腸桿菌科的檢驗（臨床微生物檢驗課件）

埃希菌屬細(xì)菌鑒定1掌握大腸埃希菌主要的生物學(xué)性狀23學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉大腸埃希菌臨床意義掌握大腸埃希菌微生物學(xué)檢驗

大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，是人類和動物腸道正常菌群，在腸道合成VitB、VitK（營養(yǎng)作用）和拮抗腐敗菌繁殖（拮抗作用）。在一定條件下，它為條件致病菌，在腸道中有少數(shù)大腸桿菌如致病性大腸桿菌對人類有致病作用。埃希菌屬—大腸埃希菌大腸埃希菌革蘭染色大腸埃希菌的電鏡圖周身鞭毛菌體莢膜一、生物學(xué)性狀1.形態(tài)與染色

G-

短桿菌，多數(shù)有鞭毛，某些菌株尤其是引起腸道外感染的菌株有莢膜或微莢膜和周身菌毛。不形成芽胞。埃希菌屬—大腸埃希菌埃希菌屬—大腸埃希菌2.培養(yǎng)特性在液體培養(yǎng)基中呈均勻混濁生長。在血平板上為2~3mm、圓形、灰白色，光滑、濕潤、的菌落。易乳化。某些菌株可形成β-溶血。在腸道選擇性培養(yǎng)基上因可分解乳糖，形成有色菌落。大腸埃希菌在血平板上菌落埃希菌屬—大腸埃希菌

中國蘭：藍(lán)色菌落

EMB：紫黑色菌落

MAC或SS平板：紅色菌落3.生化反應(yīng)本菌能發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

A．大腸埃希菌C.對照AA+-

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2S埃希菌屬—大腸埃希菌MIU++-

3.生化反應(yīng)葡乳甘IMRVPC苯丙U硝賴鳥氨對+++++----+++-埃希菌屬—大腸埃希菌IMViC＋＋－－

4.抗原結(jié)構(gòu)：（1）O抗原：是LPS，耐熱，100℃不能滅活，目前已知有171種，是血清學(xué)分型的基礎(chǔ)。

（2）H抗原：是不耐熱的蛋白質(zhì)，已知有56種，均為單相菌株。

（3）K抗原：是多糖莢膜抗原，在K抗原存在時能阻止O凝集。已知有100種，不是每個菌株均有K抗原。

大腸桿菌的血清型別按O：K：H順序，以數(shù)字表示，如O111：K58：H2，O157：H7。埃希菌屬—大腸埃希菌（一）致病物質(zhì)——又稱粘附素，由普通菌毛構(gòu)成，能凝集紅細(xì)胞和粘附粘膜上皮細(xì)胞。定植因子不耐熱腸毒素（LT），通過激活腺苷酸環(huán)化酶，使cAMP濃度增高，導(dǎo)致腹瀉。耐熱性腸毒素（ST），通過激活鳥苷酸環(huán)化酶，使cGMP濃度增高，導(dǎo)致腹瀉。K抗原——具有抗吞噬作用。腸毒素K

二、臨床意義

埃希菌屬—大腸埃希菌埃希菌屬—大腸埃希菌（二）所致疾病1．機會感染大腸埃希菌常引起人類腸道外感染如泌尿系感染、膽囊炎、腹膜炎、手術(shù)切口感染等，菌血癥及新生兒腦膜炎等。2．腸道感染大腸埃希菌是人和動物腸道正常菌叢的成員，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴(yán)重腹瀉，并能引起致死性并發(fā)癥如溶血性尿毒綜合征（HUS）。

埃希菌屬—大腸埃希菌菌名英文縮寫所致疾病腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌ETEC致嬰兒和旅游者腹瀉腸致病型大腸埃希菌EPEC主要致嬰幼兒腹瀉腸侵襲型大腸埃希菌EIEC主要侵犯較大兒童和成人，可致腹瀉、里急后重和膿血便腸出血型大腸埃希菌EHEC可引起出血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒綜合征腸集聚型大腸埃希菌EaggEC引起嬰兒持續(xù)性腹瀉、脫水、偶有血便引起腹瀉的致病性大腸埃希菌種類及所致疾病三、微生物學(xué)檢驗1.腸道外感染埃希菌屬—大腸埃希菌埃希菌屬—大腸埃希菌

中國蘭：藍(lán)色菌落

EMB：紫黑色菌落

MAC或SS平板：紅色菌落AA+-

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2S埃希菌屬—大腸埃希菌MIU++-

IMViC＋＋－－大腸埃希菌API10聯(lián)診斷試劑盒埃希菌屬—大腸埃希菌2.腸道感染埃希菌屬—大腸埃希菌引起腹瀉的致病性大腸埃希菌鑒定在腸道選擇平板上為發(fā)酵乳糖的有色菌落（EIEC為無色菌落）KIA：多為＋＋＋－MIU：＋＋－IMViC：＋＋－－致病性大腸桿菌需作血清學(xué)鑒定或毒力測定埃希菌屬—大腸埃希菌ETEC的鑒定方法LTST生物學(xué)方法家兔或小白鼠腸袢試驗家兔或小白鼠腸袢試驗皮膚毛細(xì)血管通透性試驗乳鼠灌胃試驗免疫學(xué)方法ELISAELISA固相放免分子生物學(xué)法基因探針基因探針ETEC鑒定：分離培養(yǎng)+生化反應(yīng)+血清分型+腸毒素測定。ST和LT腸毒素的檢測EPEC的鑒定血清學(xué)分型先用多價致病性大腸埃希菌診斷血清做玻片凝集試驗，如凝集再EPEC診斷血清進行O：H分型以確定血清型。EPEC檢測：分離培養(yǎng)+生化反應(yīng)+血清分型。EIEC的鑒定EIEC生化試驗與志賀菌相似：①發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，②不發(fā)酵或遲分解乳糖，③多數(shù)菌株動力陰性，④賴氨酸脫羧酶陰性。

