中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討課件

中藥藥效毒理研究

技術(shù)規(guī)范若干問題的探討北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥藥理系孫建寧教授中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

中藥藥效評價的現(xiàn)狀與探索中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

中藥新藥的基本要求是安全、有效、可控和穩(wěn)定。

侯選樣品-------藥效學(xué)---------侯選藥物毒性研究中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討藥效學(xué)研究的基本目的

（一）通過藥效學(xué)研究確定有效性

是否有效、作用的強(qiáng)弱、優(yōu)缺點(diǎn)和特色，確定有無開發(fā)前景。

重視前期藥效的篩選，力求得到較準(zhǔn)確的藥效評價。設(shè)法找出主要藥效學(xué)的特點(diǎn)、有效作用劑量范圍（量效關(guān)系）、有效作用時間長短（時效關(guān)系）。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（二）提高臨床療效應(yīng)充分運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)特別是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的理論、方法和手段，制定科學(xué)、嚴(yán)密、具有中醫(yī)藥特點(diǎn)的試驗(yàn)計劃，建立與臨床相符的“病”

“癥”或“證”相似的動物模型與指標(biāo)，對新藥的有效性作出科學(xué)的評價。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討藥效研究參考資料:1、中藥新藥研究指南（藥學(xué) 藥理學(xué) 毒理學(xué)）中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局，1994：66-672、中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法王北嬰、李儀奎主編上海科學(xué)技術(shù)出版社2001.123、中藥復(fù)方研究思路與方法（2004年出版）4、中藥藥理研究方法學(xué)陳奇主編人民衛(wèi)生出版社（1993年版、新版待出）5、中藥藥理方法學(xué)李儀奎主編上海科學(xué)技術(shù)出版社19916、國內(nèi)外研究論文中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討二.藥效學(xué)研究的基本要求

試驗(yàn)負(fù)責(zé)人

受試藥物

研究單位

實(shí)驗(yàn)動物

試驗(yàn)記錄

統(tǒng)計處理

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討三、藥效學(xué)研究的方法及注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計符合中藥特點(diǎn)；符合國家新藥研究申報的有關(guān)規(guī)定；隨機(jī)、對照、重復(fù)重視中藥復(fù)方配伍規(guī)律性的研究:(1)單味研究法(2)藥對研究法(3)藥物組間關(guān)系法(4)撤藥分析法中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討(5)聚類分析法

(6)正交設(shè)計法

(7)正交t值法

(8)均勻設(shè)計法

(9)量效關(guān)系法中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討撤藥分析法:

從復(fù)方中撤出一味或一組藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)黃芩湯:黃芩、芍藥、甘草、大棗結(jié)果：減黃芩顯著影響藥效，分別減芍藥、甘草、大棗變化不大。說明君藥在全方中起主導(dǎo)地位。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討均勻設(shè)計法：按均勻設(shè)計表安排，實(shí)驗(yàn)次數(shù)與各因素所取水平數(shù)相等。如治療感染復(fù)方（五種中藥X1、X2、X3、X4、X5）。根據(jù)因素與水平，選用U11表設(shè)計，結(jié)果算得回歸方程，有顯著性意義，從標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)系數(shù)可看出藥物（抗炎）作用大小，進(jìn)行優(yōu)選。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討量效關(guān)系法：四君子湯：黨參、白術(shù)、茯苓、甘草

1：1：1：0.5

巨噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)，調(diào)整甘草到1/3，功能減弱。當(dāng)歸補(bǔ)血湯:黃芪、當(dāng)歸

5：1

免疫增強(qiáng)作用，調(diào)整黃芪劑量（1/2、2、4倍）均作用不明顯。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討2、動物選擇

種類：實(shí)驗(yàn)常用小鼠和大鼠、豚鼠、家兔、狗品系

動物等級：二級動物即清潔動物（CL）性別：一般試驗(yàn)選用雌雄各半動物。

數(shù)量：一般小鼠不得少于10只，大鼠為8只，貓、狗為4只以上

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討3、方法的選擇（一）根據(jù)主治，參考功能，選擇試驗(yàn)方法針對性強(qiáng)、重點(diǎn)突出、主次分明。如缺血性中風(fēng):

