T-FJSPSH 001-2023 食品中安賽蜜的測(cè)定 液相色譜法

ICS67.040CCSX04T/FJSPSHT/FJSPSH001-2023本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件由泉州市壹合食品研究院有限公司提出。本文件由福建省食品企業(yè)商會(huì)歸口。本文件主要起草單位：泉州市壹合食品研究院有限公司、晉江市食品行業(yè)協(xié)會(huì)、福建省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、奇峰（福建）食品有限公司、雅客（中國(guó)）有限公司、福建省福食安檢測(cè)技術(shù)有限公司、中紡檢測(cè)（福建）有限公司。本文件主要起草人：閆肅、陳昌熙、何曉玲、林景昌、吳愛(ài)陽(yáng)、蔡志興、李昆朋。1T/FJSPSH001-2023食品中安賽蜜的測(cè)定液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中安賽蜜（乙?；前匪徕洠┑臏y(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中安賽蜜（乙酰磺胺酸鉀）的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理根據(jù)樣品基質(zhì)不同，用水或20%甲醇水溶液提取試樣中的安賽蜜，經(jīng)脫脂、去蛋白處理，過(guò)膜，用配紫外或二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定，以色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除特殊注明外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.1甲醇（液相色譜級(jí)）。4.2乙腈（液相色譜級(jí)）。4.3正己烷。4.4乙醇。4.50.02mol/L硫酸銨溶液：稱取硫酸銨2.642g加水溶解至1000mL。4.610%亞鐵氰化鉀溶液：稱取10g亞鐵氰化鉀加水溶解至100mL。4.720%乙酸鋅溶液：稱取20g乙酸鋅加水溶解至100mL。4.820%甲醇溶液：量取甲醇200ml加水溶解至1000mL。4.910%氨水溶液：量取氨水10ml加水溶解至100mL。4.101%氨水溶液：量取氨水1ml加水溶解至100mL。4.11安賽蜜（乙?；前匪徕洠?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1000g,用流動(dòng)相溶解后移入100mL容量瓶中，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，即含安賽蜜1mg/mL的溶液，或直接購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。4.12安賽蜜（乙酰磺胺酸鉀）標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2mL于50mL容量瓶，加流動(dòng)相至刻度，即含安賽蜜40mg/L的溶液。4.13安賽蜜（乙?；前匪徕洠?biāo)準(zhǔn)使用液:吸取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)中間液0.25mL、1mL、2mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，即得各含安賽蜜1mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、20mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液系列。4.14微孔濾膜0.45μm（水系）。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜儀（配紫外或二極管陣列檢測(cè)器）5.2超聲清洗器5.3離心機(jī)(最大轉(zhuǎn)速10000r/min、50mL角轉(zhuǎn)子)2T/FJSPSH001-20235.4電子天平（感量0.01g、0.0001g）5.5高純水機(jī)5.6渦旋混合機(jī)5.7組織勻漿機(jī)5.8研磨機(jī)6分析步驟6.1樣品制備取多個(gè)預(yù)包裝的飲料、液態(tài)奶等均勻樣品直接混合；非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿；固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻；奶酪、黃油、巧克力等采用50~60℃加熱熔融，并趁熱充分?jǐn)嚢杈鶆?。取其中?00g裝入玻璃容器中，密封，液體試樣于4℃保存，其他試樣于-18℃保存。6.2提取6.2.1水果干制品、蜜餞、水果罐頭、果凍等一般固體試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中,加20%甲醇溶液30mL，旋渦混勻2min，超聲提取25min（55℃),超聲過(guò)程中每5min振搖1次離心管,取出靜置至室溫，以7500r/min的速度離心5min,將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL，重復(fù)以上提取過(guò)程，合并兩次提取液,加水至刻度,搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.2奶粉、面包、糕點(diǎn)、腌漬的蔬菜等高蛋白類試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加水30mL，旋渦混勻2min，超聲提取25min(55℃),超聲過(guò)程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，旋渦混勻2min，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL，重復(fù)以上提取過(guò)程，合并兩次提取液，加水至刻度,搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