EIEC檢測：分離培養(yǎng)+生化反應(yīng)+血清分型+毒力試驗。血清學(xué)試驗：先用多價致病性大腸埃希菌診斷血清做玻片凝集試驗，如凝集再用EIEC診斷血清進行O：H分型以確定血清型。與志賀菌抗血清有交叉反應(yīng)。

毒力測定：豚鼠眼結(jié)膜試驗。EIEC與志賀菌的鑒別試驗生化反應(yīng)鑒別試驗EIEC志賀菌粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸＋－醋酸鹽利用＋－賴氨酸脫羧＋－EIEC的鑒定EHEC的鑒定血清學(xué)分型：先用多價致病性大腸埃希菌診斷血清做玻片凝集試驗，如凝集再用EHEC診斷血清進行O：H分型以確定血清型。EHEC檢測：分離培養(yǎng)+血清分型+生化反應(yīng)。

血便患者均應(yīng)常規(guī)作O157：H7的培養(yǎng)。山梨醇試驗-的菌株均能產(chǎn)生毒素。（正常菌群中的大腸桿菌約在孵育≤24h山梨醇+）。大腸桿菌O157在山梨醇平板上的菌落

EAggEC檢測：用液體培養(yǎng)-凝集試驗檢測細(xì)菌對細(xì)胞的粘附性或用DNA探針技術(shù)。EAggEC鑒定引起腹瀉的致病性大腸埃希菌鑒定依據(jù)在腸道選擇平板上為發(fā)酵乳糖的有色菌落（EIEC為無色菌落）KIA上：多為＋＋＋－；EIEC：－＋－－IMViC：＋＋－－致病性大腸埃希菌需作血清學(xué)鑒定或毒力測定致病性大腸埃希菌鑒定志賀菌屬細(xì)菌鑒定1掌握志賀菌屬細(xì)菌主要的生物學(xué)性狀23學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉志賀菌屬細(xì)菌臨床意義掌握志賀菌屬細(xì)菌微生物學(xué)檢驗志賀菌屬概述志賀菌屬是主要的腸道致病菌之一，是引起人類細(xì)菌性痢疾的病原體。在伯杰手冊（1984）中將志賀菌分為4個血清群：A群為痢疾志賀菌，B群為福氏志賀菌，C群為鮑氏志賀菌，D群為宋內(nèi)志賀菌。一、生物學(xué)性狀：形態(tài)與染色G-

短桿菌，無鞭毛，無莢膜，有

菌毛，不形成芽胞。志賀菌屬細(xì)菌鑒定福氏志賀菌純培養(yǎng)鏡下染色形態(tài)志賀菌屬細(xì)菌鑒定2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，因不發(fā)酵乳糖，在腸道選擇性培養(yǎng)基上形成無色菌落（宋內(nèi)志賀菌遲緩發(fā)酵）。福氏志賀菌在SS平板上及中國藍(lán)平板上的無色菌落3.生化反應(yīng)氧化酶陰性，不分解乳糖（宋內(nèi)遲緩分解），分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，A群不分解甘露醇、D群β-半乳糖苷酶+、鳥氨酸脫羧酶試驗陽性。

B．宋內(nèi)志賀菌C.對照KA--

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2S志賀菌屬細(xì)菌鑒定MIU-+-

3.生化反應(yīng)葡乳甘IMRVPC苯丙U硝賴鳥氨對+-+++----+-+-志賀菌屬細(xì)菌鑒定IMViC＋＋－－O抗原是分類的依據(jù)，O抗原分為群特異性抗原和型特異性抗原。志賀菌分為4個血清群，44個血清型。5.抵抗力：較弱，對酸敏感。4.抗原結(jié)構(gòu)只有O、K抗原，無H抗原。志賀菌屬細(xì)菌鑒定（一）致病物質(zhì)——普通菌毛，黏附于腸粘膜上皮細(xì)胞，引起炎癥反應(yīng)定植因子內(nèi)毒素外毒素（Vero毒素）毒素

二、臨床意義

志賀菌屬細(xì)菌鑒定腸毒素性神經(jīng)毒性細(xì)胞毒性（二）所致疾病細(xì)菌性痢疾急、慢性菌痢中毒性菌痢帶菌者三、微生物學(xué)檢驗志賀菌屬細(xì)菌鑒定（一）檢驗程序（二）檢驗方法1.分離培養(yǎng)：SS平板和中國藍(lán)平板。志賀菌屬細(xì)菌鑒定SS平板：無色菌落；中國蘭：無色菌落2.鑒定：G-桿菌無芽胞、氧化酶陰性（1）初步鑒定：用KIA和MIU。將在KIA上出現(xiàn)KA--，MIU上出現(xiàn)-+/--，進一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。志賀菌屬細(xì)菌鑒定KA--

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2SMIU-+/--

（2）最終鑒定：全面生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗。2.鑒定：A群：甘露醇-;D群β-半乳糖苷酶+，鳥氨酸+。志賀菌屬細(xì)菌鑒定志賀菌屬細(xì)菌鑒定血清學(xué)試驗生理鹽水對照-志賀多價血清+宋內(nèi)血清+