1．增加缺血區(qū)腦血流量

2．神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)治療

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討中藥治療缺血性中風(fēng)主要藥效學(xué)研究方案（一）對腦缺血試驗(yàn)

選用大鼠大腦中動脈血栓模型(middlecerebralarterythrombosis,MCAT)和雙側(cè)頸總動脈阻斷致不完全性腦缺，觀察連續(xù)給藥2-3天對局部腦缺血和不完全性全腦缺血性損傷的保護(hù)作用。

(1)大鼠神經(jīng)癥狀檢測：根據(jù)改進(jìn)的Bedorson等人的分級打分法記分。

(2)對MCAT大鼠腦水腫的影響：分別稱量腦缺血側(cè)和非缺血側(cè)腦組織濕重和干重，以腦水含量百分比為指標(biāo)。

(3)藥物對MCAT大鼠腦梗塞范圍的影響：采用TTC染色法，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比為指標(biāo)。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討(4)生化指標(biāo):包括能量代謝和毒性產(chǎn)物，如三磷酸腺苷（ATPase）、磷酸肌酸（Per）、乳酸（LA）、乳酸脫氫酶（LDH）、自由脂肪酸（FFA）、脂質(zhì)過氧化物（LPO）、興奮性氨基酸（EAA）及基因表達(dá)等。

(5)藥物對模型大鼠腦組織病理改變的影響：采用HE染色和尼氏體染色法，以病理切片尼氏體數(shù)量和神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)為指標(biāo)。（二）血流動力學(xué)試驗(yàn)采用麻醉犬進(jìn)行試驗(yàn)，用電磁流量計測頸內(nèi)動脈血流量，腦血管阻力、血壓、心電圖和心率，觀察受試藥物對腦血管及腦血流量的影響。(三)毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)：試驗(yàn)用大鼠，采用比色法觀察藥物對伊文思藍(lán)等染料通透性的影響。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（四）抗血栓形成試驗(yàn)和溶栓試驗(yàn)（1）大鼠動-靜脈旁路血栓形成試驗(yàn)：以血栓濕重和干重為指標(biāo)。（2）溶栓試驗(yàn)：體外試驗(yàn)（血清藥理）新鮮血塊溶解試驗(yàn)：指標(biāo)為給藥前、后血塊重量并計算血塊溶解百分率。（五）血小板聚集試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)用大鼠或家兔，觀察受試藥物對ADP、膠原所致血小板聚集的抑制作用。（六）藥物對血液凝固性的影響：凝血時間、凝血酶時間（TT）、凝血酶原時間（PT）和部分凝血活酶時間（APTT）。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（二）采用能夠反映中藥特點(diǎn)的試驗(yàn)方法及動物模型中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討抗病毒感染中藥復(fù)方研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計急性感染期用藥1、對病原體的抑制作用2、對癥治療退熱作用抗?jié)B出抗炎作用抗肺纖維化作用抗多臟衰作用中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（1）感病毒所致小鼠肺炎的保護(hù)作用；選擇流感病毒肺炎模型，以肺指數(shù)、死亡率、血清NO含量為觀察指標(biāo)（2）抗高熱作用*對毒素所致家兔發(fā)熱模型的退熱作用*酵母所致大鼠發(fā)熱模型的退熱作用中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（3）抗?jié)B出、抗炎：選擇油酸致呼吸窘迫癥模型油觀察所選藥物對呼吸功能的影響。（4）對吸入性肺炎的保護(hù)作用：選擇內(nèi)毒素吸入性肺炎損傷模型以BALF中彈性蛋白酶、蛋白含量為觀察指標(biāo)（5）抗炎作用：（急性炎癥）對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（常規(guī)藥理試驗(yàn)）對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響（常規(guī)藥理試驗(yàn)）（6）對內(nèi)毒素所致大鼠多臟器衰竭的保護(hù)作用：選擇內(nèi)毒素或角叉菜膠多臟器損傷模型觀察所選藥物對重要臟器的保護(hù)作用。評價指標(biāo)：生化指標(biāo)（ALT、AST、GREA、BUN），臟器指數(shù)（心、肝、脾、肺、腎），血象測定（WBC及分類、RBC、PLT、凝血時間）中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討恢復(fù)期用藥1、對過量甲狀腺激素所致陰虛模型的改善作用2、對過量皮質(zhì)激素所致陰虛模型的改善作用3、對過量皮質(zhì)激素所致消化道功能障礙的改善作用4、強(qiáng)壯作用：以耐缺氧時間、小鼠游泳時間為觀察指標(biāo)5、對免疫功能的影響中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（三）主要藥效為主，配合輔助試驗(yàn)

