添加劑預(yù)混合飼料中氯化膽堿的測定 編制說明

《預(yù)混合飼料中氯化膽堿的測定》（公開征求意見稿）I一、工作簡況 1.1任務(wù)來源 1.2制定背景 1.3工作過程 1.3.2技術(shù)路線和項目方案的制定 2二、標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù) 32.1標(biāo)準(zhǔn)編制原則 32.2主要內(nèi)容 32.3主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù) 32.3.1樣品前處理條件優(yōu)化 32.3.2稱樣量考察 52.3.3流動相考察 62.3.4色譜柱考察 72.3.5色譜條件的選擇性、專屬性和穩(wěn)定性考察 82.3.6試樣溶液穩(wěn)定性考察 92.3.7標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性考察 92.3.8其他陽離子干擾試驗考察 2.3.9線性范圍 2.3.10方法檢出限和定量限 2.3.11方法精密度考察 2.3.12回收率試驗 三、試驗驗證的分析、綜述報告，技術(shù)經(jīng)濟論證，預(yù)期的經(jīng)濟效果 13四、與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對比情況 五、采標(biāo)情況，以及是否合規(guī)引用或采用國際國外標(biāo)準(zhǔn) 13六、與有關(guān)法律、法規(guī)的關(guān)系 七、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù) 八、涉及專利的有關(guān)說明 九、貫徹國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，以及組織措施、技術(shù)措施、過渡期和實施日期的建議等措施建議 14十、其他應(yīng)當(dāng)說明的事項 1四川威爾檢測技術(shù)股份有限公司、國糧武漢科學(xué)研究設(shè)計院有限公司[國家飼料質(zhì)量檢驗檢測中心（武漢）]和全國畜牧總站承擔(dān)《添加劑預(yù)混合飼料中氯化膽2024年1月，四川威爾檢測技術(shù)股份有限公司等接到《添加劑預(yù)混合飼料表1標(biāo)準(zhǔn)主要起草人員及任務(wù)分工人員職稱承擔(dān)任務(wù)2人員職稱承擔(dān)任務(wù) 3選取了3個不同含量的預(yù)混合飼料樣品，分別稱取2g左右樣品于100mL容量瓶中，加約60mL水，搖勻，采用水浴、空氣浴和超聲等3種加熱方式，表2不同加熱方式氯化膽堿測定結(jié)果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）水浴（70℃)空氣?。?0℃)超聲（70℃)8145.78056.18251.7樣品2#15671.915429.116096.6樣品3#8203.88247.78690.14選取了3個不同含量的預(yù)混合飼料贗品，分別稱取2g左右樣品于100mL表3不同提取溫度氯化膽堿測定結(jié)果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）50℃60℃70℃6137.26442.46511.86417.8樣品2#11302.211502.612030.812038.8樣品3#6706.86819.27092.26980.4每10min搖勻，冷卻至室溫，用三氯甲烷-甲醇溶液定容至刻度。搖勻，過濾。5表4不同前處理方式氯化膽堿測定結(jié)果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）三氯甲烷-甲醇三氯甲烷-甲醇三氯甲烷-甲醇+EDTA（2g）三氯甲烷-甲醇+EDTA（3g）1671.91711.8樣品2#1807.31822.91775.91857.3圖2未添加EDTA離子色譜圖圖3添加3gEDTA離子色譜圖圖4添加和不添加EDTA復(fù)合預(yù)混合飼料試樣溶液離子色譜圖離子色譜圖6中，用水稀釋至刻度，混勻，過0.45μm微孔濾膜，備用。結(jié)量基本滿足檢測要求，考慮樣品的均勻性和代表性，最終確表5不同稱樣量氯化膽堿測定結(jié)果（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）0.2g0.5g2g6266.56591.96670.36511.8樣品2#12604.112495.713504.312038.8表6淋洗液考察試驗條件No.淋洗液成分流速（mL/min）流動相1甲磺酸溶液，3.5mmol/L流動相2檸檬酸溶液（檸檬酸+嘧啶二羧酸）流動相3硝酸溶液，9mmol/L表7不同流動相氯化膽堿測定結(jié)果1（n=3）樣品名稱含量（mg/kg）水3.5mmol/L甲磺酸9mmol/L硝酸6833.76871.76817.9樣品2#12844.811725.912527.7樣品3#7112.47036.67179.6表8不同流動相氯化膽堿測定結(jié)果2（n=3）樣品名稱20μg/mL氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積水3.5mmol/L甲磺酸9mmol/L硝酸平行1—0.2673200.770628平行2—0.2677150.7695124平行3—0.2669580.77112547圖59mmol/L硝酸淋洗液20μg/mL氯化膽堿離子色譜圖圖63.5mmol/L甲磺酸淋洗液20μg/mL氯化膽堿離子色譜圖分別考察盛翰SH-CC-4、皖儀MS-5C-P2和ThermoCS1圖7CS12A陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖圖8SH-CC-4陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖8圖9MS-5C-P2陽離子色譜柱氯化膽堿離子色譜圖，，不同濃度目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液保留時間的RSD值均小于0.50%，峰面積的和專屬性滿足定性和定量測定要求，該方法選擇性、專屬性表9色譜條件的選擇性、穩(wěn)定性和專屬性考察試驗結(jié)果氯化膽堿(μg/mL）出峰時間（min）RSD（%）平行1平行2平行3平行4平行5平行60.7512.156712.166712.166712.150012.170012.11330.1712.123312.103312.113312.113312.06670.173.012.063312.066712.090012