3.鑒別試驗：（1）志賀菌屬與大腸埃希菌的鑒別，志賀菌屬與大腸埃希菌之間的DNA相關(guān)性很高，尤其是與EIEC在生化特征上難以鑒別，在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)。下述特性有助于鑒定志賀菌種：①無動力，賴氨酸陰性；②發(fā)酵糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（福氏志賀菌6型、鮑氏志賀菌13和14型、痢疾志賀菌3型除外）；

③醋酸鈉-、葡萄糖銨-、粘質(zhì)酸鹽-。志賀菌屬細(xì)菌鑒定（2）與類志賀鄰單胞菌鑒別：可用動力和氧化酶試驗加以鑒別，志賀菌屬均為陰性，而類志賀鄰單胞菌為陽性。

（3）與傷寒沙門菌鑒別：傷寒沙門菌在KIA培養(yǎng)基上的表現(xiàn)與志賀菌相似，鑒別點是傷寒沙門菌硫化氫和動力陽性，能與沙門菌屬因子血清（OA-F、O9、Vi）凝集而不與志賀菌屬因子血清凝集。志賀菌屬細(xì)菌鑒定（4）血清學(xué)鑒定：凡生化反應(yīng)符合志賀菌屬者均需作血清學(xué)鑒定，可先用志賀菌屬4種多價血清作玻片凝集試驗，凝集者再進一步作定型鑒定。我國現(xiàn)有的定群及定型診斷血清包括痢疾志賀菌1型和2型血清，福氏志賀菌(1～6型)血清，鮑特志賀菌(1～6型)和宋內(nèi)志賀菌血清。

在國內(nèi)各地報告的志賀菌屬感染以（B群）福氏志賀菌為多見，約占總數(shù)的70％以上，其次為（D群）宋內(nèi)志賀菌及A群2型。在B群中又以1b、2a及3型居多。志賀菌屬細(xì)菌鑒定志賀菌屬細(xì)菌鑒定依據(jù)在腸道選擇平板上為不發(fā)酵乳糖的無色菌落（宋內(nèi)志賀菌培養(yǎng)48~72小時為有色菌落，遲緩發(fā)酵乳糖）G-桿菌、無芽胞、散在排列KIA：多為－＋－－MIU：－＋/－－IMViC：＋/－

＋－－血清學(xué)試驗：生理鹽水對照陰性、志多血清凝集、群血清凝集志賀菌屬細(xì)菌鑒定沙門菌屬細(xì)菌鑒定1掌握沙門菌屬細(xì)菌主要的生物學(xué)性狀23學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉沙門菌屬細(xì)菌臨床意義掌握沙門菌屬細(xì)菌微生物學(xué)檢驗沙門菌屬概述該菌屬于1880年發(fā)現(xiàn)，是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬，種類繁多，血清型更為復(fù)雜，至今已發(fā)現(xiàn)沙門菌屬有2400多個血清型。目前沙門菌屬分為6個亞屬，臨床上分離的沙門菌株99%是亞群1中的菌種。沙門菌屬致病性是有種屬特異性，人類是傷寒沙門菌和甲、乙、丙三型副傷寒沙門菌的天然宿主，有些沙門菌專對動物致病，有些沙門菌對人和動物均可致病。沙門菌可致多種感染，輕者為自愈性胃腸炎、重者可引起致死性傷寒。一、生物學(xué)性狀：

1.形態(tài)與染色G-桿菌，無莢膜，無芽胞，周身鞭毛，多數(shù)菌有菌毛。沙門菌屬細(xì)菌鑒定周身鞭毛普通菌毛G-桿菌散在排列沙門菌屬細(xì)菌鑒定2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，因不發(fā)酵乳糖，在腸道選擇性培養(yǎng)基上形成無色半透明S型菌落菌落，與志賀菌菌落相似。傷寒沙門菌在SS和中國藍(lán)平板上的無色菌落中國藍(lán)平板、MAC平板、EMB平板－均為無色菌落。SS平板－無色菌落，產(chǎn)H2S菌株，菌落中心呈黑色。沙門菌屬細(xì)菌鑒定沙門菌屬細(xì)菌鑒定傷寒沙門菌在血平板、SS平板及MAC平板上18~24小時菌落鼠傷寒沙門菌在SS平板及MAC平板上18~24小時菌落3.生化反應(yīng)氧化酶陰性，不分解乳糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（傷寒沙門菌不產(chǎn)氣）。B．沙門菌屬細(xì)菌C.對照KA+/-+/-

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2S沙門菌屬細(xì)菌鑒定MIU+--

3.生化反應(yīng)葡乳甘IMRVPC苯丙U硝賴鳥氨對+-+-+-+--+++-沙門菌屬細(xì)菌鑒定IMViC－＋－＋/－幾種沙門菌的主要生化反應(yīng)菌種KIAMIU甲基紅伏普枸櫞酸鹽苯丙氨酸賴氨酸鳥氨酸斜面底層氣體H2S動力吲哚尿酶PAKA+-/++--+----+PBKA+++++--+--/+-++S.typhimuriunKA+++++--+-+-++PCKA+++++--+---++S.choleraeKA++/-+--+-+-++S.typhiKA-+/-+--+--/+-+-S.enteritidisKA+++++--+-+-++沙門菌屬細(xì)菌鑒定O抗原是分群的依據(jù)，H抗原是分型依據(jù)。4.抗原結(jié)構(gòu)有O、H和Vi抗原。沙門菌屬細(xì)菌鑒定O抗原有58種，以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列，現(xiàn)已排到第67種，其中有9種被刪除，故數(shù)字是不連續(xù)的。每一個血清型可含有一種或數(shù)種OAg。凡含共同抗原成分的血清型歸于一個群，2400多個血清型沙門菌分為A、B、C、D……42群，臨床上分離菌株98%以上屬于A~F群。沙門菌屬細(xì)菌鑒定