治療神經(jīng)根型頸椎病

主要藥效：1、對神經(jīng)根無菌性炎癥模型的影響（1）一般行為學(xué)（步態(tài)、患肢運(yùn)動等）、肌張力、感覺（觸覺、痛覺）；（2）神經(jīng)電生理檢測：測定神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)速度，觀察藥物的改善作用；（3）神經(jīng)纖維軸索計數(shù)和再生率：觀察藥物對損傷神經(jīng)的再生作用；（4）對致炎物重量的影響：觀察藥物對模型動物致炎物重量的抑制作用；中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（2）對模型鼠腦組織內(nèi)cAMP與cGMP的影響；（3）病理組織學(xué)檢查：異物巨細(xì)胞反應(yīng)、肉芽組織、炎性細(xì)胞等。

2、抗炎作用

3、鎮(zhèn)痛作用中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討對血液流變學(xué)的影響采用血瘀大鼠模型，測定全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性，觀察藥物對血液流變學(xué)的作用，初步分析該方治療神經(jīng)根性頸椎病的作用環(huán)節(jié)。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（四）整體和離體方法選擇

中藥由于成分復(fù)雜，特別是復(fù)方粗制劑，為多種化學(xué)成分(或有效部位)的混合體，除有效成分外，尚有一些無關(guān)成分及干擾成分。因此，藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)以體內(nèi)試驗(yàn)為主，體外試驗(yàn)為輔；以消化道給藥為主，其他給藥途徑為輔。若為中藥有效成分(或部位)制劑較純者，或臨床為注射給藥者，可用體外試驗(yàn)或注射給藥進(jìn)行主要藥效學(xué)試驗(yàn)。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

4、指標(biāo)的選擇（一）特異性強(qiáng)

（二）敏感性高

（三）重現(xiàn)性好

（四）客觀性

（五）定量指標(biāo)

（六）多指標(biāo)綜合運(yùn)用：生理、生化、形態(tài)等各類指標(biāo)合理搭配，綜合運(yùn)用

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討5、試驗(yàn)組給藥劑量（一）根據(jù)半數(shù)致死量(LD50)計算凡是能夠測出LD50者，可用其1/10、1/20、1/30、1/40等相近劑量，作為藥效學(xué)試驗(yàn)的高中低劑量組。（二）根據(jù)臨床用量計算其粗略的等效倍數(shù)為1（人）、3（狗、猴）、5（貓、兔）、7（大鼠、豚鼠）、10~11（小鼠）（三）根據(jù)文獻(xiàn)估計劑量

（四）根據(jù)體表面積估計劑量

根據(jù)體表面積折算法換算的同等體表面積（m2、cm2）單位時的劑量

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討6、給藥方式7、對照藥的選擇（一）陽性對照藥

1.可比性：其功用、主治、劑型、給藥途徑應(yīng)與新藥相似

2.合法性：陽性藥應(yīng)是國家《中國藥典》或部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)生產(chǎn)的合法藥物

3.擇優(yōu)選用：學(xué)術(shù)界或社會公認(rèn)有效的、有代表性的“好”藥

（二）原劑型對照改劑型新藥的陽性對照藥

（三）空白對照品中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討四、隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展涌現(xiàn)出中藥復(fù)方藥效研究的創(chuàng)新思路和方法：（一）建立中醫(yī)藥信息系統(tǒng)，將大大提高中藥復(fù)方藥效的研究效率

中醫(yī)藥信息系統(tǒng)：方劑庫、藥用植物庫、中藥有效成分三維結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫及靶酶結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（二）引入基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)及基因芯片技術(shù)

