動(dòng)物血吸蟲病查治技術(shù)規(guī)范

動(dòng)物血吸蟲病查治技術(shù)規(guī)范1范圍本標(biāo)準(zhǔn)包括了動(dòng)物血吸蟲病的塑料頂管棉析法、間接血凝試驗(yàn)、金標(biāo)免疫滲濾法診斷技術(shù)及治療技術(shù)等。適用于動(dòng)物血吸蟲病的診斷、監(jiān)測(cè)、檢疫、流行病學(xué)調(diào)查和治療。本標(biāo)準(zhǔn)適用于血吸蟲病疫區(qū)內(nèi)一切從事家畜飼養(yǎng)、經(jīng)營的單位和個(gè)人。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究可以使用這些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。WS261-2006血吸蟲病診斷規(guī)范《家畜日本血吸蟲病診斷技術(shù)》《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》《血吸蟲病防治條例》3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)3.1血吸蟲病schistosomiasisjaponica由血吸蟲寄生于人體內(nèi)所引起的疾病。在我國特指日本血吸蟲病，是由日本血吸蟲（Schistosomajaponcum）寄生于人和哺乳動(dòng)物所引起的疾病。3.2毛蚴長(zhǎng)橢圓形，周身披纖毛，固定后平均大小為99μm×35μm。4塑料頂管棉析法4.1材料4.1.1孵化用水：見附錄A（規(guī)范性附錄）4.1.2器材：竹筷、塑料孵化杯、試管、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、水溫計(jì)、盆、水缸、水桶、剪刀、鬧鐘、天平、脫脂棉。4.1.3送糞卡：包括村名、組名、飼養(yǎng)員或畜主姓名、畜別、畜名或畜號(hào)、性別、年齡、有無懷孕及采糞日期等。4.1.4孵育室：室溫低于20℃時(shí)，需在有溫箱或有取暖設(shè)備的房間，保持環(huán)境溫度在20～254.2操作方法4.2.1采糞和送檢：采糞季節(jié)宜于春秋兩季，其次是夏季，不宜于冬季。采糞的時(shí)間最好于清晨從家畜直腸中采取，或新排出的糞便。采糞量：牛、馬屬200g，豬100g，羊和犬糞（農(nóng)家）50g，每份糞樣需附上填好的送糞卡，于采糞當(dāng)天送到實(shí)驗(yàn)室。4.2.2洗糞和孵化：將每頭家畜的糞便分三份，每份糞量牛、馬50g，豬20g，羊、犬10g。置糞便于塑料杯中加適量水充分?jǐn)噭蚝螅诒屑訚M水靜止20min，棄去杯中三分之二的上層水，將杯中水加滿（水溫18℃～24℃），蓋上塑料蓋，將盛滿水的試管口塞一塊2cm～4.2.3孵育：在室溫22℃～264.3判定標(biāo)準(zhǔn)：毛蚴多在試管內(nèi)呈直線運(yùn)動(dòng)。發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。血吸蟲毛蚴肉眼觀察為針尖大小、灰白色、梭形、折光強(qiáng)。當(dāng)用肉眼觀察難與水中的其他小蟲相區(qū)別時(shí)，可用滴管將毛蚴吸出，置顯微鏡下觀察，可見毛蚴前部寬，前段中間有個(gè)頂突，兩側(cè)對(duì)稱，后漸窄。4.4判定結(jié)果：在一個(gè)樣品中有1～5個(gè)毛蚴判為“+”，6～10個(gè)毛蚴判為“++”，11～20個(gè)毛蚴判為“+++”，21個(gè)毛蚴以上判為“++++”，以統(tǒng)計(jì)血吸蟲病感染的強(qiáng)度?！?”