篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選課件

篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選課件匯報(bào)人：文小庫(kù)2024-01-11目錄contents雜交瘤細(xì)胞篩選概述雜交瘤細(xì)胞篩選的步驟雜交瘤細(xì)胞篩選的注意事項(xiàng)雜交瘤細(xì)胞篩選的實(shí)驗(yàn)操作雜交瘤細(xì)胞篩選的結(jié)果分析01雜交瘤細(xì)胞篩選概述0102雜交瘤細(xì)胞篩選的定義雜交瘤細(xì)胞篩選是單克隆抗體技術(shù)中的關(guān)鍵步驟，能夠獲得具有高度均一性和特異性的抗體。雜交瘤細(xì)胞篩選是指通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)將免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，篩選出能夠持續(xù)產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞株的過(guò)程。雜交瘤細(xì)胞篩選的原理免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合后，形成的雜交瘤細(xì)胞既具有免疫細(xì)胞的抗體生成能力，又具有腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖能力。通過(guò)篩選，選擇出能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)過(guò)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，最終獲得單克隆抗體。單克隆抗體能夠特異識(shí)別抗原，用于診斷和治療疾病，如癌癥、自身免疫性疾病等。疾病診斷和治療免疫學(xué)研究生物制品生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)可用于免疫學(xué)研究，如免疫應(yīng)答機(jī)制、抗原表位分析等。單克隆抗體可用于生產(chǎn)高純度、高質(zhì)量的生物制品，如藥物、診斷試劑等。030201雜交瘤細(xì)胞篩選的應(yīng)用02雜交瘤細(xì)胞篩選的步驟將免疫的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。細(xì)胞融合通過(guò)選擇性培養(yǎng)基篩選出融合的雜交瘤細(xì)胞，淘汰未融合的細(xì)胞。篩選方法初步檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞是否產(chǎn)生所需抗體?？贵w檢測(cè)細(xì)胞融合

抗體檢測(cè)檢測(cè)方法通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等方法檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體。檢測(cè)指標(biāo)抗體親和力、特異性、效價(jià)等指標(biāo)。陽(yáng)性克隆篩選根據(jù)檢測(cè)結(jié)果篩選出陽(yáng)性克隆，即產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。通過(guò)抗體檢測(cè)結(jié)果，挑選出陽(yáng)性克隆進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。篩選方法將陽(yáng)性克隆進(jìn)行單細(xì)胞分離培養(yǎng)，以獲得單一細(xì)胞的純培養(yǎng)?？寺』囵B(yǎng)對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行抗體檢測(cè)和鑒定，確保其符合要求。抗體檢測(cè)與鑒定陽(yáng)性克隆篩選細(xì)胞擴(kuò)增通過(guò)克隆化培養(yǎng)，使雜交瘤細(xì)胞數(shù)量不斷增加。培養(yǎng)條件為雜交瘤細(xì)胞提供適宜的生長(zhǎng)條件，如溫度、濕度、營(yíng)養(yǎng)等。細(xì)胞傳代定期將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行傳代，保持細(xì)胞的活力和生長(zhǎng)狀態(tài)?？寺』囵B(yǎng)采用免疫學(xué)技術(shù)對(duì)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。檢測(cè)方法抗體的親和力、特異性、效價(jià)等指標(biāo)，以及抗體的類(lèi)別、亞類(lèi)等屬性。鑒定指標(biāo)鑒定后的抗體可用于進(jìn)一步的研究和應(yīng)用，如疾病診斷、治療和藥物研發(fā)等。應(yīng)用價(jià)值抗體檢測(cè)與鑒定03雜交瘤細(xì)胞篩選的注意事項(xiàng)