中藥復(fù)方突出的特點(diǎn)是活性多組分、作用多靶點(diǎn)、多途徑；突出多層次、多臟器、多水平調(diào)理過程。（復(fù)制證的動物模型）基因芯片對中藥復(fù)方研究和中藥藥物篩選,指通過用藥前后表達(dá)譜的變化,找出靶基因及受靶基因調(diào)控的基因。培養(yǎng)的人細(xì)胞(細(xì)胞水平)和動物模型(整體水平)兩種方法相互參照和比較。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

中藥的毒性及安全性研究中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討一、藥物毒理學(xué)的研究目的

1、量化人體安全用藥的劑量和時程：包括中毒劑量及其與有效劑量的比值、安全劑量范圍、服藥周期

2、毒性反應(yīng)的表現(xiàn)和特點(diǎn)（急性毒性反應(yīng)、慢性毒性反應(yīng)、或蓄積性，毒性反應(yīng)可逆與否等）、毒性的靶器官及作用機(jī)理

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討3、毒性成分的體內(nèi)過程或毒代動力學(xué)研究

4、毒理學(xué)方法學(xué)的研究

5、毒性反應(yīng)的預(yù)防、治療

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討6、如何將動物毒理學(xué)數(shù)據(jù)外延或推論到人體：

嚙齒和非嚙齒兩種動物進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)，它們所表現(xiàn)出來的毒性反應(yīng)和人體的毒性反應(yīng)之間的一致性有約70%的概率；而單用嚙齒動物所作的毒性試，其和人的一致性概率僅為43%；單用非嚙齒動物的一致性概率為63%。（1）一致性：94%的人體毒性反應(yīng)可在給藥和觀察周期為一個月的動物試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。多數(shù)人體毒性反應(yīng)可在單次給藥的毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。25%的人體毒性反應(yīng)可在安全性藥理學(xué)（一般藥理學(xué)）實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。（2）不一致性：貫葉連翹對不同動物生殖系統(tǒng)的影響不一致。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討二、中藥毒理學(xué)研究內(nèi)容

1、急性（單次給藥）毒性試驗(yàn)2、長期（慢性或重復(fù)給藥）毒性試驗(yàn)3、一般藥理學(xué)（安全性藥理學(xué)）試驗(yàn)4、“三致”試驗(yàn)（遺傳毒性、生殖毒性、致癌性）5、免疫學(xué)毒性試驗(yàn)6、藥物依賴性試驗(yàn)7、局部（皮膚/黏膜）給藥的毒性試驗(yàn)8、注射劑的制劑安全性試驗(yàn)（局部刺激、過敏試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)）9、毒代動力學(xué)研究10、其它（光敏試驗(yàn)等）

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討三、毒性安全性評價中的注意事項(xiàng)

一般藥理學(xué)試驗(yàn)研究（安全性藥理）（Safetypharmacology）中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討研究目的

通過一般藥理學(xué)研究，可以確定受試物非期望出現(xiàn)藥物效應(yīng)的情況，它可能關(guān)系到人的安全性；評價受試物在毒理學(xué)和/或臨床研究中觀察到的藥物不良反應(yīng)和/或病理生理作用；研究所觀察到的和/或推測的藥物不良反應(yīng)機(jī)制。通過一般藥理學(xué)研究，它可為長期毒性試驗(yàn)設(shè)計提供參考，為臨床研究和安全用藥提供信息，為開發(fā)新的適應(yīng)癥提供信息。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討一、受試物：建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

