2025年環(huán)境微生物實驗技能與實踐研究報告

《環(huán)境工程微生物學(xué)》環(huán)境水樣微生物學(xué)指標(biāo)檢測班級：環(huán)境131班序言………………錯誤!未定義書簽。試驗?zāi)康暮鸵?guī)定………………錯誤!未定義書簽。采樣安排………………………錯誤!未定義書簽。醫(yī)學(xué)院采樣點分布圖……………………錯誤!未定義書簽。西安工業(yè)大學(xué)采樣點分布圖……………錯誤!未定義書簽。醫(yī)學(xué)院采樣過程照片……………………錯誤!未定義書簽。西安工業(yè)大學(xué)采樣過程照片……………錯誤!未定義書簽。采樣數(shù)據(jù)登記表…………錯誤!未定義書簽。材料措施……………錯誤!未定義書簽。試驗所用重要儀器設(shè)備及試劑……………錯誤!未定義書簽。儀器………………………錯誤!未定義書簽。培養(yǎng)基…………………錯誤!未定義書簽。試驗原理與環(huán)節(jié)…………………錯誤!未定義書簽。試驗一…………錯誤!未定義書簽。試驗三…………錯誤!未定義書簽。試驗四…………錯誤!未定義書簽。試驗五…………錯誤!未定義書簽。試驗六…………錯誤!未定義書簽。成果與分析…………錯誤!未定義書簽。采樣記錄……………………錯誤!未定義書簽。水樣總細(xì)菌群落測定…………錯誤!未定義書簽。.大腸菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測……………錯誤!未定義書簽。平板分離及革蘭氏染色成果記錄…………錯誤!未定義書簽。復(fù)發(fā)酵成果的觀測和大腸菌群數(shù)目的MPN記錄…………錯誤!未定義書簽。大腸菌群數(shù)目的MPN記錄…………………錯誤!未定義書簽。參照文獻……………錯誤!未定義書簽。使用教材及參照書……………錯誤!未定義書簽。——綜合試驗環(huán)境水樣微生物學(xué)指標(biāo)檢測微生物的分離、純化、觀測、描述，可初步進行鑒定、分類(此步不作規(guī)定)?？烧J(rèn)為污水、垃圾等生●學(xué)習(xí)水樣的采樣措施，采用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)；采用多管發(fā)酵法(MPN)測定水●成果分析與討論，經(jīng)與國標(biāo)比對檢查，水質(zhì)狀況分析?！裾莆账屑?xì)菌總數(shù)測定措施；理解水質(zhì)與細(xì)菌菌落之間的有關(guān)性；●掌握測定水中大腸菌群數(shù)量的多管發(fā)酵法。1.培養(yǎng)基配制和滅菌2.無菌操作分離純化3.細(xì)菌染色和顯微鏡使用4.菌落特性觀測和描述5.系列稀釋措施6.細(xì)菌鑒定指標(biāo)測定時間：11月27日上午(一部分組員采樣，一部分組員準(zhǔn)備滅菌器具和配制培養(yǎng)基)環(huán)節(jié)和注意事項：未央校區(qū)首3.采樣時的照片記錄見成果與分析1顯微鏡2革蘭氏染色用有關(guān)器材。3高壓蒸汽滅菌器。4干熱滅菌箱。5恒溫箱。6冰箱。7放大鏡。8試管、平皿(直徑9cm)、刻度吸管等，置于干3伊紅美藍固體培養(yǎng)基0.5%美藍水溶液13ml時間：11月27日上午1.按照樣品采集表(表1)記錄樣點，編號，采樣時間，天氣，氣溫，水位，水質(zhì)，現(xiàn)場監(jiān)測項目(pH),采樣人姓名。并畫出采樣湖的平面圖，圖上時間：11月29日9:00到12:00一.按照每組檢測兩個水樣準(zhǔn)備要進行滅菌的玻璃器皿和試劑，包括：試管18支(水樣總菌落數(shù)測定中稀釋6個梯度需5支，兩個水樣一共10支；大腸菌群檢查初發(fā)酵試驗發(fā)酵管需4支，兩個水樣一共8支);三角瓶2個(水樣總菌落數(shù)測定中初次稀釋需1個，兩個水樣共2個);移液管10只(水樣總菌落數(shù)測定梯度稀釋需10ml一支，2ml的4支，兩個水樣共10支);培養(yǎng)皿12個(水樣總菌落數(shù)測定共涂板3個梯度，每個梯度2個板子，共6個，兩個水樣共12個);a.供大腸菌群檢查之初發(fā)酵和復(fù)發(fā)酵試驗的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每只試管5到10mL,一種水樣3管，兩個水樣共6管，加上復(fù)發(fā)酵需用的，至少準(zhǔn)備120mL,可以一次配制300mL,供2組使用);b.