O抗原：化學(xué)成分為脂多糖；耐熱；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)顆粒狀凝集；沙門菌分群依據(jù)。

H抗原：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)；不耐熱；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)絮狀凝集；沙門菌分型依據(jù)。H抗原有2相，第1相為特異性，用小寫英文字母表示，第2相為非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。

Vi抗原：位于菌體外層；抗原性強，相應(yīng)抗體可作為篩選帶菌者指標(biāo)；不耐熱；能阻止O抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合；傷寒沙門菌和丙型副傷寒沙門菌有Vi抗原。幾種沙門菌的抗原組分組（群）菌名O抗原H抗原第1相第2相A甲型副傷寒沙門菌1，2，12a-B乙型副傷寒沙門菌1，4，5，12b1，2鼠傷寒沙門菌1，4，5，12i1，2C

丙型副傷寒沙門菌6，7，Vic1，5豬霍亂沙門菌6，7c1，5D傷寒沙門菌9，12，Vid-腸炎沙門菌1，9，12g.m-E鴨沙門菌3，10e、h1、6F阿伯丁沙門菌11i1、2沙門菌屬細(xì)菌鑒定（一）致病物質(zhì)——普通菌毛，能黏附于小腸粘膜上皮細(xì)胞。定植因子內(nèi)毒素腸毒素（某些菌株產(chǎn)生）K抗原——具有抗吞噬作用。毒素Vi

二、臨床意義

沙門菌屬細(xì)菌鑒定

（二）所致疾病沙門菌主要通過污染食品和水源經(jīng)口感染，引起人類和動物的沙門菌病。1．胃腸炎（食物中毒）：此型最為常見，引起輕型或暴發(fā)型腹瀉，伴有低熱，惡心和嘔吐。2．菌血癥或敗血癥：以豬霍亂沙門菌感染為多，無明顯的胃腸炎癥狀；表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)等。常伴有局部病灶如膽囊炎、骨髓炎等。往往出現(xiàn)血培養(yǎng)陽性而糞便培養(yǎng)陰性的結(jié)果。沙門菌屬細(xì)菌鑒定3．腸熱癥：即指傷寒和副傷寒。以傷寒的發(fā)病過程為例沙門菌屬細(xì)菌鑒定4．?dāng)y帶者：傷寒沙門菌感染過后約3％患者可成為攜帶者。三、微生物學(xué)檢驗沙門菌屬細(xì)菌鑒定（一）檢驗程序腸熱癥不同標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)情況陽性檢除率發(fā)病周數(shù)10090807060504030201012345678血標(biāo)本糞便標(biāo)本尿標(biāo)本沙門菌屬細(xì)菌鑒定（二）檢驗方法2.分離培養(yǎng)：血平板、MAC/EMB/中國藍(lán)或SS平板。沙門菌屬細(xì)菌鑒定血平板：灰白色菌落，無溶血；SS平板：無色菌落，產(chǎn)H2S中心帶黑點；MAC/EMB/中國藍(lán)：無色菌落1.增菌：膽鹽葡萄糖肉湯、GN或SF：混濁生長。3.鑒定：G-桿菌無芽胞、氧化酶陰性（1）初步鑒定：用KIA和MIU。將在KIA上出現(xiàn)KA+/-+/-，MIU上出現(xiàn)+--，進一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。沙門菌屬細(xì)菌鑒定KA+/-

+/-

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2SMIU+--

（2）最終鑒定：全面生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗。3.鑒定：沙門菌屬細(xì)菌鑒定沙門菌屬細(xì)菌鑒定血清學(xué)試驗①A-F-O多價血清②單價O血清：（凝集順序）

O：O4O3、10O7、O8O9O2O11B群E群C1、C2DAF

A～FO多價血清+O9血清+生理鹽水對照-沙門菌屬血清學(xué)試驗及生理鹽水對照沙門菌屬細(xì)菌鑒定

總之：先用A-F多價O血清做凝集試驗，再用O因子血清確定O群后，用H因子血清檢查第一相抗原，如果是雙相菌，進一步用復(fù)合因子血清檢查第二相抗原。首先用A-F多價O診斷血清進行初步鑒定；再用O因子血清鑒定到群（A、B、C、D、E、F）；再用H因子第1相血清輔助鑒定型；若生化反應(yīng)符合沙門菌，A-F診斷血清不凝集，應(yīng)考慮是否有Vi抗原，將待檢菌液加熱后，再進行A-F多價O血清凝集試驗。A-F多價O診斷血清凝集試驗?zāi)疧因子診斷血清凝集試驗H因子診斷血清凝集試驗?zāi)醪借b定鑒定血清群鑒定血清型沙門菌屬細(xì)菌鑒定

4.鑒別試驗：（1）傷寒沙門菌與志賀菌鑒別：硫化氫和動力試驗，前者均+，后者均-；傷寒沙門菌與A~FO多價血清凝集，志賀菌與志賀多價血清凝集。沙門菌屬細(xì)菌鑒定（2）產(chǎn)H2S沙門菌與變形桿菌鑒別：脲酶和苯丙氨酸脫氨酶，前者均陰性，后者均陽性。在血平板上前者無遷徙現(xiàn)象，后者有。（三）免疫學(xué)診斷1．肥達(dá)試驗測傷寒、副傷寒等抗體

