用組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行繁殖是一項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)可用少量的繁殖材料繁殖大量植株并可得到

1、植物組織培養(yǎng)

。用組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行繁殖是一項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)，可用少量的繁殖材料，繁殖大量植株，并可得到去病毒的壯苗，這在某些商品生產(chǎn)中已成為極有效的繁殖手段。組織培養(yǎng)早在20世紀(jì)初即已開(kāi)始，近年發(fā)展較快，并廣泛用與花卉繁殖，現(xiàn)在由瓊脂培養(yǎng)轉(zhuǎn)向液體培養(yǎng)，即用發(fā)酵罐深層培養(yǎng)，形成微繁殖工業(yè)。目前又在研究人造種子，把用微繁殖技術(shù)形成的不定胚和芽條用球形膠囊包裹起來(lái)，形成人造種子。這種人造種子能在適宜的條件下生長(zhǎng)發(fā)育成植物體。但這項(xiàng)技術(shù)還有很多問(wèn)題需要進(jìn)行研究。（1）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件1）培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基的成分主要包括無(wú)機(jī)鹽類（分大量元素和微量元素）、有機(jī)物質(zhì)（即維生素等）、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)以及碳源等四大類：①無(wú)機(jī)鹽類：植物所需的十大元素，除碳、氫、氧由水和空氣中供給外，其他氮、磷、鉀、硫、鈣、鎂、鐵等七種均需加到培養(yǎng)基中；微量元素有硼、錳、鋅、鉬、鈷、碘、銅等。②有機(jī)物質(zhì)：主要是維生素和氨基酸，如B1和B6以及煙酸等。③生長(zhǎng)調(diào)節(jié)質(zhì)：主要是細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素兩類。目前用得較多的細(xì)胞分裂素有：激動(dòng)素（KT）、6芐基嘌呤（BAP）、玉米素（ZT）及異戊烯基腺嘌呤（2ip）等。能促進(jìn)花芽分化；生長(zhǎng)素有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、奈乙酸（NAA）和2，4---D，能促進(jìn)生長(zhǎng)。④碳源：因組織培養(yǎng)時(shí)植物體處于他養(yǎng)情況下，故必須有能源供給，主要是蔗糖。2）培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基的種類很多，有MS、ER、B5、SH、HE等，其中MS應(yīng)用最廣泛，ER培養(yǎng)基與MS相似，B5培養(yǎng)基在愈傷組織和懸浮培養(yǎng)方面對(duì)有些植物適合；SH培養(yǎng)基與B5相似；HE培養(yǎng)基為歐洲許多實(shí)驗(yàn)室所用，但礦物鹽濃度稍低，應(yīng)用范圍不太廣。在花卉組織培養(yǎng)中用MS培養(yǎng)基最多。

3）培養(yǎng)條件

按培養(yǎng)對(duì)象的種類不同而有所不同，溫度條件一般在23—26度左右的恒溫條件下。光照條件對(duì)器官形成有作用，一般范圍是1000---3000勒克司，每日12~16小時(shí)，高于3000勒克司有強(qiáng)烈的抑制作用。培養(yǎng)室要求清潔衛(wèi)生，減少污染。（2）花卉組織培養(yǎng)的途徑

