(shí)過濾后再移取上清液),加蒸餾水50ml(用50ml的容量瓶量取),加10%鉻酸鉀指示劑1ml,用硝酸銀溶液滴定至溶液呈磚紅色,且30s不褪色為終點(diǎn)，同時(shí)做空白試驗(yàn)。6結(jié)果計(jì)算C*V*58.45NaCl%=M式中：V——消耗硝酸銀溶液的體積mlC——硝酸銀溶液的濃度58.45——與1mol硝酸銀相當(dāng)?shù)穆然c的克數(shù)M——試樣重g7重復(fù)性每個(gè)樣品取2個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以算術(shù)平均值為分析結(jié)果。氯含量在3%以下，允許絕對(duì)差0.2%，含量在3%以上，允許相對(duì)偏差3%8注意事項(xiàng)8.1本實(shí)驗(yàn)用到的溶液大部分有毒，需要戴膠皮手套操作。廢液需要倒入指定的廢液回收池中。8.2加入硝酸銀后如果沉淀很難凝聚，必須要加入一些有機(jī)試劑（如硝基苯、1.2-二氯乙烷、正己烷）1～5mL用力震蕩。8.3硝酸銀溶液容易和氯離子產(chǎn)生沉淀，用來滴定硝酸銀的滴定管需要先用蒸餾水洗滌，然后再用自來水沖洗，最后用蒸餾水洗滌。8.4硝酸銀見光易分解需要保存在棕色瓶中。8.5硝酸銀基準(zhǔn)試劑需要放在干燥器中干燥保存。8.6滴定時(shí)應(yīng)劇烈搖動(dòng),使被吸附氯離子完全釋出,以免出現(xiàn)判定終點(diǎn)過早現(xiàn)象。六飼料中粗脂肪的測(cè)定1適用范圍配合飼料和單一飼料(玉米酒精糟、玉米蛋白飼料、花生餅、磷脂粉等)。2方法原理適量試樣通過索氏脂肪提取器中石油醚抽提，稱取剩余物的質(zhì)量，用試樣的質(zhì)量減剩余物的質(zhì)量既得粗脂肪值，除脂肪外還帶有有機(jī)酸、磷脂、脂溶性維生素、葉綠素等，因而測(cè)定結(jié)果稱粗脂肪或醚提取物。3試劑石油醚，分析純，沸程60℃～90℃，冬季選擇沸程30-60℃。4儀器設(shè)備4.1索氏脂肪提取器：帶冷凝管的250ml或500ml4.2恒溫水浴鍋4.3電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱4.4干燥器4.5濾紙：定量中速濾紙4.6稱量瓶：70*35mm5分析步驟稱取2--3克樣品包入濾紙中，放入烘箱在130±2℃烘40min，冷卻稱重，。然后放入提取器中，裝置安排妥當(dāng)后注入石油醚至吸虹高度上的2至3厘米處為宜，水浴加熱，提取約5--7小時(shí)（保證約10—12次/小時(shí)回流次數(shù)），取出濾紙包，置于通風(fēng)櫥中，待石油醚揮發(fā)完后置于130±2℃烘箱烘40min，干燥器中冷卻30min，稱重，恒重至相差0.0001g。6計(jì)算W3-W2粗脂肪（%）=×100W1試中：w1——樣品質(zhì)量w2——已恒重的濾紙加樣品重w3——浸提后已恒重的濾紙加樣品重7重復(fù)性每個(gè)試樣取二個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，取其平均值；粗脂肪含量在10%以上，允許相對(duì)偏差為3%；粗脂肪含量在10%以下，允許相對(duì)偏差為5%。8注意事項(xiàng)8.1在包濾紙包時(shí)最好帶手套操作，手上汗油漬會(huì)附于烘干的濾紙包上，影響結(jié)果。8.2濾紙包易吸潮,應(yīng)快速稱量，干燥后應(yīng)放在稱量瓶中冷卻,前后冷卻條件要一致。8.3保證約10—12次/小時(shí)回流次數(shù),抽提時(shí)間不低于5小時(shí)。如脂肪≥16，則將抽提時(shí)間延長(zhǎng)1h。8.4如抽提樣品數(shù)量多,應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)抽提時(shí)間。8.5水浴鍋切勿缺水。8.7石油醚抽提3-4次后，應(yīng)更換一次試劑，廢試劑集中回收。8.8切勿將含有石油醚殘留的樣品直接置于干燥箱中干燥，干燥時(shí)稱量瓶蓋要你打開。七飼料中粗纖維的含量測(cè)定1適用范圍本方法適用于粗纖維含量大于10g/kg的飼料。本方法還適用于谷物和豆類植物。2原理用固定量的酸和堿，在特定條件下消煮樣品，再用醚、乙醇除去醚溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的量，所余量為粗纖維。它不是一個(gè)確切的化學(xué)實(shí)體，只是在公認(rèn)強(qiáng)制規(guī)定的條件下，測(cè)出的概略成分，其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素。3試劑3.1硫酸溶液：0.128±0.005mol/l,移取濃硫酸7.1ml,定容至1000ml容量瓶中。3.2氫氧化鈉溶液：0.313±0.005mol/l,準(zhǔn)確稱取13.24g氫氧化鈉溶于少量水中.，用水稀釋至1000ml容量瓶中。3.395%乙醇4儀器設(shè)備4.1馬福爐4.2粗纖維測(cè)定儀4.3古氏坩堝5分析步驟5.1在已編號(hào)的坩堝中稱取脫脂樣品1-1.5g（脂肪含量低于5%不用脫脂，5%以上必須脫脂）準(zhǔn)確至0.0001g。5.2接通電源、冷凝水、開啟主機(jī)電源（自來水盡量開足以保證冷凝）5.3將坩堝移入儀器溫室中（下部放入坩堝底座中心，上部對(duì)準(zhǔn)消煮管下的保護(hù)套內(nèi)孔，壓下手柄并鎖緊，在一次檢查坩堝位置是否準(zhǔn)確）將下閥按鈕全部關(guān)閉，拉出加熱器手柄。5.4用漏斗在消煮管內(nèi)加入少量煮沸的硫酸，打開吸開關(guān)，逐個(gè)開下閥，抽盡溶液，關(guān)閉吸開關(guān)和下閥，將煮沸的硫酸加入消煮管內(nèi)（150ml）在加入3-4滴正辛醇，打開定時(shí)器，同時(shí)按需要打開加熱器開關(guān)，調(diào)節(jié)選位旋鈕，可觀察單個(gè)加熱器電壓，現(xiàn)將電壓調(diào)至最高（220V），待消煮液微沸，將電壓逐個(gè)下調(diào)至溶液微沸（以樣品無沉淀為準(zhǔn)），開始計(jì)時(shí)30min，（如發(fā)現(xiàn)試樣粘壁可補(bǔ)加消煮液）。5.5打開吸開關(guān)，在逐個(gè)打開下閥將消煮液快速抽掉，并用煮沸的蒸餾水洗滌殘?jiān)林行裕ù蠹s3次），在抽濾中入發(fā)現(xiàn)坩堝堵塞抽濾過慢，可用吹開關(guān)用氣流反沖，再繼續(xù)抽濾。5.6按步驟4進(jìn)行堿消煮5.7按步驟5抽洗堿消煮液，同時(shí)將加熱器手柄推進(jìn)。5.8關(guān)閉下閥，在消煮管內(nèi)加入95%乙醇約20ml，沖洗3次。5.9壓下手柄，拉出鎖緊勾子緩緩上升，使其復(fù)位，取出坩堝，待乙醇揮發(fā)完后移入干燥箱中，130℃，2h，冷卻，稱重。5.10將坩堝放入高溫爐中，550℃灼燒30min，冷卻，稱重。6測(cè)定結(jié)果的計(jì)算和表述粗纖維(%)=(m1-m2)/m*100%式中:m1-130℃烘干后坩堝及試樣殘?jiān)?