大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

1本文件規(guī)定了大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)中的生產(chǎn)技術(shù)要求、搖瓶液體菌種下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包2也稱液體菌種培養(yǎng)罐，指進行食用菌液體菌種培養(yǎng)的專用設(shè)備，長提供最佳的營養(yǎng)、酸堿度、溫度、供氧量等生長條件，使菌絲快速生長，一定菌球數(shù)量的專用容器。要求不銹鋼材質(zhì)，符合GB/T1在液體菌種發(fā)酵制備過程中發(fā)酵罐內(nèi)保持的空氣壓力（表在液體菌種培養(yǎng)過程中發(fā)酵罐體積與每分鐘通入發(fā)酵罐中無3工作人員應(yīng)保持個人衛(wèi)生，進入液體菌種發(fā)酵車間應(yīng)穿戴經(jīng)消毒處場地環(huán)境應(yīng)符合NY/T528中對場地環(huán)境的規(guī)定。交通方便，水、電源充足，通風(fēng)良好，無有害氣體、煙霧、灰沙，遠離垃圾場、畜禽場舍等有污染源的地方；場地開闊，地面硬化，排水暢通。生液體菌種生產(chǎn)場所地面應(yīng)能防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，應(yīng)有1.0°~1.5°的排水坡液體菌種接種間應(yīng)設(shè)置緩沖間和風(fēng)淋消毒間，緩沖間入口處設(shè)置洗手、接種職工人數(shù)相適應(yīng)的更衣室。接種車間設(shè)封閉式廢物桶，安裝排氣管道或者排4種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室等，規(guī)模要配套，布局要合理。培養(yǎng)室要有調(diào)溫設(shè)備以滿足菌種生產(chǎn)的需要，培養(yǎng)基配制室空間潔凈度要達到萬級以上，菌種檢驗室和母種制作室要有相應(yīng)的實驗檢測設(shè)包括液體菌種發(fā)酵罐、空氣壓縮機、高效空氣過濾器、液體菌種接種器、鍋爐、超凈工作臺、恒溫搖床、恒溫培養(yǎng)箱、除濕機、冰箱、普通光學(xué)顯微鏡、磁力攪拌機、磅秤、天平、酸度計等。其中液體菌種發(fā)酵罐、高壓蒸汽滅菌鍋和蒸汽鍋爐應(yīng)使用經(jīng)政府有關(guān)部門檢驗選用國家、省級認（鑒）定品種及適宜于當?shù)氐膬?yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、抗逆性強、商55.1.1容器將培養(yǎng)基原料溶解，定容。搖瓶液體培養(yǎng)基分裝量不超過搖6液體培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即滅菌。將分裝的搖瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)進5.1.5冷卻冷卻間使用前要進行清潔和除塵處理。將滅菌后搖瓶液體培養(yǎng)基放置在養(yǎng)基降溫至室溫(≤25℃)。將冷卻后的培養(yǎng)基放置于消毒過的超凈工作臺上，嚴格按照無菌操作規(guī)程，用并冷卻后的接種針挑取3～4塊2mm～3mm×2mm～3mm5.3.1培養(yǎng)在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物或者紫外線燈進行消毒，放入25℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)1d，然后置于磁力攪拌器或恒溫搖床上培養(yǎng)，溫度控制在25℃,轉(zhuǎn)速140r/min～160r/min，培養(yǎng)使用前應(yīng)拆分檢查空氣過濾器濾芯，要求無油污、料污、無破損，外殼對檢查后的空氣過濾器高壓蒸汽滅菌，滅菌條件：0.120MPa～0.140MPa、溫度達到121℃~1267培養(yǎng)器初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置以及更換品種時，都要求煮罐和發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)基原料應(yīng)符合NY/T528的要求，同時不溶于水的物料應(yīng)過100目篩。用水符合GB5749的要求。首先用溫水把玉米粉、黃豆粉和配方中其它成分攪拌均勻，不能有體，加水定容至所需體積（液體培養(yǎng)基量為罐體容量的70%～80%為宜），然后加入0時保持進氣管壓0.10MPa～0.14MPa，通入無投料定容完成后，發(fā)酵罐夾層通入冷水，水位低于排水口20cm，關(guān)壓力達到0.05MPa時，緩慢打開排氣閥降壓至0MPa待發(fā)酵罐罐內(nèi)壓力達到0.05MPa時，緩慢打開排氣閥降壓至0MPa，關(guān)閉排氣閥，再次升壓至0.11MPa～0.12MPa，同時打開空氣過濾器滅菌，微開排氣閥，維持50min～60min。滅菌結(jié)束，關(guān)閉空氣過濾器滅菌閥和排氣閥，緩慢打開夾層放水閥入水管，通入冷水，進行冷卻。當罐體壓力表壓力降至0.05MPa時，打開氣泵及時向發(fā)酵罐內(nèi)通入無菌空氣，以防止罐體在冷卻過程中產(chǎn)生負壓造成污染，并使下部冷水向上冷卻較調(diào)節(jié)壓力在0以上直至罐體溫度降至26℃~28℃,等待接種。8用帶有手柄的內(nèi)徑略大于接種口的鐵絲圈纏繞紗布，蘸上95%酒精，制成使壓力降至0，把火焰圈套在接種口上，點燃火焰圈后上的牛皮紙和瓶塞，打開接種口，然后快、穩(wěn)、輕的接入搖瓶液體菌種，然后根據(jù)菌絲生長情況，通過氣泵充氣和調(diào)整放氣閥調(diào)節(jié)罐體壓力表度控制在23℃~25℃、通氣量為1:0.8～1：1條件下進行液體菌種培養(yǎng)。大球蓋菇液體菌種在上述條菌種和培養(yǎng)基均應(yīng)留樣，2℃~4℃下貯存，保存7d以上。a)母種應(yīng)以每個批號3～5支試管，于4℃~6℃下貯存，貯存至經(jīng)轉(zhuǎn)接的栽培袋正常發(fā)菌；大球蓋菇母種、搖瓶液體種和培養(yǎng)器液體菌種生產(chǎn)的每個環(huán)節(jié)都要有作人員現(xiàn)場記錄填寫，定期由技術(shù)主管審核，簽字后歸檔保存，生產(chǎn)記錄檔搖瓶液體菌種樣品、發(fā)酵罐滅菌后的空白培養(yǎng)基樣品應(yīng)在無菌檢測瓊脂平板上25℃恒溫培養(yǎng)2d～5d，及時觀察有無細菌、霉菌、酵母菌等雜菌生長。培養(yǎng)過程中定期從發(fā)酵罐中取出樣品應(yīng)及時鏡檢與無菌檢測，同時確定9有大球蓋菇培養(yǎng)時特有的香氣，無酸味、臭味等異味，發(fā)球狀和叢狀菌絲體大量分布，菌絲粗壯，有隔膜，可見絲、酵母和細菌菌體，檢測方法按照NY/將待接的大球蓋菇三級固體菌種袋（瓶）放置在輸送帶上，輸入至無菌接種區(qū)器將大球蓋菇液體菌種注入（噴入每袋（瓶）接種量15液體菌種生產(chǎn)好后，應(yīng)立即進入菌種生產(chǎn)，若因某些原因不能立即使用培養(yǎng)器內(nèi)通入無菌空氣。保持罐壓0.02MPa～0.04MPa，液溫6℃~10℃