二、劑量設(shè)置

中、高劑量應(yīng)高于藥效學(xué)的有效劑量，并與低劑量呈倍數(shù)關(guān)系，應(yīng)設(shè)至少4個劑量組三、試驗(yàn)指標(biāo)的選擇（一）心血管系統(tǒng)測定并記錄給藥前后血壓（包括收縮壓、舒張壓和平均壓）、心電圖（包括QT間期、PR間期、QRS波、ST段和QRS波等）和心率等的變化。治療劑量出現(xiàn)明顯血壓或心電圖改變時，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體的進(jìn)一步研究。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（二）呼吸系統(tǒng)測定并記錄給藥前后的呼吸頻率、節(jié)律和呼吸深度。治療劑量出現(xiàn)明顯的呼吸興奮或抑制時，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體進(jìn)一步研究。（三）精神神經(jīng)系統(tǒng)動物自主活動、平衡能力、與戊巴比妥鈉的協(xié)同。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討四、結(jié)果及分析應(yīng)根據(jù)詳細(xì)的試驗(yàn)記錄，對結(jié)果進(jìn)行定量和定性統(tǒng)計分析，說明具體的統(tǒng)計方法和選擇理由，同時應(yīng)注意對個體試驗(yàn)結(jié)果的評價。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果，分析受試物的一般藥理作用，結(jié)合非臨床藥效學(xué)、毒理學(xué)及臨床試驗(yàn)結(jié)果，綜合分析這些藥理作用所提示的臨床意義。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討追加的安全藥理學(xué)研究內(nèi)容中樞神經(jīng)系統(tǒng)：觀察藥物對行為藥理、學(xué)習(xí)記憶、神經(jīng)生化、視覺、聽覺和/或電生理等的影響心血管系統(tǒng)：觀察藥物對心輸出量、心肌收縮作用、血管阻力等心血管功能的影響，并探討其作用機(jī)制。呼吸系統(tǒng)：觀察藥物對氣道阻力、肺動脈壓力、血?dú)夥治觥⒀簆H值等的影響。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討補(bǔ)充的安全藥理學(xué)研究泌尿系統(tǒng)：觀察藥物對腎功能的影響，如對尿量、比重、滲透壓、pH、電解質(zhì)平衡、蛋白質(zhì)，細(xì)胞和血生化（如尿素氮、肌酐、蛋白質(zhì)）等指標(biāo)的檢測。自主神經(jīng)系統(tǒng)：觀察藥物對自主神經(jīng)系統(tǒng)的影響，如與自主神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)受體的結(jié)合，體內(nèi)或體外對激動劑或拮抗劑的功能反應(yīng)，對自主神經(jīng)的直接刺激作用和對心血管反應(yīng)、壓力反射和心率的影響。胃腸系統(tǒng)：觀察藥物對胃腸系統(tǒng)的影響，如胃液分泌量和pH、胃腸損傷、膽汁分泌、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)時間、體外回腸收縮的測定。其它器官系統(tǒng)：當(dāng)出于對安全性的關(guān)注時，在其它有關(guān)研究中尚未研究藥物對下列器官系統(tǒng)的影響，如潛在的依賴性、骨骼肌、免疫和內(nèi)分泌功能等的影響，則應(yīng)考慮藥物對這方面的影響。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討三、其它相關(guān)問題

（1）給藥途徑原則上應(yīng)與臨床擬用途徑一致

（2）監(jiān)測的儀器設(shè)備（3）麻醉狀態(tài)（4）監(jiān)測的時間（5）數(shù)據(jù)統(tǒng)計中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

急性毒性試驗(yàn)（Acutetoxicitytesting）

是指在一日內(nèi)一次或多次應(yīng)用受試藥物給予動物后，短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討一、受試物：建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（一）動物

一般應(yīng)選擇與受試藥物的藥效學(xué)、藥代動力學(xué)、長期毒性試驗(yàn)相關(guān)的動物；小鼠、大鼠，要求雌雄各半

（二）給藥途徑、溶媒、體積

（三）劑量和試驗(yàn)周期

（四）觀察指標(biāo)及記錄

（五）試驗(yàn)方法

半數(shù)致死量（LD50）最大耐受量（maximumtolerateddose，MTD）試驗(yàn)

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

長期毒性試驗(yàn)研究（Chronictoxicitytesting)

試驗(yàn)設(shè)計至關(guān)重要。試驗(yàn)設(shè)計應(yīng)作到科學(xué)、周到、合理。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討一、試驗(yàn)動物

選用動物的生長敏感期階段進(jìn)行試驗(yàn)。即大鼠5-8周齡、體重80-100g左右，Beagle犬4-12月齡

二、劑量設(shè)置

高劑量應(yīng)使動物出現(xiàn)明顯毒性或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，或個別動物出現(xiàn)死亡；中劑量應(yīng)使動物出現(xiàn)輕微的或中等程度的毒性反應(yīng)。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討應(yīng)注意的問題：（一）劑量設(shè)置較低，與藥效學(xué)劑量間無安全范圍（二）與藥效學(xué)劑量的表示方法不一致