.086712.096711.96670.407.511.910011.876711.846711.863311.880011.74000.5011.706711.703311.733311.723311.736711.75670.173011.523311.533311.536711.536711.53670.056011.376711.370011.370011.353311.366711.35330.08氯化膽堿(μg/mL）峰面積(μs/cm*min）RSD（%）平行1平行2平行3平行4平行5平行60.750.0654030.0664710.0618880.0658270.0633330.0635142.740.1320020.1274530.1250390.1328470.1287710.1337412.6493.00.2474520.2468970.2342050.2494680.2445770.2256733.897.50.6753440.658720.6450770.6652520.6376070.6788742.481.4651091.5453611.5665251.4660741.5506791.562843303.1366083.160273.1478873.1700633.1697623.1955560.65604.8042474.8166454.8391124.7760634.8403824.8365450.53性，結(jié)果見表10。結(jié)果表明，試樣溶液放置0h~24h峰面積變化不大，偏差均表10試樣溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果（n=3）目標(biāo)化合物時間（h）峰面積（mAU）偏差/%氯化膽堿00.81329740.83363580.8121720.8165280.844238200.820537240.816598配制2.0mg/mL氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于2℃~8℃冰箱中保存，每10次氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性，結(jié)果見表11。結(jié)果表明，氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液90天內(nèi)穩(wěn)定，確定氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液有效期為3個月。表11標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果序號檢測濃度/(μg/mL）配置濃度/(μg/mL）偏差/%平行1平行2平行3平均值183.371283.809482.245283.141983.77430.38283.469183.259482.958483.229083.77430.33382.54783.803382.76183.037183.77430.44483.803982.535479.962482.100683.7743序號檢測濃度/(μg/mL）配置濃度/(μg/mL）偏差/%平行1平行2平行3平均值582.632182.686382.974682.764383.77430.61682.432382.176582.696482.435183.77430.81783.132382.079982.924482.712283.77430.64881.639082.090282.933882.221083.77430.94982.432382.080482.974482.495783.77430.77圖10鋰、鈉、銨、鉀、鎂和鈣對氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖樣溶液中氯化膽堿色譜峰的保留時間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液中氯化膽堿色譜峰的保留時表12氯化膽堿線性范圍、線性方程及決定系數(shù)（R2）化合物線性范圍(μg/mL）線性方程R2氯化膽堿y=0.077186x-0.086930.999373量限。結(jié)合稱樣質(zhì)量、定容體積和稀釋體積，計算檢出限20mg/kg、定量限50氯化膽堿的測定結(jié)果批內(nèi)、批間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（表13精密度試驗結(jié)果樣品批次氯化膽堿/mg/kg平均值mg/kg批內(nèi)RSD(%)批間RSD(%)復(fù)合預(yù)混合飼料1I12480126891261412979129071299512777126441228012616126501255913235126642.46III123641176711906126951209713093123214.09復(fù)合預(yù)混合飼料2I886.5909.1886.9854.6862.9838.78732.942.82871.2855.3861.4840.6857.3850.1856III896.4869.8848.4824.7854.0813.38513.54維生素預(yù)混合飼料I819.6823.3789.0788.4777.5814.58022.413.03851.5854.1840.7856.0841.8841.38480.83III814.3794.2808.7800.4846.2827.38152.33間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表14。結(jié)果表明，按照上述方法和條件，氯化膽堿的平均回收率在70.26%~100.39%，批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.64%表14回收率試驗結(jié)果ⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢ果目前，對比ISO等國際組織和其他國家有關(guān)預(yù)混合飼料中氯化膽堿檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法、與國內(nèi)同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容對比情況見表15。結(jié)果表明，本標(biāo)準(zhǔn)檢測表15與國內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對比情況標(biāo)準(zhǔn)編號和名稱適用范圍檢測項目檢出限和定量限GB/