微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀課件

微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀華粵行儀器有限公司鄒黎明華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀常見微生物檢測項目常規(guī)微生物項目：細菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、酵母總數(shù)、霉菌總數(shù)致病微生物項目：沙門氏菌、李斯特菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157：H7、彎曲桿菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志賀氏菌、假單胞菌等華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀政府檢測機構(gòu)為什么需要微生物快速檢測？日益嚴峻的食品安全局勢的需要提高檢測效率節(jié)約人力資源成本與國際接軌微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀企業(yè)為什么需要微生物快速檢測？市場銷售環(huán)節(jié)要求快速出貨。尤其是一些保質(zhì)期較短的產(chǎn)品。減少物流的壓力，盡可能減少倉存，加快資金周轉(zhuǎn)。節(jié)約人力資源成本（外資企業(yè)尤其突出）對于運行HACCP質(zhì)量保證體系的企業(yè)來說，快速檢測方法尤其重要。可以快速檢測原料及半成品的污染情況，以采取相應(yīng)的措施控制最終產(chǎn)品的微生物超標情況。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀快速方法勢在必行國外許多政府檢測機構(gòu)都在大量使用快速檢測方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和顯色培養(yǎng)基法在國外應(yīng)用相當成功。國內(nèi)的許多政府檢測機構(gòu)也都已經(jīng)在使用或正在考慮使用國外先進的快速檢測技術(shù)。從長遠發(fā)展趨勢來說，快速方法是微生物檢測的一大方向。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀常規(guī)微生物快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀傳統(tǒng)計數(shù)改良法：1、螺旋平板計數(shù)法：螺旋接種儀＋菌落計數(shù)2、濾膜法：常用于一些可過濾樣品的檢測。3、紙片法：培養(yǎng)基固體在載體上。省去制做培養(yǎng)基的時間。主要用于細菌總數(shù)檢測。4、其它：如Simplate即用膠,改良MPN產(chǎn)品。華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀螺旋平板法DWS螺旋平板接種儀aColyte自動菌落計數(shù)儀微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀螺旋平板原理平皿旋轉(zhuǎn)接種針往外移動同時自動將樣品稀釋1000倍微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀螺旋平板法的優(yōu)缺點優(yōu)點：與傳統(tǒng)方法相比，無需稀釋3個梯度，每個梯度倒2個平板，節(jié)省了大量人力物力。缺點：檢測時間并沒有縮短，菌落總數(shù)仍需要培養(yǎng)48小時。需要配合自動菌落計數(shù)儀，否則人工計數(shù)更麻煩。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀濾膜法濾膜法常用于可過濾樣品的微生物檢測。優(yōu)點：靈敏度增大，菌落無擴散情況，便于計數(shù)。缺點：需要額外的支出購買真空泵，多聯(lián)支架及一次性濾膜；如果抽濾過程空氣潔凈度不夠，有可能造成二次污染，尤其是對菌數(shù)要求特別嚴格的產(chǎn)品，如啤酒，澄清果汁，桶裝飲用水等。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀皿膜法—以紙片法為代表紙片法是目前被廣泛接受的方法。國標餐具大腸菌群采用的就是紙片法。優(yōu)點：無需制備培養(yǎng)基，攜帶方便，非漫延菌落計數(shù)較方便。缺點：不能節(jié)省檢測時間。檢測成本相對偏高。大腸菌群紙片存在與MPN法無法對應(yīng)的問題，金黃色葡萄球菌紙片存在取樣量太低的問題。目前僅細菌總數(shù)紙片有一些用戶。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀其它即用膠，MPN改良法Simplatecolilert主要用于水樣或澄清樣品的大腸菌群或大腸桿菌檢測微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀常規(guī)微生物快速檢測技術(shù)現(xiàn)狀快速檢測微生物數(shù)量的新方法：1、ATP法：目前產(chǎn)品較多，如CHARM，Biotrace,…..等。2、電化學(xué)法：Sy-Lab公司Bactrac4300，Tempo,…3、顏色變化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。4、流式細胞技術(shù)及激光掃描技術(shù)5、其它：熱量法，放射測量法華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀表面潔凈的檢測方法微生物學(xué)法：紙片、瓊脂板、棉簽拭子、海綿拭子非微生物學(xué)法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白質(zhì),降解糖、NADP(輔酶II)，其它。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀A(yù)TP---三磷酸腺苷ATP來源于細菌酵母霉菌生物膜組織殘留廢棄物污染人的污染微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀1.