2．帶菌者篩檢測Vi抗體效價≥10

沙門菌屬細(xì)菌鑒定肥達(dá)反應(yīng)（WidalTest）

用已知傷寒沙門菌O抗原和H抗原，以及甲、乙、丙三型副傷寒沙門菌H抗原作為診斷菌液與患者血清作定量凝集試驗，測定血清中有無相應(yīng)抗體極其效價，可輔助傷寒和副傷寒的診斷。腸熱癥病人血清抗體出現(xiàn)情況10090807060504030201012345678陽性檢除率發(fā)病周數(shù)沙門菌屬細(xì)菌鑒定（1）肥達(dá)反應(yīng)結(jié)果判定：O效價≥80、H效價≥160、副傷寒H效價≥80。

（2）O與H抗體的診斷意義：

①O、H效價均升高：已感染傷寒；②O、H效價均低于正常值：未感染沙門菌免疫力低下；③O升高、H正常：某型沙門菌感染早期；④H升高、O正常：以往接種過疫苗或非特異性回憶反應(yīng)。（3）雙份血清的肥達(dá)反應(yīng)：后一次較前一次抗體效價增高4倍以上，有診斷價值。沙門菌屬細(xì)菌鑒定生理鹽水＋待檢血清＋診斷抗原傷寒O傷寒H甲型副傷寒H乙型副傷寒H反應(yīng)6小時45℃觀察結(jié)果1:401:801:1601:3201:6401:640沙門菌屬細(xì)菌鑒定沙門菌屬細(xì)菌鑒定H與O抗體的性質(zhì)及其消長意義抗體類型體內(nèi)出現(xiàn)情況體內(nèi)出現(xiàn)情況O抗體IgM出現(xiàn)較早，維持時間短高低高低H抗體IgG出現(xiàn)較晚，維持時間長高低低高患腸熱癥可能性大一般可排除感染感染早期或其他沙門菌引起的交叉反應(yīng)預(yù)防接種或非特異性回憶反應(yīng)沙門菌屬細(xì)菌鑒定依據(jù)在腸道選擇平板上為不發(fā)酵乳糖的無色菌落（SS平板上菌落中心有黑點）KIA：多為KA＋＋MIU：＋－－IMViC：－

＋－＋/－血清學(xué)試驗：生理鹽水對照陰性、A-F多價O血清凝集、群血清凝集沙門菌屬細(xì)菌鑒定變形桿菌屬學(xué)習(xí)目標(biāo)１掌握變形桿菌屬細(xì)菌的生物學(xué)性狀２熟悉變形桿菌屬細(xì)菌的致病性３掌握變形桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗變形桿菌屬是一群動力+，H2S+，苯丙氨酸脫氨酶+，脲酶+的細(xì)菌。廣泛存在于泥土、水和被糞便污染的物質(zhì)中，能引起食物中毒和泌尿系感染等多種感染。變形桿菌屬概述變形桿菌屬普通變形桿菌奇異變形桿菌產(chǎn)黏變形桿菌潘氏變形桿菌四種一、生物學(xué)特性1．形態(tài)染色G-桿菌，高度多形性，呈球形或絲狀。有周身鞭毛，運動活潑，無芽胞，無莢膜。普通變形桿菌純培養(yǎng)鏡下形態(tài)變形桿菌屬細(xì)菌鑒定變形桿菌屬細(xì)菌鑒定2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在普通平板和血平板上可呈波紋薄膜狀生長，即遷徙生長。普通變形桿菌在普皿和血皿中的遷徙現(xiàn)象變形桿菌屬細(xì)菌鑒定在腸道選擇性培養(yǎng)基中因不發(fā)酵乳糖，形成無色透明或半透明菌落。產(chǎn)H2S菌株在SS平板上的菌落中心可呈黑色。普通變形桿菌在SS、MAC平板和中國藍(lán)平板上的菌落

遷徙現(xiàn)象即細(xì)胞集群現(xiàn)象：細(xì)菌在一段時間生長中細(xì)胞長20～80um，鞭毛增多，產(chǎn)生粘液，由接種點向外移動，形成薄膜，繼而細(xì)胞分裂，團聚，停止移動，形成環(huán)狀；如此反復(fù)，在一個平板上可見到2～3個同心環(huán)，一部分菌呈擴展生長形成獨立的菌落。變形桿菌屬細(xì)菌鑒定遷徙現(xiàn)象（3）生化反應(yīng)：變形桿菌屬細(xì)菌鑒定MIU

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2SKA+++++奇異變形桿菌在API-10聯(lián)診斷試驗劑盒上生化現(xiàn)象（3）生化反應(yīng)：變形桿菌屬細(xì)菌鑒定葡乳甘IMRVPC

U苯丙硝賴鳥氨對+

--++--+

++---幾種變形桿菌的生化反應(yīng)變形桿菌屬細(xì)菌鑒定（4）抗原構(gòu)造：本屬細(xì)菌中的某些菌株如X19、X2、XK的O抗原與某些立克次體有共同抗原，能出現(xiàn)交叉凝集反應(yīng)，臨床上用這些變形桿菌代替立克次體與患者的血清作凝集反應(yīng)，可作為立克次體病的輔助診斷試驗，稱為外-斐試驗或外-斐反應(yīng)。外斐試驗（OX19）（滴度1：20~1：1280）變形桿菌屬細(xì)菌鑒定二、臨床意義變形桿菌屬細(xì)菌鑒定奇異變形桿菌和普通變形桿菌引起人的原發(fā)性和繼發(fā)性感染，是泌尿道感染的主要病原菌之一（僅次于大腸埃希菌），可由此產(chǎn)生菌血癥，還常引起傷口、呼吸道等多種感染，由變形桿菌造成的新生兒臍帶感染可導(dǎo)致高度致死性菌血癥和腦膜炎。奇異變形桿菌亦是嬰兒腸炎的病原菌之一。潘氏變形桿菌，是引起醫(yī)院感染的病原菌。（二）臨床意義變形桿菌屬廣泛存在于自然界、人和動物的腸道中，是條件致病菌和醫(yī)院感染的常見菌。本屬菌中由普通變形桿菌和奇異變形桿菌引起的感染最為常見，發(fā)病率僅次于大腸埃希菌，是引起醫(yī)院感染的主要病原菌原發(fā)感染——食物中毒繼發(fā)感染——尿路感染（僅次于大腸埃希菌）、創(chuàng)傷、腹膜炎、敗血癥等變形桿菌屬細(xì)菌鑒定變形桿菌屬細(xì)菌鑒定三、微生物學(xué)檢驗（一）檢驗程序（二）檢驗方法1.分離培養(yǎng)：血平板、SS平板和中國藍(lán)平板。