濾紙重量.gm2-550℃灼熱后坩堝及試樣殘?jiān)亓縢m-試樣(未脫脂)重量g7注意事項(xiàng)7.1粗纖維里面含有的纖維素，半纖維和木質(zhì)素。注意木質(zhì)素不屬于糖類，木質(zhì)素是苯丙基衍生物，很難被消解。7.2脂肪高于5%時(shí)，前處理必須脫脂。脂肪低于5%可以不用脫脂。8儀器維護(hù)8.1儀器應(yīng)保持潔凈，試驗(yàn)完畢后應(yīng)立即用軟布擦拭干凈。8.2因各地水質(zhì)不同，有的水硬度較大，致使冷凝管內(nèi)發(fā)黃變綠，如有此現(xiàn)象發(fā)生，應(yīng)配置濃度大的檸檬酸溶液通入冷凝管中清洗，再用自來水沖洗干凈。八中性洗滌纖維的測(cè)定1適用范圍單一飼料、配合飼料，本方法不適合無機(jī)鹽類飼料添加劑。2原理應(yīng)用熱的中性洗滌劑處理飼料試樣，使植物性飼料中大部分細(xì)胞內(nèi)容物溶解于洗滌劑中，稱之為中性洗滌劑溶解物(NDS)，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白；剩余的不溶解殘?jiān)饕羌?xì)胞壁組分，為中性洗滌纖維(NDF)，其中包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽和很少量的蛋白質(zhì)3試劑3.1正辛醇；3.2無水亞硫酸鈉；3.3中性洗滌劑稱取18.61g乙胺二四乙酸二鈉和6.81g四硼酸鈉同放入1000mL燒杯中，加少量約450mL水加熱熔解后，再加入30g十二烷基硫酸鈉和10mL乙二醇乙醚。稱取4.65g無水磷酸氫二鈉，置于另一燒杯中，加少量水，微微加熱溶解后傾入第一個(gè)燒杯中，稀釋至1000mL。此溶液pH在6.9～7.0（一般不需調(diào)整)；3.4磷酸鹽緩沖液：0.1mol/L的磷酸氫二鈉和0.1mol/L的磷酸二氫鈉溶液各500mL混勻；3.5α—淀粉酶溶液：12.5mgα-淀粉酶溶液，用磷酸鹽緩沖溶液稀釋至50mL；3.6無水亞硫酸鈉；3.7無水乙醇。4儀器與設(shè)備消煮裝置（接有冷凝器的300mL的錐形瓶和電爐）；玻璃砂芯濾器（濾板平均孔徑40～90μm）；抽濾裝置。5操作步驟5.1預(yù)處理如果樣品脂肪含量超過10%則要先用石油醚除去脂肪。除去脂肪的具體方法參照粗纖維的測(cè)定中。

5.2測(cè)定準(zhǔn)確稱取試樣1.0000～2.0000g(過40目)，于300mL的錐形瓶中，加入中性洗滌劑溶液100mL、0.5g無水亞硫酸鈉和2滴正辛醇，安裝好冷凝回流裝置，并用電爐開始加熱，5～10min之內(nèi)煮沸，從沸騰開始計(jì)時(shí)，保持微沸1h。把潔凈的玻璃砂芯坩堝置于105℃干燥4h，放入干燥器中冷卻至室溫，稱重。將錐形瓶?jī)?nèi)全部?jī)?nèi)容物移入玻璃砂芯坩堝，抽濾至干，分別用不少于30mL的沸水分3～5次洗滌殘?jiān)?。加入約25mL無水乙醇洗滌殘?jiān)?，抽干濾器，并洗凈濾器底部。濾器置于105℃烘箱中干燥4h。移入干燥器中冷卻稱重。6結(jié)果計(jì)算式中：m0——玻璃過濾器的質(zhì)量m1——玻璃過濾器及殘?jiān)馁|(zhì)量m——樣品質(zhì)量7注意事項(xiàng)7.1測(cè)定高蛋白飼料中中型洗滌纖維時(shí)，由于中性洗滌劑對(duì)蛋白質(zhì)的提取效率不高，因而殘留道德蛋白質(zhì)混雜在中型洗滌纖維中，使測(cè)定值偏高。7.2淀粉對(duì)中性洗滌纖維也有一定干擾，因此測(cè)定的中性洗滌纖維只為參考。如果想排除淀粉的干擾，則需要在文中①處加如下列步驟：加入5mLα—淀粉酶溶液，以置換殘?jiān)械乃缓笕〔Ａн^濾器的底部，加入約20mL淀粉酶溶液和幾滴甲苯，置于37℃培養(yǎng)箱中保溫1h。取出濾器，取下底部的塞子，抽濾，并用不少于500mL熱水分?jǐn)?shù)次洗滌酶液。備注：玉米、小麥測(cè)定中性洗滌纖維時(shí)必須加入α-淀粉酶九飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定1使用范圍本方法適用東北烘干玉米脂肪酸值的測(cè)定。2試劑1.1KOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液c(KOH)=0.05mol/L；取KOH溶液[c(KOH)=0.1mol/L]100mL，用乙醇（95%）稀釋到1升，然后按GB601定標(biāo)。1.2酚酞指示劑：2g/L乙醇溶液；1.3無水乙醇。3儀器實(shí)驗(yàn)室常用儀器4步驟將平均樣品按四分法制得約80g樣品粉碎，過0.45mm孔徑篩（40目），立即稱取10g樣品（精確到0.01g），于150mL具塞三角瓶?jī)?nèi)，加50mL無水乙醇，加塞振動(dòng)10分鐘，過濾，并用無水乙醇洗3次，每次15mL，然后加酚酞3滴，用0.05mol/LKOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到溶液呈微紅色，同時(shí)取90mL乙醇作空白。5計(jì)算脂肪酸值（mgKOH/100g）按下式計(jì)算式中：V——-樣品耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLV0——空白耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLc——KOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，mol/Lm——-樣品質(zhì)量，g6注意事項(xiàng)6.1玉米必須現(xiàn)粉現(xiàn)用，不可放置在空氣中時(shí)間過長(zhǎng)。6.2每次做次試驗(yàn)必須要做空白。6.3乙醇易揮發(fā)，氫氧化鉀乙醇溶液需要用橡膠塞密封保存，每隔一月重新標(biāo)定一次。十飼料中總磷的檢測(cè)1適用范圍1.1本方法規(guī)定了用釩鉬黃顯色光度法測(cè)定飼料中總磷量的方法。本方法適用于飼料原料及飼料產(chǎn)品中磷的測(cè)定。1.2本方法不適用于磷酸鹽{如磷酸氫鈣（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），磷酸二氫鈣}中各種磷的測(cè)定。2原理將試樣中的有機(jī)物破壞，使磷元素游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3絡(luò)合物，在波長(zhǎng)400nm下進(jìn)行比色測(cè)定。3試劑3.1鹽酸溶液：1＋1；3.2濃硝酸；3.3釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，加水200mL加熱溶解，冷卻后再加入250mL硝酸，另稱取鉬酸銨25g，加水400mL加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容至1000mL。