人接觸設(shè)備或器具2.設(shè)備或器具被污染3.清洗不正常4.非正常的敏感物污染5.微生物污染ATP存在表明什么？微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀檢測原理熒光素熒光素酶腺苷一磷酸氧合熒光素熒光微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀A(yù)TP法兩大用途1、用于食品、化妝品和藥品企業(yè)對生產(chǎn)線和管道進行快速清潔程度檢測。政府檢測機構(gòu)用ATP方法缺乏法律依據(jù)。ATP法與微生物數(shù)量沒有必然的聯(lián)系。2、改良后用于食品、化妝品的商業(yè)無菌檢測或終產(chǎn)品檢驗。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀LUM－T清潔程度快速檢測微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀PocketSwab

Plus<30

秒獲得結(jié)果取樣混合檢測微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀LUM-T的獨特優(yōu)勢CHEF熟肉制品成熟度檢驗MicroQ水中微生物污染程度檢測Cidelite殺蟲劑殘留初篩Paslite牛奶巴氏消毒效果Somalite體細胞計數(shù)SL/MRLtest抗生素殘留檢測（連接ROSA

imager)微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀基于ATP原理的用于成品檢測的

微生物檢測系統(tǒng)Charm

LUM-96（用于UHT產(chǎn)品）BiotraceCelsis（主要用于化妝品）Millipore公司的MicroScan微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀Celsis和LUM-96保溫2天，檢測30分鐘（96個樣）微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀A(yù)TP法檢測成品的優(yōu)缺點優(yōu)點：LUM-96通常用于進行商業(yè)無菌檢測?？纱蟠罂s短庫存時間，減少物流壓力和成本。缺點：ATP方法需要消耗大量的較昂貴的試劑，對儀器的清洗保養(yǎng)要求特別高。另外，客戶通常懷疑假陰性的可能，特別是用ATP單個檢測代替常規(guī)微生物和致病微生物檢測，其風(fēng)險是一定存在的。(如保溫增菌時間不夠，菌數(shù)未達到一定數(shù)量，取樣量太小，由于培養(yǎng)基原因，目標致病菌未大量增菌等原因)微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀Millipore公司最新推出的MicroStar微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀MicroStar的原理及局限性MicroStar快速微生物檢測系統(tǒng)是結(jié)合了生物熒光、膜過濾及CCD熒光照相檢測等技術(shù)的新型檢測系統(tǒng).可過濾樣品經(jīng)膜過濾后，將菌截留在特殊的濾膜上，濾膜放置在培養(yǎng)基表面增菌后取出，加ATP釋放劑，然后加熒光素和熒光素酶，顯示的熒光信號在熒光顯微鏡或熒光檢測器下觀察并計數(shù)。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀MicroStar的優(yōu)缺點優(yōu)點：縮短培養(yǎng)時間，提高靈敏度。適合于菌數(shù)較低的可過濾產(chǎn)品使用。缺點：儀器較昂貴，運行成本也非常貴。不能用于檢測未知的可能菌數(shù)較高的樣品(不知稀釋多少倍，因菌數(shù)必須稀釋至80個左右)。整個檢測時間還不夠快，通常需16小時以上。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀電化學(xué)方法(電導(dǎo)率法或電阻抗法)奧地利Sylab公司的Bactrac4300和Biotrac4200梅里埃公司的Bactometer和Tempo英國Multhus公司(已倒閉)英國DWS公司的Rabit……微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀外觀比較Bactrac4300梅里埃的BactoMeterDWS公司的Rabit馬色斯120微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀世界上最好的電化學(xué)微生物快速檢測產(chǎn)品

Bactrac4300系統(tǒng)Sy-lab—Bactrac4300常規(guī)微生物項目快速檢測技術(shù)微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀MicroFoss(Biosys)微生物自動監(jiān)測儀微生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值發(fā)生變化，由光學(xué)檢測器檢測底部瓊脂層的顏色變化，記錄達到突變點的時間。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀Microfoss的特點與阻抗法類似，可以實現(xiàn)快速檢測。缺點：需要購買原廠的預(yù)裝培養(yǎng)基，應(yīng)用范圍受限制，成本高昂。因此在我國目前還沒有用戶。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀梅里埃的BacT/Alert微生物檢測儀基于微生物生成產(chǎn)生CO2的原理。CO2積累越多，底部的CO2傳感器變黃，由LED發(fā)射一束光至底部，探頭檢測反射光的強度。光強度與微生物數(shù)量有一定關(guān)系。方法較新，用戶還需要一個過程了解。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀FOSS公司

BactoScanFC牛奶中總菌數(shù)快速檢測儀采用流式細胞原理。對微生物進行核酸染色，用流式細胞技術(shù)進行計數(shù)微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀BactoScanFC的優(yōu)缺點優(yōu)點：速度快(50-150樣品/小時)缺點：死活細胞一起檢測，消耗成本較高，儀器比較難保養(yǎng)。靈敏度不夠高。適合牛奶企業(yè)檢測原奶中細菌總數(shù)。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀美國Chemunex公司

微生物快速檢測系統(tǒng)美國Chemunex公司將流式細胞技術(shù)與活細胞熒光探針標記及激光掃描技術(shù)相結(jié)合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的ScanRDI和D-count微生物快速檢測儀。其最大的特點是只檢測活細胞數(shù)，速度極快，處理量大。與FOSS的BactoScanFC檢測死活細胞都檢測不同。是目前國際上正在認可的生物熒光定量檢測微生物數(shù)量的兩種方法之一。另一種是Millipore的一款叫MicroStar的基于ATP檢測的產(chǎn)品。華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀熒光酶標記原理華粵行儀器有限公司