細(xì)胞融合的條件細(xì)胞融合是篩選雜交瘤細(xì)胞的關(guān)鍵步驟，需要選擇適宜的細(xì)胞融合條件，包括細(xì)胞種類(lèi)、融合劑、融合溫度、融合時(shí)間等因素。常用的融合劑有聚乙二醇（PEG）和電融合技術(shù)，其中PEG融合技術(shù)操作簡(jiǎn)單，但需要嚴(yán)格控制PEG濃度和融合溫度。融合溫度和時(shí)間會(huì)影響細(xì)胞融合效果，通常選擇37℃恒溫條件下進(jìn)行融合?？贵w檢測(cè)是篩選雜交瘤細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)，常用的檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)等。ELISA方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，適用于大量樣本的檢測(cè)；免疫熒光技術(shù)可用于觀(guān)察細(xì)胞表面抗原的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞表面抗原的定量分析?？贵w檢測(cè)的方法陽(yáng)性克隆是指能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，篩選標(biāo)準(zhǔn)包括抗體分泌量、特異性及穩(wěn)定性等方面。抗體分泌量可通過(guò)ELISA等方法進(jìn)行檢測(cè)，特異性可通過(guò)抗原刺激等方法進(jìn)行驗(yàn)證，穩(wěn)定性則需要經(jīng)過(guò)多次傳代和凍存復(fù)蘇等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。陽(yáng)性克隆的篩選標(biāo)準(zhǔn)克隆化培養(yǎng)是篩選陽(yáng)性克隆的關(guān)鍵步驟，需要選擇適宜的培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基、溫度、氣體環(huán)境等因素。常用的培養(yǎng)基有DMEM、F12等，根據(jù)不同細(xì)胞類(lèi)型選擇適宜的培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度需維持在37℃，氣體環(huán)境需保持95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%CO2（維持培養(yǎng)基pH值）。克隆化培養(yǎng)的條件抗體的質(zhì)量保證抗體的質(zhì)量是雜交瘤細(xì)胞應(yīng)用價(jià)值的重要指標(biāo)之一，需要從多個(gè)方面保證抗體的質(zhì)量。選擇高特異性、高親和力的抗體是保證抗體質(zhì)量的關(guān)鍵，此外還需注意抗體的可重復(fù)性、穩(wěn)定性和批次一致性等方面。04雜交瘤細(xì)胞篩選的實(shí)驗(yàn)操作克隆化培養(yǎng)試劑選擇適當(dāng)?shù)目寺』囵B(yǎng)試劑，如有限稀釋法或微珠法。陽(yáng)性克隆篩選試劑選擇適當(dāng)?shù)年?yáng)性克隆篩選試劑，如HAT選擇性培養(yǎng)基?？贵w檢測(cè)試劑選擇適合的抗體檢測(cè)試劑，如ELISA或熒光抗體檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)基選擇適合雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，如HAT培養(yǎng)基。細(xì)胞融合劑選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞融合劑，如聚乙二醇或電融合。實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備123將雜交瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞分別進(jìn)行傳代培養(yǎng)。準(zhǔn)備雜交瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，采用適當(dāng)?shù)娜诤戏椒▽㈦s交瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。細(xì)胞融合通過(guò)離心和洗滌去除未融合的雜交瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞。去除未融合的細(xì)胞細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)操作加抗原刺激將抗原溶液加入已融合的雜交瘤細(xì)胞中，刺激其產(chǎn)生抗體。抗體檢測(cè)采用適當(dāng)?shù)目贵w檢測(cè)方法，如ELISA或熒光抗體檢測(cè)，檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。制備抗原根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模苽湎鄳?yīng)的抗原溶液。抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作03培養(yǎng)與篩選在選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，通過(guò)觀(guān)察生長(zhǎng)情況、抗體產(chǎn)生情況等指標(biāo)，篩選出陽(yáng)性克隆。01準(zhǔn)備選擇性培養(yǎng)基根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，制備HAT選擇性培養(yǎng)基。02接種雜交瘤細(xì)胞將已篩選的雜交瘤細(xì)胞接種到選擇性培養(yǎng)基中。陽(yáng)性克隆篩選實(shí)驗(yàn)操作準(zhǔn)備克隆化培養(yǎng)基根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，制備適合雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的克隆化培養(yǎng)基?？寺』囵B(yǎng)將陽(yáng)性克隆接種到克隆化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，確保每個(gè)克隆來(lái)源于單一細(xì)胞?？寺』Y選通過(guò)觀(guān)察克隆生長(zhǎng)情況、抗體產(chǎn)生情況等指標(biāo)，篩選出穩(wěn)定表達(dá)抗體的陽(yáng)性克隆?？寺』囵B(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作05雜交瘤細(xì)胞篩選的結(jié)果分析抗體滴度通過(guò)滴度檢測(cè)評(píng)估雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體濃度，以確定抗體產(chǎn)量?？贵w親和力通過(guò)親和力檢測(cè)評(píng)估抗體的結(jié)合能力，親和性強(qiáng)的抗體具有更好的識(shí)別和結(jié)合能力?？贵w特異性通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體特異性，確?？贵w能夠與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合?？贵w檢測(cè)結(jié)果分析克隆形成率通過(guò)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)了解雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和生長(zhǎng)速度。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察通過(guò)顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，評(píng)估細(xì)胞的健康狀態(tài)和生長(zhǎng)狀況。通過(guò)克隆形成率檢測(cè)評(píng)估雜交瘤細(xì)胞的增殖能力，選擇增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞克隆進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)?？寺』囵B(yǎng)結(jié)果分析通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較不同培養(yǎng)基對(duì)雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)