食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

食品微生物檢驗(yàn)采樣方法第一篇：食品微生物檢驗(yàn)采樣方法食品微生物檢驗(yàn)采樣方法按照上述采樣方案,能采取最小包裝的樣品就采取完整包裝,必須拆包裝取樣的應(yīng)按無菌操作進(jìn)行。不同類型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法:1.液體樣品：充分混勻,以無菌操作開啟包裝,用100mL無菌注射器抽取,注入無菌容器。2半固體樣品：以無菌操作拆開包裝,用無菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品,放入無菌容器。3.固體食品：大塊整體食品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部,注意樣品的代表性;小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品,放入無菌容器。若為檢驗(yàn)食品的污染情況，可取表層樣品；若為檢驗(yàn)食品品質(zhì)的情況，應(yīng)從深部取樣。4.冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取;大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍塊上舉取樣品,也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入容器。固體食品和冷凍食品的取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康?若需檢驗(yàn)食品污染情況,可取表層樣品;若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況,應(yīng)取深部樣品。5.生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)(1)車間用水。自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水;湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。(2)車間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。用5cm2孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積。若所采表面干燥,則用無菌稀釋液潤濕棉簽后擦拭;若表面有水,則用干棉簽擦拭,擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。(3)車間空氣采樣。直接降塵法。將5個(gè)直徑90mm的普通營養(yǎng)瓊脂平板分別置于車間的四角和中部,打開平皿蓋5min,然后蓋蓋送檢。第二篇：食品微生物檢驗(yàn)總結(jié)1.食品微生物檢驗(yàn)是應(yīng)用微生物學(xué)的理論與方法，研究外界環(huán)境和食品中微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)、活動(dòng)規(guī)律、對(duì)人和動(dòng)物健康的影響及其檢驗(yàn)方法與指標(biāo)的一門學(xué)科。2.食品微生物檢驗(yàn)指標(biāo)：（1）菌落總數(shù)：指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后1g[1ml或1cm2（表面積）]檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。（2）大腸菌群：指一群在37攝氏度培養(yǎng)24小時(shí)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌。（3）致病菌：即能夠引起人們發(fā)病的細(xì)菌。3.ICMSF取樣方案：A.三級(jí)法用做菌落總數(shù)和大腸菌群；B.二級(jí)法用做致病菌。根據(jù)食品危害程度和指標(biāo)嚴(yán)重程度劃分。4.美國FDA取樣方案P69自已畫圖5.樣品可分為大樣、中樣、小樣。要準(zhǔn)確區(qū)分。大樣指一整批；中樣是從樣品各部分取的混合樣，一般為200g;小樣又稱為檢樣，一般以25g為準(zhǔn)，用于檢樣.6.食品常用的采樣方法：（1）液體食品：充分混勻，用無菌操作拆開包裝，用100ml無菌注射器抽取，注入無菌盛樣容器。（2）半固體食品：用無菌操作拆開包裝，用無菌勺子從幾個(gè)部位挖取樣品，放入無菌盛樣容器。（3）固體樣品：大塊整體食的代表性，小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無菌盛樣容器（4）冷凍食品：大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取，大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍快上鋸取樣品，也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品，放入無菌盛樣容品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取，割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部，注意樣品器（5）若需檢驗(yàn)食品污染情況，可取表層樣品；若需檢驗(yàn)其品質(zhì)情況，應(yīng)取深部樣品。7.樣品的制備是指對(duì)所采集的樣品再進(jìn)行分取、粉碎以及混勻等過程。制備的方法可以根據(jù)被檢食品的性狀和檢驗(yàn)要求，采取剪碎振搖法、搗碎均質(zhì)法、胃蠕動(dòng)均質(zhì)法、研磨法等。