地標(biāo)-編制說(shuō)明-混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測(cè)定技術(shù)規(guī)范

混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測(cè)定技術(shù)規(guī)范編制說(shuō)明一、標(biāo)準(zhǔn)制定工作簡(jiǎn)況本標(biāo)準(zhǔn)任務(wù)來(lái)源于上海市市場(chǎng)監(jiān)督管理局，由心負(fù)責(zé)起草，按照《上海市地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》項(xiàng)目名稱為《混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥（二）標(biāo)準(zhǔn)制定背景近年來(lái)飼料中解熱鎮(zhèn)痛類藥物非法添加現(xiàn)象屢禁不去是抗生素使用大國(guó)，長(zhǎng)期以來(lái)解熱鎮(zhèn)痛類藥物并沒(méi)的關(guān)注，同時(shí)解熱鎮(zhèn)痛類藥物的違法違規(guī)使用并沒(méi)有全事故。另一方面因解熱鎮(zhèn)痛類藥物的治療用藥的特相關(guān)的殘留限量要求。因此，解熱鎮(zhèn)痛類藥物的監(jiān)管同比增長(zhǎng)1.2%，本市總產(chǎn)值已達(dá)81.6億元。其中飼料添劑加工產(chǎn)品總產(chǎn)量6.0萬(wàn)噸,同比增長(zhǎng)40.9%，增速呈現(xiàn)強(qiáng)在畜牧業(yè)生產(chǎn)迅速發(fā)展的當(dāng)下，本標(biāo)準(zhǔn)的建立可以加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測(cè)技術(shù)空白，有助于本市參與開展“三年行動(dòng)方案”（三）主要工作過(guò)程1.成立標(biāo)準(zhǔn)編制小組2021年12月，標(biāo)準(zhǔn)起草組成立，并舉行制大綱。對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)的具體工作進(jìn)行了任務(wù)分工，確2.查詢國(guó)內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料2022年1月～4月，本標(biāo)準(zhǔn)編制組成員查詢資料，確立了建立標(biāo)準(zhǔn)的指導(dǎo)思想，制定了標(biāo)準(zhǔn)的3.確定標(biāo)準(zhǔn)修訂技術(shù)路線，主要內(nèi)容2022年5月～7月，上海市獸藥飼料所召開制組介紹了對(duì)國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法的研究，標(biāo)準(zhǔn)制4.編寫標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿在前期研究工作的基礎(chǔ)上，2024年11月完成了《混依據(jù)依據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則和起草規(guī)則》和GBT20001.5-2017《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第一部分：分析方法樣品采集和制備要求的確定，主要參考了GB/T14699以及GB/T20195規(guī)定的方法和程序進(jìn)第二部分：分析方法試驗(yàn)研究，包括樣品前處理第三部分：分析結(jié)果的判斷，包括不同儀器的判GB/T1.1－2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文則GB/T20001.5-2017標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第GB/T27417－2017合格評(píng)定化學(xué)分析方GB/T32465－2015化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和GB/T23182－2008飼料中獸藥及其他化GB/T32467－2015化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控GB/T33464－2016化學(xué)分析標(biāo)準(zhǔn)操作程GB/T35655－2017化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控GB/T35656－2017化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制實(shí)施指南報(bào)GB/T27417-2017（合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證32467－2015（化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，主要依據(jù)樣品的種類選取適宜的樣品制備方式和前處理方式。樣品采集制備流程與GB/T14699以及GB/T20195兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中描述的在選擇前處理技術(shù)時(shí)，應(yīng)綜合考慮樣本特性和目標(biāo)化合物的物理化學(xué)特性，同時(shí)確保與液相色譜和質(zhì)譜系統(tǒng)的兼容性。本并確保最終樣本溶液與流動(dòng)相兼容，避免色譜應(yīng)針對(duì)解熱鎮(zhèn)痛類藥物的目標(biāo)化合物，確保其完全提項(xiàng)目組摸索出了一套適用與解熱鎮(zhèn)痛類藥物的重現(xiàn)性試樣2g（精確至0.01g于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入25mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，9000r/min離心5min，準(zhǔn)確移取上清液適量稀釋至適宜濃度，混勻，過(guò)膜上液相。取上清液適量，用0.質(zhì)譜上機(jī)凈化過(guò)程如下：依次用3mL甲醇和3m備用液全部過(guò)柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5本標(biāo)準(zhǔn)基于高效液相色譜儀-二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)原理，規(guī)定了液相色譜和質(zhì)譜儀器的基本要求。參照公告和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號(hào)公告。