在花卉組織培養(yǎng)實(shí)踐中，用植物的組織或細(xì)胞培養(yǎng)成植株，也就是試管培養(yǎng)，可以通過(guò)三個(gè)途徑。1）通過(guò)器官發(fā)生通過(guò)由培養(yǎng)的組織，產(chǎn)生芽及根。器官發(fā)生由于培養(yǎng)材料的不同可分為兩方面：一是培養(yǎng)花卉植物的莖尖產(chǎn)生大量的芽，再將芽分離轉(zhuǎn)移培養(yǎng)成植株；二是培養(yǎng)花卉植物器官外植體產(chǎn)生不定芽，發(fā)育成植株。2）通過(guò)愈傷組織分化成株將花卉植物體的一小片組織培養(yǎng)成愈傷組織，再誘導(dǎo)分化成芽和根，成為完整植株。3）通過(guò)胚狀體發(fā)生由培養(yǎng)的植株產(chǎn)生愈傷組織，再通過(guò)懸浮培養(yǎng)，或直接產(chǎn)生大量的胚狀體，再發(fā)育成完整植株。（3）花卉組織培養(yǎng)的操作方法花卉組織培養(yǎng)的操作可分為培養(yǎng)基配制、消毒滅菌、接種、培養(yǎng)等幾方面。1）培養(yǎng)基配制選定培養(yǎng)基以后，需把大量元素、微量元素、有機(jī)物都配成母液，擴(kuò)大倍數(shù)為稀釋液，儲(chǔ)存?zhèn)溆?。使用時(shí)。根據(jù)所需配制的量，在稀釋液中加一些肌醇、水解酪蛋白、蔗糖等，再加鐵鹽（需用乙二胺四乙酸二鈉（Na2---EDTA）加硫酸亞鐵配制成鰲和鐵）成營(yíng)養(yǎng)液，然后吸取需用量，加入培養(yǎng)基中，再測(cè)其酸緘度（一般PH在5.5~6.5之間即可），最后加瓊脂沸騰后分裝入三角瓶或試管中，封口待用。2）消毒滅菌消毒滅菌非常重要，關(guān)系到組織培養(yǎng)的成敗。污染途徑是器皿、用具、材料的帶菌，以及接種室的空氣、墻壁、地板等的不清潔，故必須針對(duì)所提及的幾方面進(jìn)行嚴(yán)密的消毒滅菌。①培養(yǎng)基消毒：將配制分裝好培養(yǎng)基的三角瓶或其他器皿放入高壓滅菌鍋中，在15磅/英寸2的壓力下，經(jīng)20分鐘高壓滅菌即可。②器皿與用具的消毒：接種用具及玻璃器皿、洗滌材料用的無(wú)菌水，用牛皮紙包好后和培養(yǎng)基一起放在高壓滅菌鍋中消毒滅菌。③接種室消毒：接種室的地面及墻壁，在接種前后均需要用1比50的新潔爾敏性消毒，每次接種前還要用紫外線燈照射消毒30~60分鐘，并用70%的酒精，在室內(nèi)噴霧，以凈化空氣，最后是超凈臺(tái)臺(tái)面消毒，可用新潔爾敏檫抹及70%酒精消毒。④材料處理及消毒：花卉組織培養(yǎng)取嫩莖、花托、葉柄、葉片均可，取得材料后，需先清理，去掉多余部分，然后沖洗、洗滌劑洗滌、漂清后放入接種室或超凈臺(tái)上，用70%的酒精浸泡半分鐘，進(jìn)行表面消毒再在10%的漂粉溶液中消毒10分鐘左右，取出后用無(wú)菌水沖洗4~5次，即可接種。一般材料的選擇以幼嫩部分為好。草花用嫩莖、花托為好；球根花卉莖頂、鱗莖盤、鱗葉等為好。3）接種接種用的鉗子、解剖刀、接種針等均需在火焰上消毒后用，用后再消毒。將消毒好的材料置于培養(yǎng)皿中，用解剖刀切去其邊緣，再切成小塊接種在培養(yǎng)基上，使組織塊與培養(yǎng)基密合，不得將材料陷于培養(yǎng)基中，接好后隨即將瓶口封好待培養(yǎng)。4）培養(yǎng)接種完畢后即可置于培養(yǎng)室，在恒溫、加光條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時(shí)間后，根據(jù)情況將材料從誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基（也有只用一種培養(yǎng)基就可直接誘導(dǎo)分化成綠苗的），最后轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上。

5）試管苗移栽

試管苗發(fā)根后，必須隨即轉(zhuǎn)移到栽培基質(zhì)中去，這種基質(zhì)可以用培養(yǎng)土、蛭石、珍珠巖等配成。將試管苗從瓶中取