8.檢樣處理：25+225做成一個(gè)均勻的1：10的10倍遞增稀釋液。9.菌落總數(shù)的測(cè)定：自已畫示意圖菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序水樣做幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋度選擇3個(gè)適宜稀釋度，各取1ml加入到滅菌平皿內(nèi)每個(gè)平皿內(nèi)加入45攝氏度左右的適量瓊脂（36+-1）攝氏度（24+-1）h菌落計(jì)數(shù)報(bào)告10.大腸菌群的檢驗(yàn):自已畫示意圖大腸桿菌為革蘭氏陰性菌（1）檢樣的處理（2）初發(fā)酵（3）分離培養(yǎng)(4）證實(shí)實(shí)驗(yàn)（5）報(bào)告：查MPN表11.致病菌的檢驗(yàn)：自已畫示意圖（1）沙門氏菌的檢驗(yàn)：沙門氏菌為革蘭氏陰性菌A.增菌：凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌。B選擇性增菌C分離D生化實(shí)驗(yàn)E血清學(xué)檢驗(yàn)（2）金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌A檢樣的處理B增菌C分離培養(yǎng)D證實(shí)實(shí)驗(yàn)第三篇：食品微生物檢驗(yàn)的一般流程食品微生物檢驗(yàn)的一般流程食品微生物檢驗(yàn)是一門應(yīng)用微生物學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)方法的一門科學(xué)，是對(duì)食品和微生物的存在與否及種類和數(shù)量的驗(yàn)證。眾所周知，在生物科學(xué)中，微生物學(xué)是一門實(shí)踐性最強(qiáng)的學(xué)科之一，它有一套自己獨(dú)特的研究方法。要學(xué)習(xí)好微生物檢驗(yàn)，必須具有醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)、食品微生物學(xué)、傳染病學(xué)、病理學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)，要了解食物中毒的臨床癥狀和流行病學(xué)，熟悉各種致病菌的生物學(xué)特性；掌握各種致病菌、霉菌和病毒的檢驗(yàn)程序。食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟，可按圖1的程序圖進(jìn)行，此圖對(duì)各類食品各項(xiàng)微生物指標(biāo)的檢驗(yàn)具有一定的指導(dǎo)性。一、檢驗(yàn)前準(zhǔn)備(1)準(zhǔn)備好所需的各種儀器，如冰箱、恒溫水浴箱、顯微鏡等。(2)各種玻璃儀器，如吸管、平皿、廣口瓶、試管等均需刷洗干凈(121℃20min)或干法(160℃一170℃，2h)滅菌，冷卻后送無菌室備用(3)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑、藥品，做好普通瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基，根據(jù)需要分裝試管或滅菌后傾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中備用。(4)無菌室滅菌；如用紫外燈法滅菌，時(shí)間不應(yīng)少于45mln，關(guān)燈半小時(shí)后方可進(jìn)入工作；如用超凈工作臺(tái)，需提前半小時(shí)開機(jī)。必要時(shí)進(jìn)行無菌室的空氣檢驗(yàn)，把瓊脂平板暴露在空氣中15min，培養(yǎng)后每個(gè)平板上不得超過15個(gè)菌落。(5)檢驗(yàn)人員的工作衣、帽、鞋、口罩等滅菌后備用。工作人員進(jìn)入無菌室后．實(shí)驗(yàn)沒完成前不得隨便出入無菌室。二、樣品的采集與處理在食品的檢驗(yàn)中，樣品的采集是極為重要的一個(gè)步驟。所采集的樣品必須具有代表性，這就要求檢驗(yàn)入員不但要掌握正確的采樣方法，而且要了解食品加工的批號(hào)、原料的來源、加工方法、保藏條件、運(yùn)輸、銷售中的各環(huán)節(jié)，以及銷售入員的責(zé)任心和衛(wèi)生知識(shí)水平等。樣品可分為大樣、中樣、小樣三種。大樣指一整批，中樣是從樣品各部分取的混合樣，一般為200g小樣又稱為檢樣，一般以25g為準(zhǔn)，用于檢驗(yàn)。樣品的種類不同，采樣的數(shù)量及采樣的方法也不一樣。但是，一切樣品的采集必須具有代表性，即所取的樣品能夠代表食物的所有成分。如果采集的樣品沒有代表性，即使一系列檢驗(yàn)工作非常精密、淮確，其結(jié)果也毫無價(jià)值，甚至?xí)霈F(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)論。取樣及樣品處理是任何檢驗(yàn)工作中最重要的組成部分，以檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性來說，實(shí)驗(yàn)室收到的樣品是否具代表性及其狀態(tài)如何是關(guān)鍵問題。如果取樣沒有代表性或?qū)悠返奶幚聿划?dāng)，得出的檢驗(yàn)結(jié)果可能毫無意義。如果根據(jù)一小份樣品的檢驗(yàn)結(jié)果去說明一大批食品的質(zhì)量或一起食物中毒的性質(zhì)，那么設(shè)計(jì)一種科學(xué)的取樣方案及采取正確的樣品制備方法是必不可少的條件。(一)食品微生物檢驗(yàn)的取樣方案采用什么樣的取樣方案主要取決于檢驗(yàn)的目的．例如用一般的食品的衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)去判定一批食品合格與否；查找食物中毒病原微生物；鑒定畜禽產(chǎn)品中是否含有人獸共患病原體等等。