血平板：灰白色菌落、遷徙現(xiàn)象、β-溶血；SS平板和中國蘭：無色菌落變形桿菌屬細(xì)菌鑒定2.鑒定：G-桿菌無芽胞、氧化酶陰性（1）初步鑒定：用KIA和MIU。將在KIA上出現(xiàn)KA++，MIU上出現(xiàn)++/-+，進一步鑒定到屬和種（生化、血清學(xué)試驗）。KA++

KIA斜面底層產(chǎn)氣

H2SMIU++/-+

變形桿菌屬細(xì)菌鑒定（2）最終鑒定：全面生化反應(yīng)。2.鑒定：變形桿菌屬細(xì)菌鑒定變形桿菌與相似菌屬的鑒別試驗名稱變形桿菌屬普羅維登斯菌屬摩根菌屬遷徙生長+--H2S+--明膠液化+--枸櫞酸鹽V+-鳥氨酸脫羧V-+共性：不發(fā)酵乳糖、葡萄糖酸鹽-，苯丙氨酸脫氨酶+。變形桿菌屬細(xì)菌鑒定依據(jù)在血平板上為灰白色菌落，遷徙現(xiàn)象腸道選擇平板上為不發(fā)酵乳糖的無色菌落，產(chǎn)H2SKIA：多為KA＋＋MIU：＋＋/－＋I(xiàn)MViC：＋/－

＋－－苯丙氨酸脫氨酶＋脲酶（4~6h)＋變形桿菌屬細(xì)菌鑒定變形桿菌屬種間鑒別要點試驗名稱普通變形桿菌奇異變形桿菌產(chǎn)粘變形桿菌潘氏變形桿菌靛基質(zhì)+---鳥氨酸脫羧-+--麥芽糖+-++木糖++-+H2S++--/+對氯霉素敏感性SSSR肺炎克雷伯菌、變形桿菌的鑒定（一）細(xì)菌在選擇性培養(yǎng)基和肉湯中的生長現(xiàn)象菌種血皿中國藍(lán)EMB普皿肉湯肺炎克雷伯菌變形桿菌結(jié)果與討論（二）革蘭染色鏡檢結(jié)果菌種形態(tài)排列染色性肺炎克雷伯菌變形桿菌結(jié)果與討論（三）細(xì)菌生化鑒定結(jié)果記錄1菌名氧化酶觸酶硝還O/F苯KIAMIU斜面底面產(chǎn)氣H2SMIU肺克變形備注：A，產(chǎn)酸（黃）；K，產(chǎn)堿（紅）。結(jié)果與討論菌名葡萄糖乳糖甘露醇IMRVPC賴鳥氨對肺克變形（三）細(xì)菌生化鑒定結(jié)果記錄2結(jié)果與討論課堂討論1.請指出血皿上肺克的菌落形態(tài)特點。2.請指出血皿上變形的生長現(xiàn)象。3.什么是苯丙氨酸脫氨酶試驗，并指出兩株試驗菌的實驗結(jié)果。4.請指出KIA的主要成分有哪些？5.分別指出肺克和變形的KIA結(jié)果，并解釋原因。6.請指出我們試驗所用的變形桿菌是屬于哪一種？腸桿菌屬學(xué)習(xí)目標(biāo)１熟悉腸桿菌屬細(xì)菌的生物學(xué)性狀２熟悉腸桿菌屬細(xì)菌的致病性３掌握變形桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗掌握葡萄球菌屬種間鑒定與鑒別試驗4熟悉腸桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗熟悉腸桿菌屬種間鑒定與鑒別試驗?zāi)c桿菌屬1．生物學(xué)特性：

G-

粗桿菌，動力+，部分菌株有莢膜，無芽胞。腸桿菌屬在血平板上可形成灰白色大而粘的菌落，不溶血。在腸道的選擇性培養(yǎng)基上呈有色菌落。血平板上灰色菌落MAC平板上紅色菌落中國藍(lán)平板上藍(lán)色菌落1．生物學(xué)特性：