供大腸菌群檢查之初發(fā)酵試驗的三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每只試管5到10mL,一種水樣1管，兩個水樣共2管至少準(zhǔn)備20mL,一種班配制200mL<老師指定人員配制>,供所有小組使用);c.供水樣總菌落數(shù)測定的蛋白胨固體培養(yǎng)基(每只培養(yǎng)皿25mL左右，12個培養(yǎng)皿300mL,每組至少配制300mL)將4支洗凈的杜氏小管裝入4個試管中，2個水樣共準(zhǔn)備8支裝有杜氏小管的試管，然后在其中的6支中灌入一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，2支灌入三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(注意，將大試管傾斜45度左右氏小管中的空氣擠壓出去，若灌完培養(yǎng)液后仍有氣體存在，可以用指頭輕彈試管壁將之震出);4.滅菌水的準(zhǔn)備，每組至少準(zhǔn)備500mL純凈水進行滅菌。1.將配制好的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和分裝好一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液滅菌完畢后，一部分人進行水樣的梯度稀釋(注意，初次稀釋要進行大體積稀釋，例如將20mL水樣加入180mL滅菌水中；每一步稀釋都必須保證將水樣混勻部分組員進行牛肉膏蛋白胨平板的倒板工作(若選擇直接倒板法涂板的可不用進行此部分);稀釋用的移液管要編號保留，背面涂LB平板的時候要對將10mL原始水樣加入到裝有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，1mL原始水樣加入1支裝有一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中；稀釋101和102的水樣分別加入裝有一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液發(fā)酵管中將接種完畢的發(fā)酵管放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h到48h.從103到10?稀釋梯度中選擇3個梯度的稀釋水樣進行LB平板的涂板，措施可選用倒板法(在平板中加入1mL水樣后倒入20mLLB培養(yǎng)基(培養(yǎng)基溫度必須控制在40℃如下，倒板速度要快，防止倒板過程中LB固體培養(yǎng)基凝固)或涂板法(將1mL菌液加入到制好的LB平板上，再使用涂布器涂勻，涂布器每次使用前都要酒精燈干熱滅菌，冷卻后再涂板);涂制好的平板放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h到48h。時間：11月29日早上9:00到12:00(一部分組員進行試驗二的成果觀測和記錄，一部分組員進行試驗四的內(nèi)容，先制作伊紅美藍培養(yǎng)基，清洗出計數(shù)后不用的培養(yǎng)皿(按照初發(fā)酵試驗成果，有幾種陽性成果準(zhǔn)備幾種培養(yǎng)皿)進行包裹滅菌，和制備好的伊紅美藍培養(yǎng)基一同滅菌)1.水樣總菌落數(shù)測定成果的觀測(記錄到表2中)①菌落計數(shù)：肉眼觀測，可用放大鏡，可標(biāo)識；a.某稀釋度的菌落數(shù)=兩平板菌落數(shù)取平均值。b.計數(shù)原則：選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度●僅有一種稀釋度在此范圍：總菌落數(shù)=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)；●有兩個稀釋度在30-300之間，兩梯度菌落數(shù)之比(兩個稀釋梯度涂板后所長的菌落數(shù)的比例)>2,選較小值作為菌落數(shù)進行計算，菌落數(shù)之比<2,取平均值；●所有稀釋度均>300,取稀釋倍數(shù)最大者的菌落數(shù)進行計算；●所有稀釋度均<30,取稀釋倍數(shù)最小者的菌落數(shù)進行計算；●沒有任何稀釋度在30-300之間，選最靠近該范圍者；d.稀釋度選擇及細(xì)菌總數(shù)成果記錄2.大場菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測按照表3進行初發(fā)酵成果的記錄，產(chǎn)氣變色、產(chǎn)氣不變色、變色不產(chǎn)氣和不試驗四時間：11月30日19:30到21:00按照書本上的方式配制伊紅美藍固體培養(yǎng)基，按照初發(fā)酵試驗成果(有幾種陽性成果準(zhǔn)備幾種培養(yǎng)皿)準(zhǔn)備所需培養(yǎng)基量(每個平板20-25mL);2.