目的不同，取樣方案也不同。1．食品衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)的取樣方案目前國內(nèi)外使用的取樣方案多種多樣，如一批產(chǎn)品采若干個(gè)樣后混合在一起檢驗(yàn)，按百分比抽樣；按食品的危害程度不同抽樣；按數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法決定抽樣個(gè)數(shù)等等。不管采取何種方案，對(duì)抽樣代表性的要求是一致的。最好對(duì)整批產(chǎn)品的單位包裝進(jìn)行編號(hào)，實(shí)行隨機(jī)抽樣。下而列舉當(dāng)今世界上較為常見的幾種取樣方案。(1)ICMSF的取樣方案國際食品微生物規(guī)范委員會(huì)(簡(jiǎn)稱IcMSF)的取樣方案是依據(jù)事先給食品進(jìn)行的危害程度劃分來確定的，將所有食品分成三種危害度，I類危害：老人和嬰幼兒食品及在食用前可能會(huì)增加危害的食品5E類危害：立即食用的食品，在食用前危害基本不變5a類危害：食用前經(jīng)加熱處理，危害減小的食品。另外，將檢驗(yàn)指標(biāo)對(duì)食品衛(wèi)生的重要程度分成一般、中等和嚴(yán)重三檔，根據(jù)以上危害度的分類，又將取樣方案分成二級(jí)法和三級(jí)法。①二級(jí)法：設(shè)定取樣數(shù)n，指標(biāo)值m，超過指標(biāo)值m的樣品數(shù)為c，只要c＞o，就判定整批產(chǎn)品不合格。⑧三級(jí)法：設(shè)定取樣數(shù)n，指標(biāo)值m，附加指標(biāo)值M，介于m與M之間的樣品數(shù)c。只要有一個(gè)樣品值超過M或C規(guī)定的數(shù)就判整批產(chǎn)品不合格。具體使用方法見表1。(2)美國FDA的取樣方案食R9D藥品管理局(FDA)的取樣方案與IcM5F的取樣方案基本一致，所不同的是嚴(yán)重指標(biāo)苗所取的15、30、60個(gè)樣可以分別混合，混合的樣品量最大不超過375g。也就是說所取的樣品每個(gè)為100g，從中取出25g，然后將15個(gè)25g混合成一個(gè)375g樣品，混勻后再取258作為試樣檢驗(yàn)，剩余樣品妥善保存?zhèn)溆谩?3)世界糧農(nóng)組織(FAo)規(guī)定的食品微生物質(zhì)量1979年版FA()食品與營養(yǎng)報(bào)告中的食品質(zhì)量控制手吩的微生物學(xué)分析中列舉了各種食品的微生物限量標(biāo)準(zhǔn)，由于是按ICMsF的取樣方案判定的，所以在此引用，見表2。2．食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣當(dāng)懷疑發(fā)生食物中毒時(shí)，應(yīng)及時(shí)收集可疑中毒源食品或餐具物、糞便或血液等。3．人畜共用病病原微生物檢驗(yàn)的取樣當(dāng)懷疑某一動(dòng)物產(chǎn)品可能帶有入獸共患病病原體時(shí)，應(yīng)結(jié)合知識(shí)，采取病原體最集中、最易檢出的組織或體液送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。(二)食品微生物檢驗(yàn)采樣方法按照上述采樣方案，能采取最小包裝的食品就采取完整包裝按無菌操作進(jìn)行。不同類型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法：①液體食品，充分混勻，用無菌操作開啟包裝菌盛樣容器。②固體樣品，大塊整體食品應(yīng)用無菌刀具和鑷子從不同部位割取，割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部，注意樣品的代表性，小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品，放入無菌盛樣容器。④冷凍食品，大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取，大塊冷凍食品可以用無菌刀從不同部位削取樣品或用無菌小手鋸從凍塊上鋸取樣品，也可以用無菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品，放入盛樣容器。②④所述食品取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康男铏z驗(yàn)其品質(zhì)情況，應(yīng)取探部樣品。⑤生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)采樣：若需檢驗(yàn)食品污染情況a．車間用水：自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水；湯料等從車間容器不同部位用100mL無菌注射器抽取。b．車間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)：用5cmz孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2面積《若所采表面干燥，則用無菌稀釋液濕潤棉簽后擦拭，若表面有水，則用下棉簽擦拭，擦拭后立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。c．車間空氣采樣：育接沉降法。將5個(gè)直徑90mm的普通營養(yǎng)瓊脂乎板分別置于車間的四角和中部，打開乎皿蓋5min，然后蓋蓋送檢。(三)食品微生物檢驗(yàn)的樣品處理樣品處理應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)行，若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍2℃一5C不超過18h或45℃不超過15min。