及以上的判為血吸蟲病病原學(xué)監(jiān)測(cè)陽性5間接血凝試驗(yàn)5.1材料5.1.1器材：U型血凝板、25μl定量移液器。5.1.2生理鹽水、蒸餾水。5.1.3診斷液和陰、陽性血清：按說明書處理和保藏。5.2操作方法5.2.1用滴管滴100μl生理鹽水于血凝板左邊第1孔內(nèi)，用同一滴管加入被檢血清25μl，使血清成5倍稀釋。5.2.2用帶12號(hào)針頭滴管或移液管在左邊第2、3孔中各加生理鹽水25μl。5.2.3用移液器將第1孔血清混勻，反復(fù)吸吹三次，然后吸25μl已混勻液加入右邊鄰孔中，此孔血清成1:10稀釋。5.2.4混勻第2孔血清，吸取25μl加入第3孔中，此時(shí)該孔血清成1:20稀釋。5.2.5混勻第3孔血清，吸取25μl丟棄。5.2.6每份被檢血清和陽、陰性血清按同樣方法用3個(gè)孔，也可不用陰性血清而設(shè)生理鹽水對(duì)照孔，此時(shí)另取2個(gè)孔各加25μl生理鹽水作空白對(duì)照。5.2.7用移液器加入1:10、1:20血清稀釋孔及空白對(duì)照孔各25μl診斷液，使診斷液和血清混勻，置20℃～375.3判定標(biāo)準(zhǔn)5.3.1紅血球全部下沉到孔底中央，形成緊密紅色圓點(diǎn)，周緣整齊為陰性（-）。5.3.2紅血球少量沉于孔底中央，形成一較陰性小的紅色圓點(diǎn)，周圍有少量凝集紅血球?yàn)槿蹶栃裕?）。5.3.3紅血球約半數(shù)沉于孔底中央，形成一更小紅色圓點(diǎn)，周圍有一層淡紅色凝集紅血球?yàn)殛栃裕?+）。5.3.4紅血球均勻地分散于孔底，形成一淡紅色薄層為強(qiáng)陽性（+++）。5.4結(jié)果判定以血清10倍和20倍稀釋孔出現(xiàn)“+、++、+++”的凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判為陽性。如陰性或生理鹽水對(duì)照孔2h后紅細(xì)胞沉淀圖像不規(guī)范，說明生理鹽水質(zhì)量不合規(guī)范或血凝板孔未洗凈，需檢查原因，重新操作。6金標(biāo)免疫滲濾法6.1材料6.1.1可調(diào)微量移液器(20μl～500μl)與配套滴頭，5ml可調(diào)移液瓶或容量分注器(0.2ul～1ml)或連續(xù)注射器，玻璃毛細(xì)管（直徑1mm），特制塑料反應(yīng)板和NC膜;塑料離心管（1.5ml）若干只或玻璃試管(5ml～10ml)若干支；帳頁紙打孔器(直徑0.55cm)；0.85%的生理鹽水。6.1.2待檢血紙或者血清。6.2操作方法6.2.1待檢血樣處理取潔凈塑料離心管或玻璃試管若干只（支），編上相應(yīng)的被檢血樣號(hào)。6.2.2若待檢血樣是血紙，用打孔器裁取血紙圓片1片（面積為0.24cm2），放入相應(yīng)號(hào)的塑料離心管或玻璃試管中，將0.85%的生理鹽水0.5ml加到放有血紙的塑料離心管或玻璃試管中，室溫浸泡30min，每隔10min搖動(dòng)1次，即成血紙浸出液；若待檢血樣是血清，吸取0.85%的氯化鈉鹽水0.79ml放入試管中，再加入0.01ml待檢血清混合均勻，即成80倍稀釋的血清。取反應(yīng)板編上與待檢血樣相同的號(hào)碼。6.2.3用玻璃毛細(xì)管吸取血紙浸出液或80倍稀釋的血清，從反應(yīng)板左邊第1孔（1、2號(hào)）開始點(diǎn)樣，輕貼NC膜0.5s，一次可連續(xù)點(diǎn)樣3塊～5塊反應(yīng)板。