此溶液應(yīng)避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用；3.450ug/l磷標(biāo)準(zhǔn)液：將磷酸二氫鉀在105℃干燥1h，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g（精確至0.0002g）溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀釋至刻度，搖勻。4儀器和設(shè)備4.1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；4.2分樣篩：孔徑0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量0.0001g；4.4分光光度計(jì)4.5比色皿：1cm；4.6馬福爐4.7瓷坩堝：50mL；4.8容量瓶：50、100、1000mL；4.9移液管：1.0、2.0、3.0、5.0、10mL；4.10可調(diào)溫電爐：1000W。5測(cè)定步驟5.1試樣制備取代表性樣品，經(jīng)四分法制得試樣250g，粉碎全過0.42mm(40目)篩，裝入樣品瓶?jī)?nèi)。5.2工作曲線的繪制準(zhǔn)確移取0.0﹑1.0﹑2.0﹑5.0﹑10.0﹑15.0ml磷標(biāo)準(zhǔn)溶液于50ml的容量瓶中，各加釩鉬酸銨10ml，定容，常溫下放10min以上，以0ml溶液為參比，用1cm比色皿，在400nm波長(zhǎng)下，測(cè)吸光度。以磷為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或做出回歸方程。5.3試樣的測(cè)定準(zhǔn)確移取試樣分解液1ml于50ml容量瓶中，加釩鉬酸銨10ml，定容，常溫下放置10min以上，用1cm比色皿在400nm波長(zhǎng)下測(cè)定試樣分解液的吸光度，在工作曲線上查得試樣的磷含量。6測(cè)定結(jié)果的計(jì)算及表述磷%=標(biāo)準(zhǔn)曲線查得含磷量/試樣質(zhì)量×移取試樣分解液體積×100 或代入磷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=1/KX+B/KY為測(cè)的樣品的吸光度，K、B是通過磷標(biāo)液計(jì)算出的7允許差含磷量0.5%以下，允許相對(duì)偏差10%；含磷量0.5%以上，允許相對(duì)偏差3%。8注意事項(xiàng)8.1配置一次礬鉬酸銨做一次磷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，磷標(biāo)準(zhǔn)曲影響其結(jié)果的準(zhǔn)確性。8.2炭化時(shí)應(yīng)在通風(fēng)柜內(nèi)操作。8.3轉(zhuǎn)移至容量瓶時(shí)應(yīng)小心，要保證試樣毫無損失。吸光度應(yīng)控制在0.2～0.7內(nèi)，8.4比色色皿的清洗方法：乙醚和無水乙醇（1:1）清洗，然后用水洗凈8.5移液管的精度及正確使用對(duì)結(jié)果的影響極大，務(wù)必注意。8.6干法灰化法不適用含磷酸二氫鈣{Ca(H2PO4)2}的飼料，水產(chǎn)料、含磷酸二氫鈣{Ca(H2PO4)2}、磷酸氫鈣（Ⅱ、Ⅲ）的飼料應(yīng)用濕法消化法處理樣品。8.7顯色劑的配制：偏釩酸銨加硝酸不易溶解，且不能加熱，應(yīng)加水使偏釩酸銨溶解后再加硝酸。十二飼料中磷酸氫鈣含量的檢測(cè)1適用范圍1.1本方法規(guī)定了用釩鉬黃顯色光度法測(cè)定飼料中磷酸氫鈣添加量的方法。1.2本方法適用于飼料中磷酸氫鈣（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氫鈣含量的測(cè)定。1.3本方法不適用于飼料中中總磷、植酸磷等測(cè)定。2原理將試樣中的磷酸氫鈣等磷酸鹽有稀鹽酸提取出來，經(jīng)離心分離出殘?jiān)?，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3，在波長(zhǎng)400nm下進(jìn)行比色測(cè)定。3試劑3.1鹽酸溶液：c(HCl)=1mol/L取90mL濃鹽酸（37%）于500mL水中。攪勻后，加水到1000mL。1＋1；3.2釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，加水200mL加熱溶解，冷卻后再加入250mL硝酸，另稱取鉬酸銨25g，加水400mL加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容1000mL。避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用；3.3磷標(biāo)準(zhǔn)液：將磷酸二氫鉀在105℃干燥1h，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，加硝酸3mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50μg/mL的磷標(biāo)準(zhǔn)液。4儀器和設(shè)備4.1實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽；4.2分樣篩：孔徑0.45mm(40目)；4.3分析天平：感量.0.0001g；4.4分光光度計(jì)：可在400nm下測(cè)定吸光度；4.5比色皿：1cm；4.6容量瓶：50、100mL；4.8移液管：1.0、2.0、3.0、5.0、10mL；5試樣制備5.1一般樣品取代表性樣品，經(jīng)四分法制得試樣250g，粉碎全過0.42mm(40目)篩，裝入樣品瓶?jī)?nèi)。5.2問題樣品直接取給動(dòng)物飼喂的飼料250g，粉碎全過0.42mm(40目)篩，裝入樣品瓶?jī)?nèi)。5.3空白樣品的制備按對(duì)應(yīng)飼料配方的比例，將各種原料（除去磷鈣外）用分析天平（千分之一）稱取對(duì)應(yīng)的量，并將配方中磷鈣的量用等量玉米粉代替，將上述各種原料充分混合，粉碎全過0.42mm(40目)篩，空白樣品至少制備50g。6測(cè)定步驟6.1樣品中磷鈣的提取稱取空白樣品（5.3）和待測(cè)樣品（5.1或5.2）各3.00g（準(zhǔn)確到0.0002g）分別放于100mL容量瓶中，同時(shí)各加70mL鹽酸（3.1），室溫下振蕩10min±0.5min，立刻用水定容到100.00mL，再靜置5min±0.5min，然后干過濾。收集濾液于干燥的三角瓶中。6.2提取液的顯色與測(cè)定取空白與待測(cè)樣品濾液（6.1）各5.00mL于50mL容量瓶中，加釩鉬酸銨顯色劑（3.2）10.00mL，室溫下顯色15min，用4500r/min的速度將顯色液離心3min，然后以空白樣品液為參比液，400nm下測(cè)定樣品液的吸光度。7測(cè)定結(jié)果的計(jì)算及表述樣品中磷鈣的含量（以P計(jì)）%=P×100×100/(m×5×1000000)=P1/m×500式中：m待測(cè)樣品的質(zhì)量，g；P1由磷標(biāo)準(zhǔn)曲線（或回歸方程）查的磷含量，μg。8注意事項(xiàng)8.1此法測(cè)定的磷為磷酸一二三鈣的總和。