一般固體食品的樣品處理方法有以下幾種：1．搗碎均質(zhì)方法將100g或100g以上樣品剪碎混勻，從中取25g放入帶225mI稀釋液的無菌均質(zhì)杯中8000r／min一10000r／min均質(zhì)1min一2mm，這是對(duì)大部分食品樣品都適用的辦法。2．剪碎振搖法將100g或100g以上樣品剪碎混勻，從中取25g進(jìn)一步剪碎，放入帶有225mL稀釋液和適量45mm左右玻璃珠的稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅不小于40cm。3．研磨法將100g或100g以上樣品剪碎混勻，取25g放入無菌乳缽充分研磨后再放入帶有225mI無菌稀釋液的稀釋瓶中，蓋緊蓋后充分搖勻。4．整粒振搖法有完整自然保護(hù)膜的穎粒狀樣品(如蒜瓣、青豆等)可以直接稱取25s整粒樣品入帶有225mL無菌稀釋液和適量玻璃珠的無菌稀釋瓶中，蓋緊瓶蓋，用力快速振搖50次，振幅在40cm以上。凍蒜瓣樣品若剪碎或均質(zhì)，由于大蒜素的殺菌作用，所得結(jié)果大大低于實(shí)際水平。5.胃蠕動(dòng)均質(zhì)法這是國外使用的一種新型的均質(zhì)樣品的方法，將一定量的樣品和稀釋液放入無菌均質(zhì)袋中，開機(jī)均質(zhì)。均質(zhì)器有一個(gè)長(zhǎng)方形金屬盒，其旁安有金屬葉板，可打擊塑樹袋，金屬M(fèi)L板由恒速馬達(dá)帶動(dòng)，作前后移動(dòng)而撞碎樣品。三、樣品的送檢與檢驗(yàn)(1)采集好的樣品應(yīng)及時(shí)送到食品微生物檢驗(yàn)室，越快越好，一般不應(yīng)超過3h，如果路途遙遠(yuǎn)，可將不需冷凍的樣品保持在1℃一5℃的環(huán)境中，勿使凍結(jié)，以免細(xì)菌遭受破壞；如需保持冷凍狀態(tài)，則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)(箱內(nèi)有干冰可維持在0℃以下)，應(yīng)防止反復(fù)冰涼和溶解。(2]樣品送檢時(shí)，必須認(rèn)真填寫申請(qǐng)單，以供檢驗(yàn)入員參考。(3)檢驗(yàn)人員接到送檢單后，應(yīng)立即登記，填寫序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求放在冰箱或冰盒中，并積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。(4)食品微生物檢驗(yàn)室必須備有專用冰箱存放樣品，一般陽性樣品發(fā)出報(bào)告后3d(持殊情況可適當(dāng)延長(zhǎng))方能處理樣品；進(jìn)口食品的陽性樣品，需保存六個(gè)月方能處理，每種指標(biāo)都有一種或幾種檢驗(yàn)方法，應(yīng)根據(jù)不同的食品、不同的檢驗(yàn)?zāi)康膩磉x擇恰當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法。本書重點(diǎn)介紹的是通常所用的常規(guī)檢驗(yàn)方法，主要參考現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)。但除了國標(biāo)外，國內(nèi)尚有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(如出口食品微生物檢驗(yàn)方法)，國外尚有國際標(biāo)準(zhǔn)(如FAo標(biāo)準(zhǔn)、wHo標(biāo)準(zhǔn)等)和每個(gè)食品進(jìn)口因的標(biāo)準(zhǔn)(如美國FDA標(biāo)準(zhǔn)h日本厚生省標(biāo)準(zhǔn)、歐共體標(biāo)準(zhǔn)等)?？傊畱?yīng)根據(jù)食品的消費(fèi)去向選擇相應(yīng)的檢驗(yàn)方法。五、結(jié)果報(bào)告樣品檢驗(yàn)完畢后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫報(bào)告單，簽名后送主管人核章，以示生效，并立即交給食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。第五節(jié)食品微生物檢驗(yàn)染色法微生物中細(xì)菌、致病菌是很小的生物體，必須通過染色的方法，在顯微鏡下才能看得清楚，并且還可以通過染色的方法鑒別革蘭氏染色特性，以及是古長(zhǎng)有鞭毛、周毛、莢膜和芽孢等。第四篇：動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法NY/T541—2002前言動(dòng)物病料樣品的采集是動(dòng)物疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查或免疫監(jiān)測(cè)所不可缺少的重要步驟，在各國的獸醫(yī)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)中都把這一部分納入第一重要內(nèi)容，廣泛應(yīng)用于動(dòng)物疾病流行病學(xué)調(diào)查、動(dòng)物檢疫和科研教學(xué)。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織[WorldOrganizationforAnimalHealth(英)，OfficeIntentionaldesEpizootic(法)，OIE]推薦的診斷方法中，也將該部分內(nèi)容列為第一部分內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)是依據(jù)世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)》(2000版)(ManualofStandardsforDiagnosticTestsandVaccines，2000)第1·1.1章“SamplingMethods”的技術(shù)要求編寫的。