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文檔簡介

摘要:隨著基因組計(jì)劃的順利實(shí)施,大量的生物信息被解析,分離和鑒定差異表達(dá)基因已勢(shì)、抗逆性基因研究中的應(yīng)用等。agriculturalchemicalsresearchwasalsoexploredinthep差別顯示技術(shù)正是對(duì)組織特異性表達(dá)的基因進(jìn)行分離的次實(shí)現(xiàn)了同時(shí)快速靈敏地檢測(cè)到真核細(xì)胞中大部分的差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄體的目的[3]。近些年來,壹系列的差異表達(dá)基因。這些方法各具獨(dú)特優(yōu)點(diǎn),但同術(shù)的原理和優(yōu)缺點(diǎn)比較已有許多綜述總結(jié)。[5]結(jié)構(gòu)的優(yōu)化非常重要。退火溫度的高低決定引物是法則可較好地消除初始反應(yīng)的非特異性[8]。多聚脫氧次黃苷[poly(dI)],壹般由5個(gè)脫氧次黃苷(dI)組成,在控制引物的退火溫度時(shí)起來,不參和退火識(shí)別,而在較高溫度時(shí)形成線性分子,而使整條引物打開,參和退火識(shí)別;驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性大大提高。[12]假陽性。乳動(dòng)物早期生殖發(fā)育相關(guān)的分子調(diào)控機(jī)制提供了有利證據(jù)。為陽性對(duì)照。(2)混勻后稍離心。5×第壹鏈緩沖液2μl10μlMMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(200u/μl)1μl5μl總5μl25μl(5)每管加入5μl,混勻后稍離心。(8)將2μl反應(yīng)液分別轉(zhuǎn)至新管中(新管標(biāo)號(hào)為1B,2B,PCB等)。②準(zhǔn)備其它PCR試劑的混合液:(在另壹管中加入)成分每管(μl)所需管數(shù)(n=14)混勻后稍離心。③將17μlPCR混合液加入各反應(yīng)管,則各管總體積為20μl。⑥反應(yīng)結(jié)束后置-20℃保存?zhèn)溆谩?3)每個(gè)dd-PCR反應(yīng)取出5μl于壹新微量離心管中,加5μlloadingbuffer,混勻,離(4)停止預(yù)電泳,沖洗加樣孔。:((8)X光片-70℃曝光過夜或更長時(shí)間(根據(jù)射線強(qiáng)度而定)。清為模板。(3)以原引物擴(kuò)增:引物P2.5μl引物T2.5μlTaq酶2μl3錢前,程式華,水稻遺傳學(xué)和功能基因組學(xué)[M]1北京9郭蕾,程英豪,王紫1北京大學(xué)學(xué)報(bào)(

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