凝集反應(yīng)實驗

凝集反響實驗抗原抗體反響的類型1．沉淀反響√2．凝集反響3．補(bǔ)體參與的反響4.中和反響5.免疫標(biāo)記凝集反響

是指顆粒性抗原(紅細(xì)胞、細(xì)菌等)或可溶性抗原〔或抗體〕與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后與相應(yīng)抗體〔或抗原〕發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類。凝集反響的類型一、直接凝集反響(directagglutination)是指細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集。反響中的抗原稱為凝集原，參與反響的抗體稱為凝集素。將的可溶性抗原〔或抗體〕吸附或耦聯(lián)到與免疫無關(guān)的載體顆粒外表,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體〔或抗原〕作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見的凝集現(xiàn)象，稱之。載體不同可分：紅細(xì)胞－間接血凝試驗聚苯乙烯乳膠－間接乳膠凝集試驗活性炭－間接炭凝集試驗。二、間接凝集反響1、正向間接凝集反響用于檢測標(biāo)本中的抗體抗體載體微球可溶性抗原免疫微球免疫微球凝集本試驗簡便、快速、敏感性和特異性高、本錢低。2、反向間接凝集反響用于檢測標(biāo)本中的抗原本法快速、敏感性和特異性高+凝集抗原載體顆粒抗體抗體致敏顆粒A、正向：診斷試劑為抗原致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗體，用于檢測標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。

3、間接凝集抑制反響又稱為膠乳凝集抑制試驗抗體待測抗原免疫微球免疫微球不凝集結(jié)果：免疫微球不凝集為陽性(標(biāo)本)第一種情況：抗體免疫微球免疫微球凝集標(biāo)本中無抗原結(jié)果：免疫微球凝集為陰性第二種情況：3間接凝集抑制反響B(tài)、反向：診斷試劑為抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測標(biāo)本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。間接凝集反響的應(yīng)用間接凝集反響具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設(shè)備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為應(yīng)用。〔一〕抗原的檢測人絨毛膜促性腺激素檢測乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕的間接血凝試驗?！惨弧晨贵w的檢測

梅毒抗體類風(fēng)濕因子RF一、正向間接凝集試驗梅毒快速血漿反響素試驗RapidPlasmaReagin〔RPR〕RPR試驗感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長時間，IgG抗體仍可通過記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測出梅毒的免疫性〔一〕用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。〔westernblottest〕〔FTA-ABS〕在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類。臨床上采用高效的抗HCGβ亞基可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。一、直接凝集反響(directagglutination)一、梅毒快速血漿反響素試驗〔RPR〕2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗本方法能快速簡單地測定梅毒病人血清中的反響素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測梅毒病人療效。2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗結(jié)果：免疫微球凝集為陰性可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。結(jié)果：免疫微球凝集為陰性梅毒螺旋體抗原血清試驗：用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。梅毒的免疫性〔二〕另一種具有抗體性質(zhì)的物質(zhì)叫反響素〔reagin〕，是梅毒螺旋體破壞人體組織過程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。反響素一般在感染后5～7周產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。梅毒感染的實驗室診斷〔一〕非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗〔二〕梅毒螺旋體抗原血清試驗〔三〕梅毒確認(rèn)試驗

非梅毒螺旋體血清試驗這類試驗的抗原分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來檢測抗心磷脂抗體。由于這些試驗具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似。可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。非特異性類脂抗體測定1、性病研究實驗室試驗〔VDRL〕2、不加熱血清反響素試驗〔USR〕3、快速血漿反響素試驗〔RPR〕4、甲苯胺紅試驗〔TRUST〕梅毒螺旋體抗原血清試驗：用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。1、梅毒螺旋體血球凝集試驗〔TPHA〕2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗〔TPPA)3、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗〔TP-ELISA〕