本標(biāo)準(zhǔn)與該章的非原則性差異在于:——本標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合本國實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)對(duì)操作程序和條件作了更具體的陳述和規(guī)定；——本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)GB/T1.1-2000的規(guī)定和漢語習(xí)慣將該章的陳述性文本改為規(guī)范性標(biāo)準(zhǔn)文件。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:吳延功、杜元釗、朱萬光、劉佩蘭、仰惠芬。1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物疫病診斷實(shí)驗(yàn)室的樣品采集方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于病因(原)學(xué)、病理組織學(xué)、血清學(xué)、免疫學(xué)等實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)所需樣品的采集。2樣品采集的一般原則和采集前的準(zhǔn)備2.1樣品采集所遵循的一般原則2.1.1凡發(fā)現(xiàn)患畜(包括馬、牛、羊及豬等)有急性死亡時(shí)，如懷疑是炭疽，則不可隨意解剖，應(yīng)采取患畜的血液，萬不得已時(shí)局部解剖作脾臟觸片的顯微鏡檢查。只有在確定不是炭疽后，方可進(jìn)行剖檢。2.1.2采取病料的種類，根據(jù)不同的疾病或檢驗(yàn)?zāi)康模善湎鄳?yīng)的臟器、內(nèi)容物、分泌物、排泄物或其他材料；進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、抗體檢測(cè)、動(dòng)物群體健康評(píng)估或環(huán)境衛(wèi)生檢測(cè)時(shí)，樣品的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。采樣時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生不必要的剌激或損害和對(duì)采樣者構(gòu)成威脅。在無法估計(jì)病因時(shí)，可進(jìn)行全面的采集。檢查病變與采集病料應(yīng)統(tǒng)籌考慮。2.1.3內(nèi)臟病料的采取，如患畜已死亡，應(yīng)盡快采集，最遲不超過6h。2.1.4血液樣品在采集前一般禁食8h。2.1.5應(yīng)做好人身防護(hù)，嚴(yán)防人畜共患病感染。2.1.6應(yīng)防止污染環(huán)境，防止疫病傳播，做好環(huán)境消毒和病害肉尸的處理。2.2使用器械的消毒刀、剪、鑷子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用時(shí)進(jìn)行火焰消毒。器皿(玻制、陶制等)經(jīng)103kPa高壓30min，或經(jīng)160℃干烤2h滅菌；或放于0.5%～1%的碳酸氫鈉(NaHCO3)水中煮沸10min～15min，水洗后，再用清潔紗布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中備用。注射器和針頭放于清潔水中煮沸30min。一般要求使用“一次性”針頭和注射器。采取一種病料，使用一套器械與容器，不可用其再采其他病料或容納其他臟器材料。采過病料的用具應(yīng)先消毒后清洗。檢查過傳染性海綿狀腦病的器械要放在2mol/L的氫氧化納(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。3樣品的采集3.1血液3.1.1采血部位大的哺乳動(dòng)物可選用頸靜脈或尾靜脈采血，也可采脛外靜脈和乳房靜脈血。毛皮動(dòng)物小量采血可穿刺耳尖或耳殼外側(cè)靜脈，多量采血可在隱靜脈采集，也可用尖刀劃破趾墊0.5cm深或剪斷尾尖部采血。嚙齒類動(dòng)物可從尾尖采血，也可由眼窩內(nèi)的血管叢采血；兔可從耳背靜脈、頸靜脈或心臟采血。禽類通常選擇翅靜脈采血，也可通過心臟采血。3.1.2采血方法對(duì)動(dòng)物采血部位的皮膚先剃毛(拔毛)，75%的酒精消毒，待干燥后采血，采血可用針管、針頭、真空管或用三棱針穿刺，將血液滴到開口的試管內(nèi)。禽類等的少量血清樣品的采集，可用塑料管采集。用針頭刺破消毒過的翅靜脈，將血液滴到直徑為3mm～4mm的塑料管內(nèi)，將一端封口。3.1.3采血種類3.1.3.1全血樣品進(jìn)行血液學(xué)分析，細(xì)菌、病毒或原蟲培養(yǎng)，通常用全血樣品，樣品中加抗凝劑。抗凝劑可用0.1%肝素、阿氏液(見第A.l章)(阿氏液為紅細(xì)胞保存液，使用時(shí)，以1份血液加2份阿氏液)，或枸櫞酸鈉(3.8%～4%的枸櫞酸鈉0.1mL，可抗1mL血液)。采血時(shí)應(yīng)直接將血液滴入抗凝劑中，并立即連續(xù)搖動(dòng)，充分混合。也可將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶?jī)?nèi)，震蕩脫纖維蛋白。3.1.3.2血清樣品進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)通常用血清樣品。用作血清樣品的血液中不加抗凝劑，血液在室溫下靜置2h～4h(防止曝曬)，待血液凝固，有血清析出時(shí)，用無菌剝離針剝離血凝塊，然后置4℃冰箱過夜，待大部分血清析出后取出血清，必要時(shí)經(jīng)低速離心分離出血清。