.3奶油、奶酪、冰淇淋、綠豆糕、堅(jiān)果、油炸類糕點(diǎn)等高脂類試樣稱取樣品2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入正己烷10mL，旋渦混勻2min，60℃水浴加熱10min，加熱過(guò)程中不時(shí)振搖,取出靜置至室溫，加入20mL1%氨水溶液、1mL乙醇,旋渦混勻2min，超聲提取25min（55℃),取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，旋渦混勻2min，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液15mL重復(fù)以上提取過(guò)程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.4果汁、蔬菜汁等一般液體試樣量取樣品10ml于50mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.5果酒、葡萄酒、食醋等低pH值類試樣量取樣品10ml于50mL小燒杯中，用10%氨水調(diào)pH值至中性，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,加少量水洗滌燒杯，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.6液態(tài)奶、風(fēng)味發(fā)酵乳、植物蛋白飲料等高蛋白類液體試樣量取樣品10ml于50mL離心管中，加水30mL，搖勻，超聲提取25min（55℃),超聲過(guò)程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，加入1mL10%亞鐵氰化鉀和1mL20%乙酸鋅溶液，搖勻，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?0%甲醇溶液5mL重復(fù)以上提取過(guò)程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.2.7碳酸飲料等試樣量取樣品10ml于50mL小燒杯中，超聲脫氣10min，用10%氨水調(diào)pH值至中性，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加少量水洗滌燒杯，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。3T/FJSPSH001-20236.2.8蛋黃醬、沙拉醬、果醬等半固體試樣稱取樣品5g（精確至0.01g）于50mL離心管中,加水30mL，60℃水浴加熱20min，取出靜置至室溫，用10%氨水調(diào)pH值至中性，超聲提取25min（55℃),超聲過(guò)程中每5min振搖1次離心管，取出靜置至室溫，以7500r/min的速度離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)移至另一支50mL離心管中。在殘?jiān)性偌尤?mL水重復(fù)以上提取過(guò)程，合并兩次提取液，加水至刻度，搖勻，經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。6.3測(cè)定6.3.1液相色譜儀參考條件分析柱：ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)。流動(dòng)相：0.02mol/L硫酸銨(70%)+甲醇(20%)+乙腈(10%)。波長(zhǎng)：214nm。流速：1mL/min。6.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：進(jìn)樣含安賽蜜（乙?；前匪徕洠?mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、20mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液各10uL，進(jìn)行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以安賽蜜的含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3.3試樣測(cè)定：吸取6.2處理后的試樣溶液10μL進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測(cè)定液中乙酰磺胺酸鉀的含量。7結(jié)果計(jì)算試樣中安賽蜜的含量按下式計(jì)算：X=c×Vm式中:X--試樣中安賽蜜的含量，單位為毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/L)；c--由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得進(jìn)樣液中安賽蜜的量,單位為毫克每升(mg/L)；V--試樣稀釋液總體積,單位為毫升(mL)；m--試樣質(zhì)量,單位為克或毫升(g或mL)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。9其他固體樣品以2g定容體積至50mL計(jì)算，安賽蜜的檢出限為0.004g/kg，定量限為0.01g/kg。半固體樣品以5g定容體積至50mL，安賽蜜的檢出限為0.002g/kg,定量限為0.005g/kg。液體樣品以10mL定容體積至50mL計(jì)算，安賽蜜的檢出限為0.001g/L，定量限為0.0025g/L。4T/FJSPSH001-2023安賽蜜液相色譜圖及光譜圖1mg/L安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖見(jiàn)圖A.1圖A.11mg/L安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖安賽蜜在液相色譜儀二極管陣列檢測(cè)器上的光譜圖見(jiàn)圖A.2圖A.2安賽蜜光譜圖5T/FJSPSH001-2023分別以