8.2步驟6.2只能離心,不能過濾。8.3用磷酸氫鈣中枸溶性磷的測(cè)定方法，測(cè)飼料中的磷鈣不準(zhǔn)，原因?yàn)椋褐菜徜@與金屬離子（銅、鐵、鋅、錳、鈣）形成的沉淀干擾大。8.4用飼料中總磷的含量來判斷磷鈣是否添加足量，也不可靠，原因：0.5%的磷鈣提供的磷=0.085%，已在總磷法誤差內(nèi)，GB/T18823-2002規(guī)定P=0.5%，P誤差=±0.1%。8.5此法也可作為定性判斷的方法，如果樣品顯色后黃色明顯深于空白，則樣品中加了磷鈣，反之，二者顏色相近，則樣品中沒加磷鈣。8.6每一品種都要單獨(dú)做空白，不可通用，原因：配方的差異。8.7植酸酶不會(huì)干擾此法，強(qiáng)酸性(pH＜2)下植酸酶失活。十三磷酸氫鈣中總磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的檢測(cè)1適用范圍1.1本方法規(guī)定了用重量法測(cè)定磷酸氫鈣中總磷的測(cè)定方法。1.2本方法適用于磷酸氫鈣（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氫鈣中總磷、水溶性磷、枸溶性磷含量的測(cè)定。1.3本方法不適用于飼料中中總磷、植酸磷等測(cè)定。2方法原理在酸性介質(zhì)中，試驗(yàn)溶液中的磷酸根全部與喹鉬檸酮形成磷鉬酸喹啉沉淀，過濾、干燥、稱量，計(jì)算出磷含量。3試劑和材料3.1鹽酸溶液：1+1；3.2喹鉬檸酮溶液的制備A液:稱取70g鉬酸鈉溶解于150mL水中B液:稱取60g檸檬酸溶解于150mL水中和85mL硝酸中；C液:在攪拌下將A液緩慢加入B液中D液:在100mL水中加入35mL硝酸和5mL喹啉，E液：將D液倒入到C液中，搖勻，放置24h，用坩堝式過濾器過濾，再加入280mL丙酮，用水稀釋至1000mL，混勻。并貯存于聚乙烯瓶中。3.3檸檬酸；3.4無水乙醇；3.5氨水；3.6中性檸檬酸銨溶液：溶解74g檸檬酸置于300mL水中，加69mL氨水，在酸度計(jì)控制下用氨水調(diào)節(jié)溶液pH值至7.0，用比重計(jì)測(cè)其相對(duì)密度為1.09（20℃），將溶液貯存于密封的瓶中備用（如果長(zhǎng)期使用，用前需要校正其酸度）。4儀器與設(shè)備4.1電烘箱：溫度能控制在180℃±2℃或250℃±10℃；4.2酸度計(jì)：分度值為0.2，配有玻璃電極和飽和甘汞電極；4.3比重計(jì)；4.4玻璃砂坩堝4﹟：孔徑5~15μm。5測(cè)定步驟5.1.總磷含量的測(cè)定5.1.1試驗(yàn)溶液A的制備稱取約1g試樣（磷酸二氫鈣0.8g），（準(zhǔn)確至0.0002g），置于100mL燒杯中，加10mL鹽酸溶液（3.1）和少量水，蓋上表面皿，煮沸10min。冷卻后移入250mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液為試驗(yàn)溶液A，用于磷含量、鈣含量的測(cè)定。5.1.2空白溶液的制備除不加試樣外，其他加入的試劑量與試驗(yàn)溶液的制備完全相同，并與試樣同時(shí)進(jìn)行同樣處理。5.1.3測(cè)定用移液管準(zhǔn)確移取20mL試驗(yàn)溶液A和空白溶液分別置于250mL燒杯中，加水至總體積約100mL，加入50mL喹鉬檸酮溶液（3.2），蓋上表面皿，于水浴中加熱至杯內(nèi)物溫度達(dá)75℃±5℃，保溫30s（在加入試劑和加熱過程中，不得使用明火，不得攪拌，以免生成凝塊）冷卻至室溫。在冷卻過程中攪拌3次～4次，用預(yù)先在180℃±5℃或者250℃±10℃下烘干至恒重的玻璃砂坩堝抽濾（4.4）。先將上層清液過濾，用傾析法洗滌沉淀5次～6次，每次用水約20mL，最后將沉淀轉(zhuǎn)移至玻璃砂坩堝中過濾，再用水洗滌沉淀3次～4次，將玻璃砂芯坩堝連同沉淀置于電烘箱中從溫度穩(wěn)定時(shí)計(jì)時(shí)，在180℃±2℃下烘45min，置于干燥器中冷卻至室溫，稱量，精確至0.0002g。5.3枸溶性磷含量的測(cè)定步驟稱取1g試樣（精確至0.0002g），置于250mL容量瓶中，加100mL檸檬酸銨溶液（3.6），將容量瓶置于65℃±2℃水浴中保溫1h，時(shí)常打開瓶蓋，每間隔15min搖動(dòng)一次，每次搖動(dòng)30s，取出容量瓶后冷卻至室溫，用水稀釋到刻度，搖勻。干過濾，棄去初始的20mL濾液，之后操作按總磷含量測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定并按照總磷含量計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。5.4.水溶性磷含量的測(cè)定稱取約0.5g試樣，精確至0.2mg，置于瓷（瑪瑙）研缽中，加水研磨，每次加25mL水，連續(xù)研磨4次，水溶液全部移取到250mL容量瓶中，搖動(dòng)30min（2次/s），用水稀釋至刻度，搖勻。干過濾，棄去初始20mL濾液，用移液管移取20mL濾液置于250mL燒杯中，之后按照按總磷含量測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定并按照總磷含量計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。6磷、枸溶性磷、水溶性磷含量分析結(jié)果的表述以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示總磷（P總、P枸、P水）含量（X1）的計(jì)算：式中：m1──試驗(yàn)溶液生成磷鉬酸喹啉沉淀的質(zhì)量，g；m2──空白溶液生成磷鉬酸喹啉沉淀的質(zhì)量，g；m──試樣的質(zhì)量，g；0.01400──磷鉬酸喹啉換算成磷的系數(shù)。允許差取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大。7測(cè)定時(shí)的注意事項(xiàng)7.1玻璃砂坩堝必須用4﹟，每次用畢都必須進(jìn)行有效的洗滌處理，以免因沉淀物堵塞濾控而影響過濾功效。具體洗滌方法：先用1:1氨水將玻璃砂坩堝浸泡30min，然后用自來水沖洗干凈，再用1：1鹽酸煮沸，用自來水沖洗干凈，最后放在抽濾瓶上，用自來水和純水各抽濾3次，烘干備用。7.2煮沸過程中應(yīng)控制好火候，防止液體濺出;抽濾時(shí)應(yīng)小心，應(yīng)保證試樣液毫無損失。7.2喹鉬檸酮溶液的制備：按順序加入，不可產(chǎn)生沉淀。7.3顆粒狀的產(chǎn)品必須研磨成細(xì)粉后，才可測(cè)定P枸、P水。7.4用比色法不能測(cè)定磷鈣的P總、P枸、P水。，否則，誤差較大。8總磷、枸溶性磷、水溶性磷的含義8.1總磷P總表示樣品中磷酸一二三鈣以及其他磷酸鹽中含磷的總量。8.2枸溶性磷P枸表示樣品中磷酸氫鈣和磷酸二氫鈣含量的和。8.3水溶性磷表示樣品中磷酸二氫鈣含量。8.4可認(rèn)為：磷酸二氫鈣的磷含量=P水磷酸氫鈣中磷含量=P枸-P水。磷酸三鈣中磷的含量=P總-P枸8.5磷酸氫鈣以P枸衡量質(zhì)量的好壞、磷酸二氫鈣以P水衡量質(zhì)量的好壞。