DB33T 2183-2019 家蠶核型多角體病抗性鑒定方法　

DB33Regulationofidentificationforsilkwormnuclearpolyhedrosisresistance2019-01-15發(fā)布浙江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I1家蠶核型多角體病抗性鑒定方法凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和家蠶核型多角體病病毒bombyxmorinuclearpol為桿狀病毒科、真桿狀病毒亞科、核型多角體家蠶核型多角體病病毒多角體bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirusandinclusi家蠶核型多角體病silkwormnuclear2半數(shù)致死濃度medianlethalconcentratio在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，通過(guò)添食攻毒感染，使2齡家蠶半數(shù)死亡所需的病毒多角體濃度。按DB33/T2019中簡(jiǎn)化催青的要求催青，常規(guī)5家蠶核型病毒多角體試驗(yàn)用懸浮液的制備、計(jì)數(shù)及保存5.1懸浮液的制備5.1.1添食將純化的病毒多角體，用蒸餾水配成1×106個(gè)/毫升濃度的攻毒液。取3片大小約10cm×10cm清潔改用清潔桑葉喂飼。在24℃~25℃的溫度下，飼養(yǎng)7d～10d備用。5.1.2制備用剪刀從病蠶的腹足或尾角收集其體液，經(jīng)2層脫脂紗布過(guò)濾，然后將濾液用3000r/min離心10min，至沉淀呈較為均質(zhì)的乳白色，再用少量無(wú)菌生理鹽水充分懸浮，即成病毒多角體懸浮5.2病毒多角體的計(jì)數(shù)5.3病毒多角體懸浮液的保存35.3.2保存時(shí)間6半數(shù)致死濃度測(cè)定6.1攻毒用多角體懸浮液的配制方法制作稀釋病毒多角體懸浮液。病毒多角體懸浮液母液及梯度稀釋液的有效保存時(shí)間為≤1個(gè)月。6.2攻毒對(duì)象和設(shè)區(qū)6.2.1攻毒對(duì)象測(cè)試蠶品種、對(duì)照蠶品種的2齡起蠶。6.2.2攻毒設(shè)區(qū)6.3攻毒添食與飼養(yǎng)涂抹在方塊葉背面后喂食。待桑葉基本食凈(約12h)后，改飼清潔桑葉，在25℃~27℃的溫度下飼6.4病死蠶計(jì)數(shù)6.4.1校驗(yàn)對(duì)照區(qū)有非核型病毒多角體病因素引起的異常6.4.2病死蠶統(tǒng)計(jì)從2齡起蠶攻毒開(kāi)始到2眠眠起止，為病死蠶計(jì)數(shù)時(shí)間。有核型病毒多角體病典型病征的蠶，計(jì)為病死蠶；沒(méi)有典型病征的3齡起蠶，計(jì)為健康蠶。對(duì)不能確定的遲眠蠶，取其血用顯微鏡檢查，檢到有6.5半數(shù)致死濃度的計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC50)的計(jì)算，采用Reed-Mu4DU50-log——累計(jì)死亡率超過(guò)50%試驗(yàn)組的病毒多角體懸浮液濃度CKLC50CK1LC50CK2LC50CK3LC50CK4LC50100R...............(2)4TGI100R...............................