直接單細胞標記(包括孢子)

細胞無增菌要求標記在90分鐘內(nèi)完成直接對活細胞和酵母進行標記微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀標記的細菌微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀標記后的酵母微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀標記后的霉菌微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀ChemScanRDI華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀三個簡單的步驟2.標記3.激光掃描1.過濾微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀檢測步驟-TVC

1.過濾2.標記3.激光掃描樣品過濾預(yù)標記60min濾膜轉(zhuǎn)移ChemScanRDI

?儀器分析標記30min微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀ChemScanòRDI

主機激光掃描分析儀3分鐘分析時間結(jié)果直接顯示細胞個數(shù)微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀Laserscanning微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀MicroscopeConfirmation微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀ClientPortfolio-Pharmaceutical-USA-USA-USA-USA-USA-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-JAPAN-JAPAN-JAPAN-JAPANJOHNSON&JOHNSON(M)MERCK(M)BAUSCH&LombALCONLONZAWYETHNOVARTIS(M)ASTRAZENECAPARKEDAVISPFIZERINSTITUTPASTEURAVENTISROCHE(M)SANOFI(M)SMITH&NEPHEWGLAXOSMITHKLINE(M)SERONODAIICHITORIIFUJISAWACHUGAI……(M)=multi-siteinstallation140ChemScansystemsinstalled

DRINKINGWATERAGBARAnglianWater,Ondeo,ThamesWater,Vivendi,Dordmund,Tokyo,…SEMICONDUCTORSIBM,Siemens,TI,…微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀流式細胞計數(shù)技術(shù)

用于非過濾產(chǎn)品流式細胞:

線性流體

單細胞分析

靈敏的檢測頭微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀Bactiflow適合實驗室或研究用日處理量不大于40個樣品華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀D－Count適合實驗室或生產(chǎn)現(xiàn)場使用日處理量大于40個樣品的場合華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀標記和檢測原理EnzymeViabilitysubstrateFreefluorochromeMicro-organismDetectorDetectorLaserFlowCell細胞標記12minutes細胞計數(shù)1minute微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀自動吸樣

無需預(yù)處理

每批可做64個樣，含陰性和陽性質(zhì)控最小的人力要求全自動標記和過濾

加所有要求的標記試劑

控制溫育時間和溫度

去除大的顆粒(25μm尼龍網(wǎng)過濾)快速敏感的分析

每小時50個樣品

直接按個/mL顯示結(jié)果微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀

數(shù)據(jù)處理

區(qū)分微生物和顆粒的功能強大產(chǎn)品應(yīng)用范圍廣增強靈敏度直接顯示細胞數(shù)無需數(shù)據(jù)解釋直觀易讀完整的數(shù)據(jù)追溯性易于確證微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀三種型號的差異華粵行儀器有限公司√√微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀哪些類型客戶可以使用？大型食品、化妝品、藥品企業(yè)，對快速檢測速度及樣品處理量要求高。目前儀器非常貴，運作成本與免疫法相似。華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀致病菌快速檢測方法顯色培養(yǎng)基法：技術(shù)成熟，產(chǎn)品很多。免疫學(xué)方法：產(chǎn)品最多，特異性和敏感性都很高，但有假陽性存在，陽性結(jié)果需要確認。通常的原理有EIA，ELISA，GLISA，熒光酶免、免疫磁分離等方法。市場上的產(chǎn)品多，如BioMeriux,Tecra,Neogen,Biocontrol,Matrix等。分子生物學(xué)方法：以基因探針檢測法和PCR法為主?；蛐酒貉芯繜狳c。華粵行儀器有限公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀致病微生物快速檢測產(chǎn)品免疫磁分離法—Matrix公司的Pathatrix致病菌快速檢測系統(tǒng)ELISA方法—澳洲TECRA公司的免疫捕獲快速檢測華粵行儀器有限公司分子生物學(xué)方法(基因探針及PCR方法)GLISA---膠體金免疫層析致病菌快速檢測條熒光酶免—Vidas系列產(chǎn)品(略)顯色培養(yǎng)基–法國AES公司微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀GLISA－膠體金免疫層析檢測條氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金標記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。膠體金檢測條在臨床診斷中廣泛使用。方法成熟，使用簡便。關(guān)鍵是制備單克隆抗體，然后與膠體金交聯(lián)，在親水紙層析條上固定。膠體金微生物檢測條在國內(nèi)已經(jīng)有不少產(chǎn)品，但用戶并不多，主要是質(zhì)量不穩(wěn)定。外來的膠體金微生物檢測產(chǎn)品比較多。微生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀常見的膠體金檢測條舉例大腸桿菌