十四磷酸鹽中總鈣的測(cè)定1適用范圍1.1本方法規(guī)定了用絡(luò)合滴定法測(cè)定磷酸氫鈣中總鈣的測(cè)定方法。1.2本方法適用于磷酸氫鈣（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及磷酸二氫鈣中總鈣含量的測(cè)定。2方法原理將樣品用酸溶解，溶液調(diào)pH值到強(qiáng)堿性，用EDTA標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定溶液中的鈣離子，鈣黃綠素—甲基百里香草酚藍(lán)為指示劑。3試劑與溶液3.1鹽酸羥胺：1+1；3.2三乙醇胺：1+1；3.3乙二胺；3.4鹽酸水溶液：1+1；3.5氫氧化鉀溶液（200g/L）：稱取20g氫氧化鉀溶于100mL水中；3.6淀粉溶液（10g/L）：稱取1g可溶性淀粉入200mL燒杯中，加5mL水潤(rùn)濕，加95mL沸水?dāng)嚢?，煮沸，冷卻備用（現(xiàn)用現(xiàn)配）；3.7孔雀石綠水溶液（1g/L）；3.8鈣黃綠素—甲基百里香草酚藍(lán)指示劑：0.10g鈣黃綠素與0.10g甲基麝香草酚藍(lán)與0.03g百里香酚酞、5g氯化鉀研細(xì)混勻，貯存于磨口瓶中備用；3.9鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.001g/mL）：稱取2.4974g于105℃～110℃干燥為3h的基準(zhǔn)物碳酸鈣，溶于40mL鹽酸（8.4）中，加熱趕除二氧化碳，冷卻，用水移至1000mL容量瓶中，稀釋至刻度；3.10乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(EDTA)約為0.01mol/L。用鈣標(biāo)液（3.9）按（4.2）標(biāo)定。4測(cè)定步驟4.1稱取約1g試樣（準(zhǔn)確至0.0002g），置于100mL燒杯中，加10mL鹽酸溶液（3.1）和少量水，蓋上表面皿，煮沸10min。冷卻后移入250mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此溶液為試驗(yàn)溶液A，4.2用移液管移取25mL試驗(yàn)溶液A，置于250mL錐形瓶中，加50mL水，加10mL淀粉溶液，加4mL三乙醇胺，加2mL乙二胺，加1滴孔雀石綠指示液，滴加氫氧化鉀溶液至無色，再過量滴加10mL，加0.1g鹽酸羥胺（每加一種試劑都要搖勻），加鈣黃綠素少許，在黑色背景下用EDTA標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至溶液由綠色熒光消失呈顯紫紅色為終點(diǎn)。5分析結(jié)果的表述鈣含量以鈣（Ca）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2計(jì)，數(shù)值以%表示，按式下式計(jì)算：式中：V—試驗(yàn)溶液所消耗的EDTA準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；c—EDTA標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；M—鈣的摩爾質(zhì)量，g/mol，M=40.08；m—試樣的質(zhì)量，g。取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.3%。十五石粉中鈣與鎂的測(cè)定1適用范圍1.1本方法規(guī)定了用絡(luò)合滴定法測(cè)定石粉中鈣與鎂的測(cè)定方法。1.2本方法適用于石粉中鈣與鎂含量的測(cè)定。2原理絡(luò)合滴定法，樣品酸溶解后，調(diào)節(jié)溶液到不同的pH值，分別測(cè)定試液中鈣和鎂的含量。3試劑與溶液3.1鹽酸羥胺：1+1；3.2三乙醇胺：1+1；3.3氨-氯化銨緩沖溶液（pH=10）；3.4氫氧化鉀溶液（200g/L）：稱取20g氫氧化鉀溶于100mL水中；3.5淀粉溶液（10g/L）：稱取1g可溶性淀粉入200mL燒杯中，加5mL水潤(rùn)濕，加95mL沸水?dāng)嚢瑁蠓?，冷卻備用（現(xiàn)用現(xiàn)配）；3.6孔雀石綠水溶液（1g/L）；3.7鈣黃綠素—甲基百里香草酚藍(lán)指示劑：0.10g鈣黃綠素與0.10g甲基麝香草酚藍(lán)與0.03g百里香酚酞、5g氯化鉀研細(xì)混勻，貯存于磨口瓶中備用；3.8鉻黑T指標(biāo)劑5g/L；3.9氨水10%；3.10乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(EDTA)約為0.02mol/L。用鈣標(biāo)液（3.9）按（4.2）標(biāo)定。4測(cè)定步驟4.1稱取樣品0.8g（精確到0.0002g），于小燒杯內(nèi)，加少量水濕潤(rùn)，蓋好表面皿，沿杯壁小心加入（1+1）鹽酸15mL，電爐上加熱煮沸2分鐘，若有少量不溶物可再加5mL（1+1）鹽酸，1mL濃硝酸再煮沸2分鐘，冷卻降溫后，用水定容到250mL容量瓶?jī)?nèi)，搖勻，為儲(chǔ)備液。4.2取25.00mL儲(chǔ)備液于三角瓶?jī)?nèi)，加20mL水，10mL10g/l淀粉，3mL（1+1）三乙醇胺，2～3滴孔雀石綠，用氫氧化鈉（30%）調(diào)至無色，并過量7mL，加少許鈣黃綠素-甲基百里香酚蘭混合指標(biāo)劑，用0.05mol/L的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到溶液呈淺紅色。消耗EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴的體積為V1mL。4.3取25.00mL儲(chǔ)備液于三角瓶?jī)?nèi)，加20mL水，3mL（1+1）三乙醇胺，再放一小塊pH試紙于瓶?jī)?nèi)，用10%氨水調(diào)節(jié)pH到中性，加氨-氯化銨緩沖溶液（pH=10）15mL，鉻黑T指標(biāo)劑（5g/L）3滴，用0.05mol/LEDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈純藍(lán)色，消耗EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴的體積為V2mL。同時(shí)作空白。5分析結(jié)果的表述鈣含量以鈣（Ca）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1計(jì)，數(shù)值以%表示，按式（1）式計(jì)算鎂含量以鈣（Mg）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2計(jì)，數(shù)值以%表示，按式（1）式計(jì)算式中：V——試驗(yàn)溶液所消耗的EDTA準(zhǔn)滴定溶液的體積，mL；C——EDTA標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度，mol/L；m——試樣的質(zhì)量，g。