KIA：AA＋－MIU：＋－＋/－

（與肺克區(qū)別）

IMViC：－

－

＋

＋（與大腸區(qū)別），鳥氨酸＋（與肺克區(qū)別）

腸桿菌屬

2．臨床意義：為正常菌群，一般引起泌尿系感染、呼吸道感染、傷口感染、敗血癥和腦膜炎等。陰溝腸桿菌API10聯(lián)診斷試劑盒微生物檢驗

1.標(biāo)本采集根據(jù)疾病不同采集不同標(biāo)本，血液、尿液、痰、穿刺液等。檢驗程序尿、穿刺液、痰等血平板可疑菌落KIAMIU腸道選擇平板菌落涂片染色鑒定血液增菌糞便其他生化反應(yīng)細(xì)菌計數(shù)檢驗方法涂片染色鏡檢：待檢標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢，可見革蘭陰性桿菌。分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種血平板和腸道選擇平板，經(jīng)18～24小時培養(yǎng)，挑取發(fā)酵乳糖的有色菌落進一步鑒定。初步鑒定：根據(jù)菌落特征、KIA、MIU進行初步篩選。最終鑒定：通過系統(tǒng)生化反應(yīng)做種間鑒定。鑒定依據(jù)革蘭陰性桿菌在腸道選擇性培養(yǎng)基上呈有色菌落KIA（AA+-）、MIU(+--/+）、IMViC（--++）、鳥氨酸(+)耶爾森菌屬臨床微生物檢驗技術(shù)網(wǎng)絡(luò)資源共享課程醫(yī)學(xué)技術(shù)系學(xué)習(xí)目標(biāo)１熟悉耶爾森菌屬細(xì)菌的生物學(xué)性狀２熟悉耶爾森菌屬細(xì)菌的致病性３掌握變形桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗掌握葡萄球菌屬種間鑒定與鑒別試驗4熟悉耶爾森菌屬細(xì)菌的微生物檢驗熟悉耶爾森菌屬種間鑒定與鑒別試驗耶爾森菌屬

鼠疫耶爾森菌屬腸桿菌科耶爾森菌屬，俗稱鼠疫桿菌，是我國法定甲類傳染病鼠疫的病原體。歷史：三次世界性大流行目前：仍有散在及爆發(fā)（死亡率10~30%）監(jiān)控：是我國重點監(jiān)控的自然疫源性傳染病（一）生物學(xué)性狀形態(tài)染色：G—球桿菌，兩極濃染，有莢膜，無鞭毛，無芽胞，慢性病灶，陳舊培養(yǎng)物，高鹽培養(yǎng)基上呈多形性。抗原構(gòu)造：復(fù)雜F1抗原——莢膜抗原V/W抗原——毒力抗原外膜蛋白——突破防御、增強致病性鼠毒素（外毒素）——對鼠類有劇烈毒性內(nèi)毒素——發(fā)熱、休克、DIC等抵抗力：對理化因素抵抗力弱，但在自然環(huán)境中存活時間長鼠疫耶爾森菌（二）致病性與免疫性致病物質(zhì)F1、V/W、外膜抗原、鼠毒素、內(nèi)毒素等，實質(zhì)器官出血性炎癥、組織壞死及全身中毒癥狀。該菌毒力強，少量細(xì)菌即可致病所致疾病烈性傳染病——鼠疫（黑死病）流行環(huán)節(jié)傳播媒介:鼠蚤傳播途徑:叮咬傷口、呼吸道臨床類型腺鼠疫肺鼠疫敗血癥鼠疫鼠疫耶爾森菌（三）微生物學(xué)檢驗及防治專用實驗室檢測警惕生物武器檢測動物鼠疫動態(tài)滅鼠滅蚤接種疫苗抗菌素治療一旦疑為本菌，應(yīng)立即向本地區(qū)疾病控制中心等部門報告，并將菌種送檢驗中心或?qū)I(yè)實驗室作進一步鑒定。診斷確立后除對患者進行隔離治療外，對疫區(qū)及有關(guān)人員須采取有效的預(yù)防隔離措施，防止疫情擴散。鼠疫耶爾森菌（一）生物學(xué)特征：G-桿菌，無芽胞、無莢膜。

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌（一）生物學(xué)特征：1．嗜冷性4～40℃，動力、VP在20～28℃，++；37℃--。動力試驗25℃37℃VP在25℃+小腸結(jié)腸炎耶爾森菌2．MAC：不發(fā)酵乳糖，無色、半透明、扁平、較小的菌落。SS平板生長差。尿素48小時陽性3．KIA：KA--

MIU：25℃+-/++

賴氨酸-37℃--/++

鳥氨酸+小腸結(jié)腸炎耶爾森菌4．抗原構(gòu)造與分型：感染人有O3、O5、O8、O9歐洲、非洲、日本：O3、O9中國：O3美國：O8（二）臨床意義：可產(chǎn)生毒素，引起小腸結(jié)腸炎。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌鼠疫耶氏菌與小腸結(jié)腸炎耶氏菌鑒別甲基紅（+），甘露醇（+），苯丙氨酸（-），丙二酸鹽（-），H2S（-），37℃培養(yǎng)動力（-）。鼠疫耶氏菌液體培養(yǎng)基中鐘乳石樣。小腸結(jié)腸炎耶氏菌25℃動力（+），嗜冷性，4℃生長，25℃VP（+），37°C（-）。均不發(fā)酵乳糖。小腸結(jié)腸炎耶氏菌4～40℃均能生長，20～

28℃才能表現(xiàn)其特征。臨床微生物檢驗技術(shù)網(wǎng)絡(luò)資源共享課程其他腸桿菌科細(xì)菌微生物鑒定技術(shù)醫(yī)學(xué)技術(shù)系學(xué)習(xí)目標(biāo)１了解其他腸桿菌科細(xì)菌的生物學(xué)性狀２了解其他腸桿菌科細(xì)菌的致病性３掌握變形桿菌屬細(xì)菌的微生物檢驗掌握葡萄球菌屬種間鑒定與鑒別試驗4了解其他腸桿菌科細(xì)菌的微生物檢驗了解其他腸桿菌科種間鑒定與鑒別試驗