特異性梅毒血清學(xué)試驗梅毒確認(rèn)試驗〔三〕

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗〔FTA-ABS〕2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗〔westernblottest〕一、梅毒快速血漿反響素試驗〔RPR〕[實驗原理]梅毒患者血清中存在著能與VDRL(類脂質(zhì))抗原發(fā)生凝集反響的反響素，本試劑利用這一原理，將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒外表，當(dāng)待測血清中存在反響素時，即與其發(fā)生凝集反響，出現(xiàn)肉眼可見的黑色凝塊。一、梅毒快速血漿反響素試驗〔RPR〕[用途]本方法能快速簡單地測定梅毒病人血清中的反響素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測梅毒病人療效。HCG是一種不隨胎盤重量增加而分泌增長的胎盤激素經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。凝集反響的類型2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。3，先兆流產(chǎn)和不完全流產(chǎn)的診斷和監(jiān)測經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。B、反向：診斷試劑為抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測標(biāo)本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。反響素一般在感染后5～7周產(chǎn)生。6，血凝抑制試驗：載體不同，吸附于RBC上一、直接凝集反響(directagglutination)4、甲苯胺紅試驗〔TRUST〕在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類。一、梅毒快速血漿反響素試驗〔RPR〕假設(shè)試驗出現(xiàn)明顯的凝集為陰性反響，即HCG陰性；定性實驗呈弱陽性或陽性者必須做定量實驗才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋〔原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32〕然后對每個稀釋按定性實驗方法再進(jìn)行測定并判斷結(jié)果。感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長時間，IgG抗體仍可通過記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測出是指細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集。二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗而β亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗實驗條件：在23?c—29?c度的環(huán)境下進(jìn)行。1、性病研究實驗室試驗〔VDRL〕本法快速、敏感性和特異性高1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗載體不同可分：二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗3，先兆流產(chǎn)和不完全流產(chǎn)的診斷和監(jiān)測RapidPlasmaReagin〔RPR〕2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗〔TPPA)試劑與器材RPR試劑梅毒陽性對照梅毒陰性對照紙片專用滴管，針頭，橡皮頭操作方法

1.分別吸取30微升梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中。2.另吸取30微升待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一個圓圈中。3.用專用針頭，滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。結(jié)果判斷1.陰性反響〔—〕：可見均勻的抗原顆粒而無凝集物。2.弱陽性反響〔+——++〕：可見較小的黑色凝集物。3.陽性反響〔+++——++++〕：可見中等或較大的黑色凝塊，溶液清亮。實驗討論1.實驗條件：在23?c—29?c度的環(huán)境下進(jìn)行。2.RPR試劑在使用前應(yīng)充分搖勻。3.血清中參加試劑后充分振蕩使其混勻。4.定性實驗呈弱陽性或陽性者必須做定量實驗才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋〔原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32〕然后對每個稀釋按定性實驗方法再進(jìn)行測定并判斷結(jié)果。實驗討論5.本實驗只為過篩試驗，實驗呈弱陽性或陽性反響者，需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析判斷，同時再做特異性密螺旋體實驗加以確診。二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗

妊娠試驗—HCG測定HCG：

人絨毛膜促性腺激素，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大HCG是一種不隨胎盤重量增加而分泌增長的胎盤激素HCG的結(jié)構(gòu)

結(jié)構(gòu)中包括α與β兩個非共價鍵結(jié)合的亞基。α亞基與LH，F(xiàn)SH，及TSH的亞基相似，能與這些激素產(chǎn)生交叉免疫反響而β亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。臨床上采用高效的抗HCGβ亞基現(xiàn)試劑盒為HCG-β試劑陰性反響〔—〕：可見均勻的抗原顆粒而無凝集物。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果?！踩趁范敬_認(rèn)試驗專用滴管，針頭，橡皮頭感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。結(jié)果：免疫微球凝集為陰性由于這些試驗具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似。將的可溶性抗原〔或抗體〕吸附或耦聯(lián)到與免疫無關(guān)的載體顆粒外表,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體〔或抗原〕作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見的凝集現(xiàn)象，稱之。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類。檢測乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕的間接血凝試驗。〔二〕梅毒螺旋體抗原血清試驗本試驗簡便、快速、敏感性和特異性高、本錢低。2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗〔TPPA)HCG檢測方法

1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗2，單克隆抗體膠體金試驗3，化學(xué)發(fā)光免疫法4，放射免疫技術(shù)5，膠乳凝集抑制實驗6，血凝抑制試驗：載體不同，吸附于RBC