取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.3%。十六油脂檢測(cè)1過氧化值測(cè)定1.1原理試樣溶解在乙酸和三氯甲烷溶液中，與碘化鉀溶液反應(yīng)，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的碘。1.2試劑與溶液1.2.1冰乙酸1.2.2三氯甲烷：1.2.3乙酸與三氯甲烷混合液（體積比60：40）：將300mL冰乙酸與200mL三氯甲烷混合；1.2.4碘化鉀飽和溶液：14g碘化鉀容易10ml水中，避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。1.2.5硫代硫酸鈉溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，按GB/T601配制標(biāo)定；1.2.6硫代硫酸鈉溶液：c（Na2S2O3）=0.01mol/L，臨使用前標(biāo)定；由硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c（Na2S2O3）=0.1mol/L，臨使用前用新煮沸并已冷卻的蒸餾水稀釋，搖勻。1.2.7淀粉溶液：10g/L。將1g可溶性淀粉與少量冷蒸餾水混合，在攪拌的情況下溶于100mL沸水中，煮沸3min，立即從熱源上取下并冷卻?，F(xiàn)配現(xiàn)用。1.3分析步驟1.3.1稱取3-5g試樣，準(zhǔn)確至0.0001g，置于250ml碘量瓶中。1.3.2相碘量瓶中加入30ml乙酸-三氯甲烷混合液，立即蓋上塞子搖動(dòng)使試樣溶解，加入1.0ml飽和碘化鉀溶液，緊密蓋好瓶塞，并輕輕振搖0.5min，然后在暗處放置3min，取出加入100ml蒸餾水，搖勻后立即用0.01mol/l硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至淡黃色時(shí)（對(duì)于過氧化值含量很低的試樣，可先加淀粉指示劑，再用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定），加淀粉指示劑1ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，即為終點(diǎn)，記下消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積。1.3.3空白實(shí)驗(yàn)測(cè)定需進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，當(dāng)空白實(shí)驗(yàn)消耗0.01mol/L硫代硫酸鈉溶液{c（Na2S2O3）=0.01mol/L}超過0.1mL，應(yīng)更改試劑，重新對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。1.5結(jié)果表示1.5.1過氧化值P按式（1）計(jì)算：(單位meq/kg)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（１）式中：V——用于測(cè)定的硫代硫酸鈉溶液的體積，mL；V0——用于空白的硫代硫酸鈉溶液的體積，mL；c——硫代硫酸鈉溶液的濃度，mol/L；m——試樣的質(zhì)量，g。1.5.2過氧化值以毫摩爾每千克表示：過氧化值P′按式（2）計(jì)算：（單位mmol/kg）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．（2）1.6重復(fù)性短時(shí)間內(nèi)、同一操作者、采用相同的方法、對(duì)于同一份試樣、在同一實(shí)驗(yàn)室、相同儀器、獲得兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果。在過氧化值小于或等于5mmol/kg（10meq/kg）時(shí)，這兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值大于其平均值的10%的事例，不得超過5%。1.7注意事項(xiàng)滴定時(shí)要不斷腰帶，使碘從溶劑中釋放出來。2酸價(jià)的測(cè)定油脂中游離脂肪酸用氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，每克油脂消耗氫氧化鉀的毫克數(shù)稱為酸價(jià)（mgKOH/g）。2.1試劑2.1.1酚酞指示液；2.1.2石油醚-乙醇混合液；按石油醚-無水乙醇2：1混合，用0.1mol/L氫氧化鉀溶液中和至對(duì)酚酞指示液呈中性。2.1.3氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)液0.02mol/L，使用前用0.1mol/L的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稀釋。2.2操作步驟稱取2～5g試樣（精確至0.001g），置于錐形瓶中，加入50mL中性石油醚-乙醇混合液，并后加入酚酞指示液2滴～3滴，以0.1mol/L氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)液滴定，至初顯微紅色且30s內(nèi)不褪色為終點(diǎn)。2.3結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算酸價(jià)：式中：X——樣品酸價(jià)值（KOH），每克樣品中氫氧化鉀的毫克數(shù)，mg/g；V——樣品消耗氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積數(shù)，mL；c——?dú)溲趸洏?biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；m——試樣質(zhì)量，g；56.11——每毫升1mol/L氫氧化鉀溶液相當(dāng)氫氧化鉀毫克數(shù)。2.4重復(fù)性每個(gè)樣品做兩個(gè)平行樣，結(jié)果以算術(shù)平均值計(jì)算。3油脂TBA值的測(cè)定方法3.1原理油脂受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在532nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。3.2試劑3.2.1氯仿（分析純）；3.2.2三氯乙酸混合液；準(zhǔn)確稱取分析純?nèi)纫宜幔ǚ治黾儯?.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀釋至100mL。3.2.3硫代巴比妥酸溶液（TBA）0.02mol/L；準(zhǔn)確稱取TBA0.288g溶于水中，并稀釋至100mL（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清），然后稀釋至100mL。