6.2.4先往點(diǎn)樣最早的反應(yīng)板第1孔加甲液50ul，間隔7s～5s再加第2孔，依次類推。一般血樣點(diǎn)后4min-5min加甲液。6.2.5待甲液滲入后，每孔加乙液50ul。6.2.6待乙液滲入后，每孔加蒸餾水或自來水50ul終止反應(yīng)。6.3判定標(biāo)準(zhǔn)紅色斑點(diǎn)判為陽性（＋），粉紅色斑點(diǎn)判為可疑（±），黃色或無色斑點(diǎn)判為陰性（－）。6.4判定結(jié)果陽性（＋）判為血清學(xué)檢測(cè)陽性。7治療7.1治療對(duì)象的確定凡用血清學(xué)或病原學(xué)方法查出的陽性畜，經(jīng)健康檢查除列為緩治或不治的病畜外，均應(yīng)進(jìn)行治療。7.2緩治或不治對(duì)象7.2.1懷孕6個(gè)月以上和哺乳期母畜以及3月齡以內(nèi)的動(dòng)物可緩治。7.2.2有急性傳染病、心血管疾病或其他嚴(yán)重疾病的動(dòng)物緩治或不治或建議淘汰。7.2.3年老體弱喪失勞力或生產(chǎn)能力的病畜建議淘汰。7.3稱重或估重在有條件的情況下，盡可能稱重，以便準(zhǔn)確計(jì)算用藥量，無稱重條件時(shí)則可采用測(cè)量估重，其估重公式，見附件B（規(guī)范性附錄）。7.4病畜治療記錄最好以縣（市）為單位統(tǒng)一印制病畜治療記錄表。對(duì)已確定的治療對(duì)象，要認(rèn)真填寫治療登記表。在治療過程中要認(rèn)真作好記錄，治療結(jié)束后，要整理成冊(cè)，歸檔備查。7.5治療的藥物和方法7.5.1藥物：當(dāng)前用于治療血吸蟲病病畜的首選藥物是吡喹酮，其粉劑、片劑或其他劑型一次口服治療各種家畜均可達(dá)到99.3%～100%的殺蟲效果。7.5.2劑量：因病畜種類不同和藥物劑量不同其用藥量也不盡相同。黃牛（奶牛）30mg/kg（限重300kg），水牛25mg/kg（限重400kg），羊20mg/kg，豬25mg/kg，馬屬動(dòng)物參照水牛劑量。7.6藥物反應(yīng)及處理7.6.1吡喹酮一次口服療法治療家畜血吸蟲病，一般無副反應(yīng)或輕微反應(yīng)。副反應(yīng)主要表現(xiàn)為反芻減少，食欲減退，瘤胃臌氣，流涎，拉稀，心跳加快，精神沉郁，嚴(yán)重時(shí)可引起流產(chǎn)，也見有出現(xiàn)牛死亡的報(bào)告。7.6.2反應(yīng)處理：一般輕微反應(yīng)不需特殊處理，少數(shù)病例特別是老弱病畜或奶牛可能出現(xiàn)奶產(chǎn)量下降等反應(yīng)，應(yīng)加強(qiáng)觀察，采用對(duì)癥療法，即可康復(fù)。附錄A（規(guī)范性附錄）孵化用水pH值6.8～7.2，無水蟲和化學(xué)物質(zhì)污染（包括氯氣）的澄清水。水的處理：有氯氣的自來水應(yīng)在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水蟲的水加溫至60℃，冷卻后再用?；蛟?0000ml水中加含30%有效氯的漂白粉0.35g，攪勻，放置20h，待氯氣逸盡后再用；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸鈉0.2g～0.4g脫氯，0.5h后再用。對(duì)混濁的水，每50000ml水中加明礬3g～5g附錄B（規(guī)范性附錄）估重公式在有條件的情況下，盡可能稱重，以便準(zhǔn)確計(jì)算用藥量，無稱重條件時(shí)則可采用測(cè)量估重，計(jì)算公式如下：黃牛體重（千克）=（胸圍cm）2×體斜長(zhǎng)cm/10800水牛體重（