在不影響檢驗(yàn)要求原則下可因需要加入適宜的防腐劑。做病毒中和試驗(yàn)的血清避免使用化學(xué)防腐劑(如硼酸、硫柳汞等)。若需長(zhǎng)時(shí)間保存，則將血清置20℃以下保存，但要盡量防止或減少反復(fù)凍融。樣品容器上貼詳細(xì)標(biāo)簽。3.1.3.3血漿的采集采血試管內(nèi)先加上抗凝劑(每10mL血加檸檬酸鈉0.04g～0.05g)，血液采完后，將試管顛倒幾次，使血液與抗凝劑充分混合，然后靜止，待細(xì)胞下沉后，上層即為血漿。3.2一般組織3.2.1采樣方法用常規(guī)解剖器械剝離死亡動(dòng)物的皮膚，體腔用消毒的器械剝開，所需病料按無菌操作方法從新鮮尸體中采集。剖開腹腔后，注意不要損壞腸道。作病原分離用:進(jìn)行細(xì)菌、病毒、原蟲等病原分離所用組織塊的采集，可用一套新消毒的器械切取所需器官的組織塊，每個(gè)組織塊應(yīng)單獨(dú)放在已消毒的容器內(nèi)，容器壁上注明日期、組織或動(dòng)物名稱。注意防止組織間相互污染。3.2.2采樣種類3.2.2.1病原分離樣品的采集用于微生物學(xué)檢驗(yàn)的病料應(yīng)新鮮，盡可能的減少污染。用于細(xì)菌分離的樣品的采集，首先以燒紅的刀片燙烙臟器表面，在燒烙部位刺一孔，用滅菌后的鉑耳伸入孔內(nèi)，取少量組織或液體，作涂片鏡檢或劃線接種于適宜的培養(yǎng)基上。3.2.2.2組織病理學(xué)檢查樣品的采集采集包括病灶及臨近正常組織的組織塊，立即放入10倍于組織塊的10%福爾馬林溶液中固定。組織塊厚度不超過0.5cm，切成1cm2～2cm2(檢查狂犬病則需要較大的組織塊)。組織塊切忌擠壓、刮摸和用水洗。如作冷凍切片用，則將組織塊放在0℃～4℃容器中，盡快送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。3.3腸內(nèi)容物或糞便腸道只需選擇病變最明顯的部分，將其中的內(nèi)容物棄去，用滅菌生理鹽水輕輕沖洗；也可燒烙腸壁表面，用吸管扎穿腸壁，從腸腔內(nèi)吸取內(nèi)容物，將腸內(nèi)容物放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液(見第A.2章)中送檢?；蛘?，將帶有糞便的腸管兩端結(jié)扎，從兩端剪斷送檢。從體外采集糞便，應(yīng)力求新鮮?；蛘?，用拭子小心地插到直腸粘膜表面采集糞便，然后將拭子放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢。3.4胃液及瘤胃內(nèi)容物3.4.1胃液采集胃液可用多孔的胃管抽取。將胃管送入胃內(nèi)，其外露端接在吸引器的負(fù)壓瓶上，加負(fù)壓后，胃液即可自動(dòng)流出。3.4.2瘤胃內(nèi)容物采集反芻動(dòng)物在反芻時(shí)，與食團(tuán)從食道逆入口腔時(shí)，立即開口拉住舌頭，另一只手深入口腔即可取出少量的瘤胃內(nèi)容物。3.5呼吸道應(yīng)用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或氣管內(nèi)的分泌物，蘸取分泌物后立即將拭子浸入保存液中，密封低溫保存。常用的保存液有pH7.2～7.4的滅菌肉湯(見第A.3章)或磷酸鹽緩沖鹽水，如準(zhǔn)備將待檢標(biāo)本接種組織培養(yǎng)，則保存于含0.5%乳蛋白水解物的漢克氏(Hanks)液中。一般每支拭子需保存液5mL。3.6生殖道可采集陰道或包皮沖洗液，或者采用合適的拭子，有時(shí)也可用尿道拭子采集。3.7眼睛眼結(jié)膜表面用拭子輕輕擦拭后，放在滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢。有時(shí)，也采取病變組織碎屑，置載玻片上，供顯微鏡檢查。3.8皮膚病料直接采自病變部位，如病變皮膚的碎屑、未破裂水泡的水泡液、水泡皮等。3.9胎兒將流產(chǎn)后的整個(gè)胎兒，用塑料薄膜、油布或數(shù)層不透水的油紙包緊，裝入木箱內(nèi)，立即送往實(shí)驗(yàn)室。3.10小家畜及家禽將整個(gè)尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中，裝入木箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室。3.11骨需要完整的骨標(biāo)本時(shí)，應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去，表面撒上食鹽，然后包入浸過5%石炭酸溶液的紗布中，裝入不漏水的容器內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。3.12腦、脊髓3.12.1全腦、脊髓的采集如采取腦、脊髓做病毒檢查，可將腦、脊髓浸入30%甘油鹽水液中或?qū)⒄麄€(gè)頭部割下，包入浸過消毒液的紗布中，置于不漏水的容器內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。3.12.2腦、脊髓液的采集3.12.2.1采樣前的準(zhǔn)備采樣使用特制的專用穿刺針，或用長(zhǎng)的封閉針頭(將針頭稍磨鈍，并配以合適的針芯)；采樣前，術(shù)部及用具均按常規(guī)消毒。3.12.2.2采樣方法3.12.2.2.1頸椎穿刺法:穿刺點(diǎn)為環(huán)樞孔。將動(dòng)物實(shí)施站立或橫臥保定，使其頭部向前下方屈曲，術(shù)部經(jīng)剪毛消毒，穿刺針與皮膚面呈垂直緩慢刺入。將針體刺入蛛網(wǎng)膜下腔，立即拔出針芯，腦脊髓液自動(dòng)流出或點(diǎn)滴狀流出，盛入消毒容器內(nèi)。3.12.2.2.2腰椎穿刺法:穿刺部位為腰薦孔。