3.2.4丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000mL，此溶液每mL相當(dāng)于丙二醛100μg，置于冰箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取10mL，稀釋至100mL，此溶液每mL相當(dāng)于丙二醛10μg，備用。3.3測(cè)定步驟3.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取每相當(dāng)于丙二醛10μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置于納氏比色管中，加水至總體積為5mL，加入5mLTBA溶液，然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行，測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.3.2樣品測(cè)定準(zhǔn)確稱取融化均勻的油脂樣品3～10g，置于100mL有蓋三角瓶?jī)?nèi)，準(zhǔn)確加入50mL三氯乙酸混合液，在70℃水浴上振搖半小時(shí)，趁熱用雙層濾紙過濾，除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過濾一次。準(zhǔn)確移取上述濾液5mL置于25mL比色管內(nèi)，加入5mLTBA溶液，混勻，加塞，置于90℃水浴內(nèi)保溫40min，取出，室溫冷卻1h，搖勻，靜置2min，于532nm波長(zhǎng)比色，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到微克數(shù)。同時(shí)作空白試驗(yàn)。計(jì)算丙二醛含量（mg/kg）=C/m式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)，μg；m——樣品質(zhì)量，g。3.4注意事項(xiàng)：TBA水溶液在通風(fēng)柜中配制，用棕色瓶保存，有沉淀則不能使用；水浴時(shí)試管密封性要好，漏氣結(jié)果偏低。4皂化值的測(cè)定4.1原理皂化值（皂化價(jià)）系指中和1g油脂中所含全部游離脂肪酸和結(jié)合脂肪酸（甘油脂）所需氫氧化鉀的毫克數(shù)。油脂與氫氧化鉀乙醇溶液共熱時(shí)，發(fā)生皂化反應(yīng)，剩余的堿可用標(biāo)準(zhǔn)酸液進(jìn)行滴定，從而可計(jì)算出中和油脂所需的氫氧化鉀毫克數(shù)。4.2試劑和溶液4.2.1無水乙醇4.2.2酚酞指示劑1g/L4.2.3鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mol/L4.2.4氫氧化鉀乙醇溶液0.5mol/L稱取化學(xué)純氫氧化鉀34g，溶于20～30mL水中，加無水乙醇980mL，搖勻，靜置1h，過濾，濾液貯于裝有蘇打石灰球管的玻璃瓶中）。4.3測(cè)定步驟稱取2～3g樣品（稱準(zhǔn)至0.0002g），準(zhǔn)確加入0.5mol/L氫氧化鉀乙醇溶液25.00mL，在水浴（90℃）上加熱回流30min，不時(shí)搖動(dòng)。取下冷凝管，冷卻后加入數(shù)滴酚酞指示劑，用0.5mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至紅色消失。同時(shí)做空白試驗(yàn)。4.4結(jié)果計(jì)算皂化價(jià)按下式計(jì)算：式中：c——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V——試樣耗用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液之體積，mL；V0——空白試驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液之總體積，mL；m——試樣的質(zhì)量，g；56.1——與1.0000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液1.00mL相當(dāng)于氫氧化鉀的克數(shù)。4.5皂化率的計(jì)算：注：豆油酸價(jià)一般為：0.7mgKOH/g，理論皂化值一般為：190-195mgKOH/g；花生油酸價(jià)一般為：3.5mgKOH/g，理論皂化值一般為：188~195mgKOH/g；動(dòng)物性油脂理論皂化價(jià)為195mgKOH/g；魚油酸值一般為：0.7mgKOH/g，理論皂化值一般為：200-210mgKOH/g一般植物油的皂化價(jià)如下：棉子油189~198，花生油188~195，大豆油190~195，菜子油170~180，芝麻油188~195，葵子油188~194，茶子油188~196。5油脂含皂量測(cè)定法5.1原理油脂中的含皂量，即油脂經(jīng)過堿煉后，殘留在油脂中的皂化物數(shù)量(以油酸鈉計(jì))。5.2試劑5.2.1石油醚（沸點(diǎn)60～90℃）；5.2.2中性乙醇95％；5.2.3甲基紅乙醇溶液2g/L；5.2.4硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(1/2H2SO4)=0.02mol/L。5.3測(cè)定方法稱取混勻試樣約10g，注入干燥的錐形瓶中，加入乙醇10mL和石油醚60mL，搖動(dòng)，使試樣溶解后，緩慢加入80℃的蒸餾水80mL，振搖使成乳狀，滴入3滴甲基紅指示劑，趁熱逐滴加入硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（c(1/2H2SO4)=0.02mol/L），每加一滴振搖一次，滴至下層的溶液顯出微紅色為止。5.4結(jié)果計(jì)算油脂含皂量按下列公式計(jì)算：

式中：V——滴定用去的硫酸溶液體積，mL；c——硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，mol/L；W——試樣重量，g；0.304——與1.00mL硫酸{c(1/2H2SO4)=1.000mol/L}相當(dāng)于油酸鈉的克數(shù)。每個(gè)樣品稱取兩份試料，以其算術(shù)平均值報(bào)告結(jié)果，結(jié)果取至小數(shù)點(diǎn)二位。平行試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過0.02％。6油脂碘價(jià)的測(cè)定6.1適用范圍植物油脂和動(dòng)物油脂6.2試劑與溶液6.2.1韋氏液的配制：稱取三氯化碘7.9g和純碘8.7g分別溶于冰乙酸中，合并兩液，再用冰乙酸稀釋至1L，貯于棕色瓶?jī)?nèi)。6.2.2KI溶液150g/L；6.2.3硫代硫酸鈉標(biāo)液滴定溶液C（NaS2O3）=0.1mol/L）；6.2.4三氯甲烷CHCl3AR。