滅菌將準(zhǔn)備好的伊紅美藍培養(yǎng)基以及倒平板所需的培養(yǎng)皿(按照初發(fā)酵陽性成果數(shù)目進行準(zhǔn)備);3.倒板將初發(fā)酵試驗中陽性管中的菌液稀釋一定倍后(菌液渾濁度大的稀釋倍數(shù)合適放大)吸取1mL稀釋菌液進行涂板，或者直接使用接種環(huán)沾取初發(fā)酵陽性菌液進行平板劃線，劃線方式按圖1進板放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。試驗五時間：12月2日10:00到12:00(一部分組員進行試驗四成果的觀測和記錄并進行革蘭氏染色，另一部分組員進行復(fù)發(fā)酵試驗需用的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的準(zhǔn)備<假如試驗二中剩液沒有受污染則直接使用，準(zhǔn)備復(fù)發(fā)酵管，并進行滅菌>,之后對滅菌后的復(fù)發(fā)酵管進行接種)直接準(zhǔn)備4個裝有杜氏小管的發(fā)酵管，按照試驗二的簡介加入試驗二時剩余的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每管5或10mL,若剩余的培養(yǎng)基已經(jīng)受污染，則必須重新配制)。2.滅菌將環(huán)節(jié)1中準(zhǔn)備好的復(fù)發(fā)酵管進行滅菌。3.平板分離試驗成果觀測4.革蘭氏染色挑取環(huán)節(jié)3中的陽性菌落的一小部分進行革蘭氏染色(環(huán)節(jié)如下),記錄成果。a.用培養(yǎng)18～24h的培養(yǎng)物涂片，涂層要??；b.將涂片在火焰上加溫固定，待冷卻后滴加結(jié)晶紫溶液，1min后用水洗去；d.滴加脫色劑，搖動玻片，直止無紫色脫落為止(約20～30s),用水洗去；e.滴加復(fù)染劑，Imin后用水洗去，晾干、鏡檢，呈紫色者為革蘭氏陽性菌，呈紅色者為陰性菌。5.平板分離及革蘭氏染色成果記錄平板分離得到的陽性菌落的對應(yīng)特性按照表4進行記錄，并補充革蘭氏染色成果。6.復(fù)發(fā)酵管的接種使用接種環(huán)挑取環(huán)節(jié)4中革蘭氏染色陰性的菌落的另一部分，直接接種于復(fù)發(fā)酵管中，注意做好編號記錄，放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。內(nèi)容安排：復(fù)發(fā)酵成果的觀測和大腸菌群數(shù)目的MPN記錄時間：12月4日8:00到10:00環(huán)節(jié)和注意事項：按照試驗三中環(huán)節(jié)2的方式進行復(fù)發(fā)酵試驗成果(參照P418頁產(chǎn)酸產(chǎn)氣狀況分析)的記錄。2.大腸菌群數(shù)目的MPN記錄根據(jù)環(huán)節(jié)1的成果，根據(jù)附錄六表3(P450頁),匯報總大腸桿菌群數(shù)。表1水樣采集登記表(1)西安醫(yī)學(xué)院采樣登記表觀測項目水樣編號1水樣編號2水樣編號3采集時間采集時溫度采集地點ABC水體顏色淡黃色淡黃色淡黃色水體渾濁度輕度渾濁輕度渾濁輕度渾濁水體面積180平米180平米180平米水體漂浮物(有無大面積藻類)無無無水體周圍環(huán)境(人員流動密度)較多較多較多(2)西安工業(yè)大學(xué)采樣登記表觀測項目水樣編號1水樣編號2水樣編號3采集時間采集時溫度666水體顏色水體渾濁度輕度渾濁輕度渾濁輕度渾濁水體漂浮物(有無大面積藻類)無無無水體周圍環(huán)境(人員流動密度)稀少稀少稀少醫(yī)學(xué)院(稀釋濃度依次為10-2103104)平均稀稀菌菌比(個/g或個/ml)(個/g或個/ml)西安工業(yè)大學(xué)西安醫(yī)學(xué)院.大腸菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測初發(fā)酵成果(照片)表3初發(fā)酵成果登記表1是是是2否否是3否否否陰性(2)西安工業(yè)大學(xué)2否否是3否否否陰性革蘭氏染色成果(照片)西安醫(yī)學(xué)院陽性成果菌落號濕干菌落描述厚或薄大或小松或密大或小邊緣隆起形狀透明度正面背面水溶性色素透明，半透明所有的菌落厚小無無光滑屬光澤圓潤圓或者形，突起狀深紫黑色深紫黑色無半透明菌落號濕干菌落描述厚或薄松或密邊緣隆起正面背面透明，不透明，半透明所有的菌落厚小