根據(jù)實(shí)際檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，項(xiàng)液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；b)柱溫：40℃;c)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；d)流速：1.0mL/min；e)進(jìn)樣量：20μL。f)流動(dòng)相：A相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉3.0g，加水1000mL，用磷酸調(diào)pH值至7.0），B相為乙腈，梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序%%液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸溶液,B相為乙腈,梯度洗脫程序見表2；c）柱溫：35℃;d）流速：0.3mL/min；e）進(jìn)樣量：2μL。表2梯度洗脫程序%%質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)電離方式：電噴霧電離，正離子模式（ESI+b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；c)脫溶劑氣：800L/Hr；d)反吹氣：50L/Hr；e)霧化器溫度：500℃;f)電離電壓：2.5kV；g)離子源溫度：150℃。h)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子對(duì)、錐孔電壓及碰撞能量見表3。表3各目標(biāo)物多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子對(duì)、錐孔電壓及碰撞能量參考值m/zm/zVm/zm/zV為定量離子本部分主要針對(duì)解熱鎮(zhèn)痛類物質(zhì)識(shí)別和確證的測(cè)定要求專門做了相應(yīng)規(guī)范。主要參考了歐盟有關(guān)食品飼控和確認(rèn)要求、國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)如農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號(hào)公告中規(guī)定物的保留時(shí)間應(yīng)與濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的保留時(shí)無(wú)在我國(guó)，根據(jù)GB31650-2019《食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定安獸藥的非法添加等。在現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)規(guī)范中，農(nóng)業(yè)部第2448號(hào)公告規(guī)定了黃芪多糖注射液中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類、抗病毒類、抗生素類、氟喹酮類等11種化學(xué)藥物（物質(zhì)）檢查方法；以及阿莫西林可溶性粉中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢查方法。同時(shí)《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版對(duì)安乃近、對(duì)乙酰氨基酚、安替比林、氨基比林均有收載，并規(guī)定采用高效液相色譜法、滴定法、紫外—可見分光光度法對(duì)以上藥物進(jìn)行含目前已被30多個(gè)國(guó)家禁用。歐盟對(duì)安乃近在牛奶及食源性動(dòng)物組織均設(shè)定了嚴(yán)格的限量要求。美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（EPA）在1694號(hào)方法（Pharmaceuticals但是，國(guó)內(nèi)外對(duì)飼料中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測(cè)方法少飼料添加劑中的解熱鎮(zhèn)痛類藥物檢測(cè)方法和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)更表2國(guó)內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分析方法匯總表標(biāo)準(zhǔn)名稱測(cè)定方法檢測(cè)條件適用范圍EPA1694:《PharmaceuticalsandPersonalCareProductsinWater,Soil,Sediment,andBiosolidsbyHPLC/MS/MS(2007)》液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法酸性提取，電噴霧正離子化（ESI+）流動(dòng)相：乙腈-0.1%的甲酸水溶液（1:9）梯度水《中華人民共和國(guó)獸藥典》一部液相色譜、紫外分光光度法、容量法甲醇：水（40:60）檢測(cè)波長(zhǎng)241獸藥BJS201713飲料、茶葉及相關(guān)制品中對(duì)乙酰氨基酚等59種化合物的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法甲醇或0.1%甲酸甲醇提取流動(dòng)相：5mmol/L甲酸銨溶液（含0.1%的甲酸）-0.1%甲酸乙腈，梯度飲料、茶葉及相關(guān)制品DB65/T3951-2016水質(zhì)多種藥物殘留的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法流動(dòng)相：乙腈-2mM乙酸銨（pH3.2）水GB/T20747-2006牛和豬肌肉中安乃近代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-紫外檢測(cè)法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法硫酸鈉溶液提取液相流動(dòng)相：水-甲醇，梯度質(zhì)譜流動(dòng)相：5mmol/L乙酸銨溶液（pH4.5）-乙腈，梯度牛和豬肌肉GB/T22971-2008牛奶和奶粉中安乃近代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法流動(dòng)相：5mmol/L乙酸銨溶液（pH3.0）-甲醇，梯度牛奶、奶粉農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第2333號(hào)公告《扶正解毒散中非法添加茶堿、安乃近檢查方法》、《黃連解毒散中非法添加對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸溴己新檢查方法》液相色譜流動(dòng)相：磷酸二氫鈉