6.3步驟按附表稱取試樣（準(zhǔn)確至0.0002g）于干燥的碘量瓶中，加20mLCHCl3溶解試樣，加25.00mL韋氏液立即加塞，以KI溶液封口，搖勻后，在20±5℃條件下，置黑暗處30min（碘價(jià)在130以上時(shí)放置1h），到時(shí)立即加入KI溶液20mL和水100mL，用[c（NaS2O3）=0.1mol/L]硫代硫酸鈉標(biāo)液滴定至淺黃色時(shí)，加入1mL5g/L淀粉指示劑，滴定至蘭色消失。同樣條件做空白兩個(gè)，取平均值。6.4結(jié)果的表示和計(jì)算碘價(jià)按下式計(jì)算式中：V1——試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2——空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；c——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；m——試樣的質(zhì)量，g；0.1269——與1.00ml硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（NaS2O3）=1.000mol/L]的相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜牡獾馁|(zhì)量。附表：碘價(jià)數(shù)值與試樣用量碘價(jià)試樣用量范圍（g）碘價(jià)試樣用量范圍（g）200.8461～1.58651200.2115～0.2644400.6346～0.79351400.1813～0.2266600.4231～0.52881600.1587～0.1983800.3173～0.39661800.1410～0.17621000.2538～0.31732000.1269～0.15866.5注意事項(xiàng)6.5.1稱取油脂的質(zhì)量一定要合適，如果還沒有滴定就到終點(diǎn)，則減少稱取樣品質(zhì)量，重新測(cè)定。6.5.2每次測(cè)定碘價(jià)的過程中都要相應(yīng)的測(cè)定空白。6.5.3韋試液流入錐形瓶的時(shí)間要一致。6.5.4滴定接近終點(diǎn)為淡黃色時(shí)，加入淀粉后要?jiǎng)×艺鹗?，以保證上三氯甲烷中的碘全部被萃取出來。6.5.5冬天韋試液會(huì)有部分先結(jié)冰，此時(shí)不能繼續(xù)使用，需要把韋試液放置在溫度25℃的避光環(huán)境中操作。7油脂中礦物油的定性檢測(cè)7.1原理油脂可以被堿皂化，生成易溶于水的皂，而礦物油屬于烴類，不可被皂化，也不溶于水。7.2步驟取約1mL樣品于干燥的250mL三角瓶中，加1mL飽和的NaOH溶液，30mL無水乙醇，在電爐上回流5min，取下三角瓶，加入50mL沸水，如溶液出現(xiàn)分層或渾濁現(xiàn)象，可判定樣品中含有礦物油成份。本法檢出限量為0.5%。8生物柴油的檢驗(yàn)方法1將油樣100mL移入精餾裝置內(nèi)稱重，加熱，收集150～250℃的餾分。方法2在已烘干恒重的100mL燒杯內(nèi)加50～60mL油樣，稱重，將燒杯放到電爐上加熱到250℃，并保持20min，冷卻后稱重，其加熱減重小于1%的為正常，若大于2%則可疑摻假，若在1～2%之間須結(jié)合其他方法作進(jìn)一步檢測(cè)。方法3煙點(diǎn)的差異，在方法2中如在140℃左右油樣就開始冒煙則可疑摻假，油脂的煙點(diǎn)（植物和動(dòng)物油脂）都在190℃以上。9混合脂的檢測(cè)原理：混合脂溶于水，油脂不溶水。步驟：50mL油樣加50mL水，震蕩1min后靜止觀察分層情況。十七揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定1原理揮發(fā)性鹽基氮是指動(dòng)物性食品由于酶和細(xì)菌的作用，在腐敗過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液中蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計(jì)算含量。2試劑2.1氧化鎂混懸液（10g/L）：稱取1.0g氧化鎂，加100mL水，振搖成混懸液；2.2硼酸吸收液（20g/L）；2.3鹽酸[c(HCl)=0.010mol/L]標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液；2.4甲基紅—乙醇指示劑（1g/L）；2.5次甲基藍(lán)指示劑（1g/L）。臨用時(shí)將上述兩種指示液等量混合為混合指示液。3儀器3.1自動(dòng)定氮儀；4分析步驟4.1試樣處理：取3g左右試樣（粉碎好的樣品）于200mL磨口三角瓶中，加100mL蒸餾水于振蕩器上振蕩30分鐘，4000轉(zhuǎn)離心。4.2蒸餾滴定：將盛有25mL吸收液及2-3滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，準(zhǔn)確吸取5ml加10mL氧化鎂混懸液，通入蒸汽，進(jìn)行蒸餾，蒸餾4min即停止，用蒸餾水沖洗冷凝管下端，在蒸餾1分鐘（總體積不超過150ml）用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定，終點(diǎn)至紅色。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。5結(jié)果計(jì)算試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量按下式進(jìn)行計(jì)算。式中：X——試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量，mg/100g；V1——測(cè)定用樣液消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；V2——試劑空白消耗鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；C——鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度，mol/L；14——與1.00mI鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg；m——試樣質(zhì)量，g。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。6精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。十八大豆制品中尿素酶活性的兩種快速檢測(cè)法酚紅法1原理酚紅指示劑在pH6.4~8.2時(shí)由黃變紅，大豆制品中所含的尿素酶，在室溫下可將尿素水解產(chǎn)生氨。釋放的氨可使酚紅指示劑變紅，根據(jù)變紅的時(shí)間長(zhǎng)短來判斷尿素酶活性的大小。2儀器和試劑2.1粉碎裝置粉碎時(shí)應(yīng)不產(chǎn)生強(qiáng)烈發(fā)熱（如研缽、球磨機(jī)）；2.2天平感量0.01g；2.3試管直徑