實(shí)施站立保定，術(shù)部剪毛消毒后，用專用的穿刺針刺入，當(dāng)刺入蛛網(wǎng)膜下腔時(shí)，即有腦脊髓液滴狀滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器內(nèi)。3.12.2.3采樣數(shù)量大型動(dòng)物頸部穿刺一次采集量35mL～70mL，腰椎穿刺一次采集量15mL～30mL。3.13液體病料采集膽汁、膿、粘液或關(guān)節(jié)液等樣品時(shí)，用燙烙法消毒采樣部位，用滅菌吸管、毛細(xì)吸管或注射器經(jīng)燙烙部位插入，吸取內(nèi)部液體材料，然后將材料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。也可用接種環(huán)經(jīng)消毒的部位插入，提取病料直接接種在培養(yǎng)基上。供顯微鏡檢查的膿、血液及粘液抹片的制備方法:先將材料置玻片上，再用一滅菌玻棒均勻涂抹或另用一玻片推抹。組織塊、致密結(jié)節(jié)及膿汁等亦可在兩張玻片中間，然后沿水平面向兩端推移。用組織塊作觸片時(shí)，持小鑷將組織塊的游離面在玻片上輕輕涂抹即可。3.14乳汁乳房先用消毒藥水洗凈(取乳者的手亦應(yīng)事先消毒)，并把乳房附近的毛刷濕，最初所擠的3～4把乳汁棄去，然后再采集10mL左右乳汁于滅菌試管中。進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)的乳汁不應(yīng)凍結(jié)、加熱或強(qiáng)烈震動(dòng)。3.15精液精液樣品用人工方法采集，所采樣品應(yīng)包括“富精”部分，并避免加入防腐劑。3.16尿液的采集在動(dòng)物排尿時(shí)，用潔凈的容器直接接取。也可使用塑料袋，固定在雌畜外陰部或雄畜的陰莖下接取尿液。采取尿液，宜早晨進(jìn)行。3.17環(huán)境為監(jiān)測(cè)環(huán)境衛(wèi)生或調(diào)查疾病，可從遺棄物、通風(fēng)管、下水道、孵化廠或屠宰場(chǎng)采集有代表性樣品。4送檢樣品的記錄送往實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)有一式三份的送檢報(bào)告，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，一份隨后寄去，另一份備案。樣品記錄至少應(yīng)包括以下內(nèi)容:a)畜主的姓名和畜禽場(chǎng)的地址；b)畜(農(nóng))場(chǎng)里飼養(yǎng)的動(dòng)物品種及其數(shù)量；c)被感染的動(dòng)物種類；d)首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期及造成的損失；e)感染動(dòng)物在畜群中的分布情況；f)死亡動(dòng)物數(shù)、出現(xiàn)臨床癥狀的動(dòng)物數(shù)量及其年齡；g)臨床癥狀及其持續(xù)時(shí)間，包括口腔、眼睛和腿部的情況，產(chǎn)奶或產(chǎn)蛋的記錄，死亡情況和時(shí)間，免疫和用藥情況等；h)飼養(yǎng)類型和標(biāo)準(zhǔn)，包括飼料種類；i)送檢樣品清單和說明，包括病料的種類、保存方法等；j)動(dòng)物治療史；k)要求做何種試驗(yàn)；l)送檢者的姓名、地址、郵編和電話；m)送檢日期。5樣品的運(yùn)送所采集的樣品以最快最直接的途徑送往實(shí)驗(yàn)室。如果樣品能在采集后24h內(nèi)送抵實(shí)驗(yàn)室，則可放在4℃左右的容器中運(yùn)送。只有在24h內(nèi)不能將樣品送往實(shí)驗(yàn)室并不致影響檢驗(yàn)結(jié)果的情況下，才可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)運(yùn)送。根據(jù)試驗(yàn)需要決定送往實(shí)驗(yàn)室的樣品是否放在保存液中運(yùn)送。要避免樣品泄漏。裝在試管或廣口瓶中的病料密封后裝在冰瓶中運(yùn)送，防止試管和容器傾倒。如需寄送，則用帶螺口的瓶子裝樣品，并用膠帶或石蠟封口。將裝樣品的并有識(shí)別標(biāo)志的瓶子放到更大的具有堅(jiān)實(shí)外殼的容器內(nèi)，并墊上足夠的緩沖材料?？者\(yùn)時(shí)，將其放到飛機(jī)的加壓艙內(nèi)。制成的涂片、觸片、玻片上注名號(hào)碼，并另附說明。玻片兩端用細(xì)木條分隔開，層層疊加，底層和最上一片，涂面向內(nèi)，用細(xì)線包扎，再用紙包好，在保證不被壓碎的條件下運(yùn)送。所有樣品都要貼上詳細(xì)標(biāo)簽。附錄A(規(guī)范性附錄)待檢樣品保存液的配制A.1阿(Alserer)氏液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)0.80g氯化鈉(NaCl)0.42g蒸鎦水(或無離子水)加至100mL溶解后，以10%檸檬酸調(diào)至pH為6.1分裝后，70kPa10min滅菌，冷卻后4℃保存?zhèn)溆?。A.230%甘油鹽水緩沖液甘油30mL氯化鈉4.2g磷酸二氫鉀1.0g磷酸氫二鉀3.lg0.02%酚紅1.5mL蒸餾水加至100mL加熱溶化，校正pH值為7.6，100kPa15min滅菌，冰箱保存?zhèn)溆谩.3肉湯(broth)牛肉膏3.5g蛋白胨10g氯化鈉5g充分混合后，加熱溶解，校正pH為7.2～7.4，再用流通蒸氣加熱30min，用濾紙過濾，獲苗黃色透明液體，分裝于試管或燒瓶中，以100kPa20min滅菌。保存于冰箱中備用。第五篇：微生物檢驗(yàn)驗(yàn)證微生物限度檢查方法驗(yàn)證微生物限度檢查方法驗(yàn)證報(bào)告目錄1.驗(yàn)證目的2.驗(yàn)證小組及職責(zé)分工2.1驗(yàn)證小組2.2職責(zé)分工3.驗(yàn)證程序4.驗(yàn)證結(jié)論及綜合評(píng)價(jià)1.驗(yàn)證目的確認(rèn)所采用的細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法和控制菌檢查方法適合該藥品的微生物限度檢查。