液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第8部分：猴頭菇

1液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第8部分：猴頭菇本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了猴頭菇（Hericiumerinaceus）液體菌種生產(chǎn)的術(shù)語和定義、生產(chǎn)條件、生產(chǎn)技術(shù)、質(zhì)量要求、貯藏、生產(chǎn)記錄等要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于猴頭菇液體菌種的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB150.1壓力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB5749食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T12728食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用菌術(shù)語NY/T528食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1731食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1發(fā)酵罐fermentationbioreactor一種生物反應(yīng)器，是指為活細(xì)胞或酶提供適宜的反應(yīng)環(huán)境，讓他們進(jìn)行細(xì)胞增殖或生產(chǎn)的裝置系統(tǒng)。3.2發(fā)酵罐空消emptyfermentersterilization是指在發(fā)酵罐內(nèi)沒有放發(fā)酵液時(shí)，對整個(gè)空的罐體進(jìn)行滅菌消毒。3.3發(fā)酵罐實(shí)消fermentersterilization是指加入培養(yǎng)基后消毒滅菌。4生產(chǎn)條件生產(chǎn)要求應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。環(huán)境要求應(yīng)符合NY/T1731的規(guī)定。液體種發(fā)酵罐質(zhì)量應(yīng)符合GB150.1的規(guī)定。生產(chǎn)用水標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。25品種選擇選用高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)、商品性好的猴頭菇品種，從具相應(yīng)資質(zhì)的供種單位引種或本單位選育，并清楚地追溯菌種來源。菌種生產(chǎn)過程應(yīng)符合NY/T528的要求。6生產(chǎn)技術(shù)6.1母種制備6.1.1培養(yǎng)基配方去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蛋白胨3g～5g，水1000ml。6.1.2菌種活化將保藏種接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度22℃~24℃,避光恒溫培養(yǎng)10d～15d，菌絲長滿試管或者培養(yǎng)皿檢驗(yàn)合格即可使用。6.2搖瓶生產(chǎn)6.2.1容器采用無色專用玻璃菌甁，用棉塞、硅膠塞或?qū)Ｓ梅饪谕笟饽し饪凇?.2.2培養(yǎng)基配方去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L、pH4.0。6.2.3培養(yǎng)基配制去皮馬鈴薯煎汁1000ml，放入葡萄糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，充分溶解均勻后，裝入搖瓶，裝液量不超過搖甁容量的3/5，搖瓶中放置磁力攪拌棒，封口后待滅菌。6.2.4滅菌將搖瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌，滅菌蒸汽壓力0.11MPa，在121℃下維持20min～30min。6.2.5接種待培養(yǎng)基冷卻至25℃以下，在無菌條件下，用打孔器打孔（5mm孔徑）或接種鉤?。?mm～8mm×5mm~8mm）4塊～5塊活化母種塊迅速轉(zhuǎn)接于搖甁培養(yǎng)基內(nèi)，封口。6.2.6振蕩培養(yǎng)將搖瓶放入搖床內(nèi)，培養(yǎng)溫度22℃~25℃,轉(zhuǎn)速150r/min～170r/min，避光條件培養(yǎng)6d～8d。6.3發(fā)酵罐生產(chǎn)6.3.1發(fā)酵罐空消發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置及更換品種時(shí)，應(yīng)進(jìn)行空消滅菌。蒸氣壓力0.11MPa～0.14MPa、恒壓維持40min。36.3.2培養(yǎng)基配方去皮馬鈴薯（200g）煎汁1L、葡萄糖20g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L、pH4.0。6.3.3投料與定容原料按比例加水后攪拌均勻，加入罐內(nèi)，裝液量為罐體容量的70%～80%，加入0.01%消泡劑，擰緊上料口蓋。6.3.4發(fā)酵罐實(shí)消液體種發(fā)酵罐內(nèi)蒸汽壓力控制在0.11MPa～0.12MPa，恒壓維持60min～90min。6.3.5冷卻滅菌結(jié)束，關(guān)閉空氣過濾器滅菌閥與排氣閥，緩慢打開夾套排氣閥降壓至0MPa，通入冷水降溫；同時(shí)緩慢打開發(fā)酵罐罐內(nèi)排氣閥降壓，待壓力接近0.02MPa～0.04MPa時(shí)向罐內(nèi)通入無菌空氣，調(diào)整排氣閥，維持罐壓0.04MPa～0.05MPa，培養(yǎng)液溫度降至25℃以下時(shí)，關(guān)閉夾套進(jìn)水閥。6.3.6接種將搖瓶接種管和發(fā)酵罐接種口用75%酒精消毒，用95%酒精的火焰圈套在接種口上，輕微打開閥門，使發(fā)酵罐罐內(nèi)壓力為0.01MPa。點(diǎn)燃火焰圈，在火焰保護(hù)下用鑷子去掉瓶塞，打開接種口閥門，將搖瓶菌種注入發(fā)酵罐。接種量為0.5%～1.0%。接種后迅速關(guān)閉接種閥門，去掉火焰圈，繼續(xù)通入無菌空氣。6.3.7發(fā)酵培養(yǎng)根據(jù)菌絲生長情況，適時(shí)調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥門，通入適量無菌空氣，通氣量一般為1：0.8V/V?min～1：1V/V?min，同時(shí)調(diào)節(jié)排氣閥，維持罐壓0.01MPa～0.02MPa，培養(yǎng)溫度控制在22℃~24℃,培養(yǎng)6d～8d。7質(zhì)量要求7.1感官要求采用“看、旋、嗅”的步驟進(jìn)行檢查，應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1猴頭菇液體菌種感官要求7.2生理指標(biāo)7.2.1鏡檢7.2.1.1、取樣接種前，在無菌操作狀態(tài)下將液體菌種取到滅菌后的三角瓶中。7.2.1.1裝片4取一滴液體菌種，帶少量菌球，滴在載玻片上，蓋上蓋玻片。7.2.1.3觀察在400倍下觀察菌絲和液體的狀態(tài)，重點(diǎn)觀察菌絲分枝、隔膜、粗細(xì)、鎖狀聯(lián)合等是否正常，觀察是否有酵母菌、細(xì)菌等異常微生物。7.2.1.4判斷根據(jù)觀察結(jié)果，判斷是否染菌，做出檢測報(bào)告。7.2.2取樣接種取少量猴頭菇菌液，接種于霉菌、細(xì)菌和酵母菌專用培養(yǎng)基中，在22℃~26℃條件下恒溫培養(yǎng)2d~3d，觀察菌絲生長情況。表2猴頭菇液體菌種生理指標(biāo)8貯藏猴頭菇液體菌種生產(chǎn)后應(yīng)立即使用。如不能立即使用，搖瓶液體菌種需降溫保存，在1℃~4℃、暗光條件下可保存4d～