1．生物學(xué)特性：G-小桿菌，動力+，有些菌種有莢膜，無芽胞。部分菌株可產(chǎn)生色素（紅色）：靈紅色素為脂溶性，吡羧酸為水溶性。

沙雷菌屬該屬有10種，與臨床有關(guān)的是粘質(zhì)沙雷菌與液化沙雷菌。

1．生物學(xué)特性：KIA：K/AA＋/－

－

MIU：＋－－賴＋鳥＋沙雷菌屬粘質(zhì)沙雷菌液化沙雷菌阿拉伯糖－＋棉子糖－＋／－木糖－＋粘質(zhì)沙雷菌API10聯(lián)診斷試劑盒2．臨床意義：粘質(zhì)沙雷菌是致病菌，可引起泌尿系及呼吸道感染。液化沙雷菌是人的條件致病菌，主要引起呼吸道感染。沙雷菌屬1．生物學(xué)性狀：G-桿菌，動力+，無芽胞、無莢膜。枸櫞酸桿菌屬枸櫞酸桿菌鏡下為G-直桿菌1．生物學(xué)性狀：在血平板上為灰白色濕潤的不溶血的菌落。在腸道選擇性培養(yǎng)上為乳糖發(fā)酵的菌落，較混濁。弗勞地枸櫞酸桿菌在SS或HE平板上可形成中心為黑點的菌落。

枸櫞酸桿菌屬血平板上的菌落1．生物學(xué)性狀：氧化酶－，觸酶＋KIA：A/KA＋＋MIU：＋－－枸櫞酸桿菌屬弗勞地氏枸櫞酸桿菌API10聯(lián)診斷試劑盒

2．臨床意義：為條件致病菌，與腹瀉和某些腸道外感染有關(guān)。弗勞地枸櫞酸桿菌引起胃腸道感染，亦可致敗血癥及許多組織感染；異型枸櫞酸桿菌引起新生兒腦膜炎和敗血癥；無丙二酸鹽枸櫞酸桿菌可引起腹瀉。枸櫞酸桿菌屬普羅威登斯菌屬及摩根菌屬

這是一群同變形桿菌一樣，形態(tài)呈多形性、有鞭毛，不發(fā)酵乳糖，脲酶+、苯丙氨酸脫氨酶+的細(xì)菌（腸桿菌科唯一），屬腸道的正常菌群，在周圍環(huán)境中廣泛存在，并在一定條件下引起各種感染，是引起醫(yī)源性感染的重要條件致病菌。普羅威登斯菌屬包括產(chǎn)堿普羅威登斯菌、斯氏普羅威登斯菌和雷氏普羅威登斯菌，均為G-桿菌普羅威登斯菌屬普羅威登斯菌屬普羅威登斯菌屬API10聯(lián)診斷試劑盒普羅威登斯菌屬與變形桿菌屬一樣，有堿化尿液的作用，有可能促使尿結(jié)晶形成，與泌尿系結(jié)石有關(guān)。雷極普羅威登斯菌和斯圖普羅威登斯菌可引起尿道感染和其他腸道外感染（菌血癥等），并引起許多醫(yī)院感染暴發(fā)流行。普羅威登斯菌屬普羅威登斯菌屬3.檢驗方法涂片染色鏡檢：待檢標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢，可見革蘭陰性桿菌，菌體邊緣有明顯莢膜。分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種血平板和腸道選擇平板，經(jīng)18～24小時培養(yǎng)，挑取不發(fā)酵乳糖的無色菌落進一步鑒定。初步鑒定：根據(jù)菌落特征、KIA、MIU、苯丙氨酸脫氨酶進行初步篩選。最終鑒定：通過系統(tǒng)生化反應(yīng)做種間鑒定。摩根菌屬：僅有摩根菌，G-桿菌，鳥氨酸+摩根菌屬是醫(yī)源性感染的重要病原菌之一。它可致泌尿道感染，并與腹瀉有關(guān)。摩根菌屬摩根菌在血平板上的菌落摩根菌屬苯丙氨酸脫胺酶陽性的菌屬鑒別腸桿菌科概述1、形態(tài)與染色

G—

中小桿菌，無芽胞，多數(shù)有周鞭毛（志賀菌無鞭毛）；致病菌都有菌毛。腸桿菌科的共同特性※乳糖發(fā)酵試驗2、活潑的生化反應(yīng)※初步鑒別腸道致病菌和非致病菌腸道致病菌腸道非致病菌不發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖活躍，常用于鑒別腸道桿菌。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，氧化酶（-），觸酶（+），硝酸鹽還原（+）,O/F試驗為發(fā)酵型。3.培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可生長，菌落相似，形成灰白色中等大小,S型菌落，液體培養(yǎng)基中渾濁生長，常用腸道選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)腸桿菌科的共同特性選擇性平板的特點均含有乳糖和酸堿指示劑：細(xì)菌分解乳糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基pH降低，指示劑呈酸性變色；指示劑不同，菌落呈現(xiàn)不同的顏色。

分解乳糖的細(xì)菌呈有色菌落，不分解乳糖的細(xì)菌為無色菌落。含有不同的抑制劑：對G+菌和非致病菌有不同程度的抑制作用，因此可以選擇性的培養(yǎng)腸道致病菌。常用培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基：SS平板：含乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠、硫代硫酸鈉等Mac平板：含乳糖、中性紅指示劑、膽鹽等中國藍(lán)平板：含乳糖、中國藍(lán)和玫瑰紅酸指示劑EMB平板：含乳糖、伊紅和美藍(lán)指示劑共同特征培養(yǎng)特性腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基：

SS培養(yǎng)基：強選擇性

MAC（麥康凱）

EMB（伊紅美