2.驗(yàn)證小組及職責(zé)分工2.1驗(yàn)證小組組長(zhǎng)：分析中心主任小組成員：GMP（）、微生物室（）、質(zhì)量管理部（）2.2職責(zé)分工組長(zhǎng)：負(fù)責(zé)驗(yàn)證期間各部門的協(xié)調(diào)及整個(gè)驗(yàn)證過程的具體實(shí)施。分析中心（微生物室）：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的起草及具體實(shí)施，確保驗(yàn)證過程能按方案規(guī)定的程序進(jìn)行，對(duì)各種驗(yàn)證資料（驗(yàn)證結(jié)果）應(yīng)及時(shí)交與GMP組相關(guān)人員整理。GMP組：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的編寫規(guī)范；負(fù)責(zé)各種驗(yàn)證資料（檢查結(jié)果）的收集整理及結(jié)果的審核；審查驗(yàn)證報(bào)告及發(fā)放驗(yàn)證報(bào)告。質(zhì)量管理部：參與驗(yàn)證方案的編制；負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核及批準(zhǔn)；負(fù)責(zé)出具檢驗(yàn)報(bào)告；并對(duì)微生物限度檢查環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)；負(fù)責(zé)驗(yàn)證文件的管理。3．驗(yàn)證內(nèi)容3.1品種：XXXX口服溶液；批號(hào)：。3.2方法：微生物限度檢查方法驗(yàn)證（《中國藥典》2005年版）。3.3計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證3.3.1驗(yàn)證試驗(yàn)用菌種：驗(yàn)證試驗(yàn)用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。a.大腸埃希菌(Escherichiacoli)〔CMCC(B)26003〕b.金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕c.枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)〔CMCC(B)63501〕d.白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕e.黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003.3.2菌液制備：取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽孢桿菌肉湯液體培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10－5～10－7約為50～100cfu/ml備用。取經(jīng)23～28℃培養(yǎng)24～48小時(shí)的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml，加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10－5約為50～100cfu/ml備用。取經(jīng)23～28℃培養(yǎng)5～7天的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加0.9%無菌氯化鈉溶液3～5ml，洗下孢子，轉(zhuǎn)移至另一空管，標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁后，取1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中10倍稀釋至10－4約為50～100cfu/ml備用。3.3.3供試液制備吸取樣品10ml，加0.1%蛋白胨水氯化鈉稀釋液90ml濃度均為1：10供試液，分別人工污染上述5種代表試驗(yàn)菌株。3.3.4培養(yǎng)基稀釋法采用加0.5ml、0.2ml、0.1ml/皿供試液，再加15~20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24~48小時(shí)觀察結(jié)果細(xì)菌計(jì)數(shù)，測(cè)定回收率。結(jié)果見表：3.3.5回收率測(cè)定：(1)試驗(yàn)組:分別取不同品種的1：10供試液1ml、50~100個(gè)/ml試驗(yàn)菌株同時(shí)加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24~72小時(shí)觀察結(jié)果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗(yàn)菌.(2)活菌組測(cè)定每一菌株的試驗(yàn)菌數(shù)(3)供試液對(duì)照測(cè)定供試品本底菌數(shù)(4)稀釋劑對(duì)照組3.6結(jié)果菌落計(jì)數(shù)結(jié)果、常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法的驗(yàn)證結(jié)果按表1、2和表3填寫。表1菌落計(jì)數(shù)（cfu/ml）實(shí)驗(yàn)次數(shù)23金黃色葡萄球菌10-594、9080、74153、150枯草桿菌白色念珠菌10-5130、8045、2378、7710-573、72128、10873、74黑曲霉10-4110、90110、120110、100大腸埃希菌10-714、1554、3430、27檢查人：日期：表2XXXX口服溶液微生