（1）參考急性毒性試驗(yàn)的LD50值：大鼠大、中、小三劑量一般為LD50值的1/10、1/50、1/100

（2）參考最大給藥量

（3）參考擬用臨床劑量

（4）參考藥動學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

（5）據(jù)等效劑量推算

（6）據(jù)體表面積折算

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討（三）樣品提供和給藥途徑

一次性提供中試樣品，要求與臨床擬用途徑一致。三、預(yù)試驗(yàn)易被忽略。實(shí)驗(yàn)全程耗時耗力，一般重復(fù)不起。用少量動物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)很有必要，其中重點(diǎn)解決最大給藥量的問題。中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討四、給藥周期長期毒性試驗(yàn)的給藥周期

長期毒性試驗(yàn)的給藥周期

臨床療程長期毒性給藥周期嚙齒類動物非嚙齒類動物≤1周2周2周≤2周1個月1個月≤1個月3個月3個月≤3個月6個月6個月

>3個月6個月9個月中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討對于一些慢性病需長期反復(fù)應(yīng)用的藥物，長期毒性試驗(yàn)則要求根據(jù)臨床實(shí)際用藥的療程，按照最長試驗(yàn)周期進(jìn)行試驗(yàn)，即觀察大鼠給藥6個月、犬給藥9個月的長期毒性試驗(yàn)

五、指標(biāo)選擇

一般狀態(tài)、血液學(xué)、血液生化學(xué)、尿常規(guī)、主要臟器的病理組織檢查

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討1、血液學(xué)指標(biāo)紅細(xì)胞計數(shù)血紅蛋白紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞血紅蛋白平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù)及其分類血小板計數(shù)凝血時間骨髓涂片中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討2、血液生化學(xué)指標(biāo)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶堿性磷酸酶

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶尿素氮、肌酐、總蛋白、白蛋白、血糖總膽紅素、總膽固醇、甘油三酯、（鈉離子濃度、鉀離子濃度、氯離子濃度、肌酐磷酸激酶）中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討3、非嚙齒類動物尿液分析指標(biāo)：尿液外觀、比重、pH值、尿糖、尿蛋白、尿膽紅素、尿膽原、酮體、尿液沉渣的顯觀察中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討4、長期毒性研究中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官：腦、心臟、肝臟、腎臟、腎上腺、胸腺、脾臟、雄性動物睪丸、雄性動物附睪、雌性動物卵巢、雌性動物子宮中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討5、嚙齒類動物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織：腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、胰腺、腎臟、腎上腺、脾臟、心臟、氣管、肺、主動脈、雄性動物睪丸、雄性動物附睪、雌性動物子宮、雌性動物卵巢、雌性動物乳腺、雄性動物前列腺、膀胱、坐骨神經(jīng)、骨髓、給藥局部、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討6、非嚙齒類動物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織：腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、膽囊、腎臟、腎上腺、脾臟、胰腺、氣管、肺、主動脈、心臟、雄性動物附睪、雄性動物睪丸、雌性動物卵巢、雌性動物子宮、雄性動物前列腺、雌性動物乳腺、坐骨神經(jīng)、膀胱、視神經(jīng)、給藥局部、骨髓、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討六、恢復(fù)期

了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的遲發(fā)性反應(yīng)

停藥后2-6周。某些檢查指標(biāo)出現(xiàn)異常，可將恢復(fù)期相應(yīng)延長七、結(jié)果的判斷應(yīng)事實(shí)求是地科學(xué)地分析結(jié)果，報告毒性反應(yīng)出現(xiàn)和恢復(fù)的時間，分析有無蓄積的情況

沒有統(tǒng)計學(xué)意義，不等于沒有生理學(xué)意義，有統(tǒng)計學(xué)意義也不等于有生物學(xué)意義

要有本實(shí)驗(yàn)室的背景資料中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討中藥的特殊毒理學(xué)研究

包括致突變性、致癌性、生殖毒性、致敏性、依賴性。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討

其他毒性研究中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討一、皮膚刺激試驗(yàn)

分別進(jìn)行完整皮膚、破損皮膚、多次給藥的刺激試驗(yàn)。

中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問題的探討芎龍止痛滴鼻液對完整、破損皮膚的影響C1～４：涂5%吐溫802ml后1小時、6小時、24小時、7天的完整