CN200510138143XA 用于治療腫瘤的含有鯊魚軟骨提取物和抗腫瘤劑的藥物制備配方專利技術(shù)

[19]中華人民共和國國家知識產(chǎn)權(quán)局[12]發(fā)明專利申請公開說明書[21]申請?zhí)?00510138143.XA61K45/06(2006.01)A61K35/602006.01)A61K31/28(2006.01)A61P35/002006.01)[43]公開日2006年8月30日[11]公開號CN1824317A[22]申請日1998.3.11[21]申請?zhí)?00510138143.X[71]申請人阿特納贊塔里斯公司中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所李華英權(quán)利要求書2頁說明書12頁附圖3頁用于治療腫瘤的含有鯊魚軟骨提取物和抗腫瘤劑的藥物組合物本發(fā)明描述了軟骨提取物，即鯊魚軟骨提取物，在聯(lián)合抗腫瘤治療中的一種新用途。鯊魚軟骨提取物與抗腫瘤劑聯(lián)合使用。該療法可提高抗腫瘤功效，且不伴發(fā)毒副作用的升高，甚至可以使毒副作用降低。21.一種用于治療腫瘤的藥物組合物，其含有一種抗腫瘤量的抗腫瘤劑和一種對抗抗腫瘤劑的副作用的保護量的軟骨提取物，和藥學上可接受的2.權(quán)利要求1中定義的組合物，其特征在于軟骨提取物的劑量足以引起毒副作用的降低。3.權(quán)利要求1所定義的組合物，其中所述的軟骨提取物是一種鯊魚軟骨提取物，它是經(jīng)過包含以下步驟的過程獲得的：勻化并提取鯊魚軟骨直至獲得平均粒度500μm的軟骨顆粒和粗制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。4.權(quán)利要求2所定義的組合物，其中所述的軟骨提取物是一種鯊魚軟骨提取物，它是經(jīng)過包含以下步驟的過程獲得的：勻化并提取鯊魚軟骨直至獲得平均粒度500μm的軟骨顆粒和粗制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。5.權(quán)利要求1、2、3和4中任一項所定義的組合物，其中所述的抗腫瘤劑是從下列藥物中選擇的：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺，阿糖孢苷，羥基脲，柔紅霉素，鹽酸阿霉素，鹽酸表柔比星，鹽酸伊達比星，放線菌素D,硫酸博萊霉素，絲裂霉素，米托坦，鹽酸米托蒽醌，依托泊苷，替尼泊苷，多西他奇，紫杉醇，硫酸長春花堿，硫酸長春新酶，達卡巴嗪，磷酸氟達拉濱，卟菲爾鈉，鹽酸丙卡巴肼，維A酸，馬6.權(quán)利要求5所定義的組合物，其中所述抗腫瘤劑為順鉑。7.一種用于治療癌癥的藥盒，其含有兩個組分，第一種組分含有抗瘤劑200510138143.X權(quán)利要3量形式的抗腫瘤劑，第二種組分含有對抗抗腫瘤劑的副作用的保護性劑量形式的軟骨提取物。8.權(quán)利要求7中所述的藥盒，其特征在于所述第二種組分的劑量足以降9.權(quán)利要求7所定義的藥盒，其中所述的軟骨提取物是一種鯊魚軟骨提取物，它是經(jīng)過包含以下步驟的過程獲得的：勻化并提取鯊魚軟骨直至獲得平均粒度500μm的軟骨顆粒和粗制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。10.權(quán)利要求8所定義的藥盒，其中所述的軟骨提取物是一種鯊魚軟骨提取物，它是經(jīng)過包含以下步驟的過程獲得的：勻化并提取鯊魚軟骨直至獲得平均粒度500μm的軟骨顆粒和粗制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。11.權(quán)利要求7、8、9和10中任一項所定義的藥盒，其中所述的抗腫瘤劑是從下列藥物中選擇的：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺，阿糖孢苷，羥基脲，柔紅霉素，鹽酸阿霉素，鹽酸表柔比星，鹽酸伊達比星，放線菌素D,硫酸博萊霉素，絲裂霉素，米托坦，鹽酸米托蒽醌，依托泊苷，替尼泊苷，多西他奇，紫杉醇，硫酸長春花堿，硫酸長春新酶，達卡巴嗪，磷酸氟達拉濱，卟菲爾鈉，鹽酸丙卡巴肼馬司他，蘇拉明，TNP470,沙利度胺或放射療法。12.權(quán)利要求11所定義的藥盒，其中所述抗腫瘤劑為順鉑。4用于治療腫瘤的含有鯊魚軟骨提取物和抗腫本申請是1998年3月11日遞交的、申請?zhí)枮?8803267.8和抗腫瘤劑的藥物組合物”的中國專利申請的分案申請技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及包括抗腫瘤劑和具有抗腫瘤活性的軟骨提取物的抗腫瘤本受讓人已經(jīng)描述過軟骨組織，即鯊魚軟骨組織提取物的生物學活性。軟骨提取物的獲取過程和該提取物本身的性質(zhì)已經(jīng)公開發(fā)表在國際公開WO95/32722,W096/23512和W097/16197中。獲取過程一般包括下制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。這些過程可應(yīng)用于對任何來源的軟骨中的生物學活性物質(zhì)的提取。給藥的受試動物和腫瘤患者的觀察中沒有發(fā)現(xiàn)有與之直接相關(guān)的嚴重副作用。鯊魚軟骨液體提取物和任何其他具有同樣的抗腫瘤活性的軟骨提用于治療癌癥的藥物有很多種，本發(fā)明所指的抗腫瘤劑包括如1中所列出的藥物，但并不僅限于這些藥物。表1烷化劑200510138143.X5異環(huán)磷酰胺卡氮芥含鉑化合物類卡鉑巰基嘌呤200510138143.X6放線菌素D200510138143.X7六甲蜜胺I-門冬酰胺酶維A酸(全反式視黃酸),系統(tǒng)給藥的這些抗腫瘤劑的劑量安全限度大多較低，因為它們的毒醫(yī)學界內(nèi)一個公認的事實是，沒有哪一種抗腫瘤療法是完美無缺的。藥理學家和腫瘤學家總是不得不在最大有效劑量和由此帶來的毒副作用之間尋求折中方案。其結(jié)果是：對某一腫瘤的藥物有效劑量可能是它的次最大劑量，以避免在任何可能的范圍引起過于嚴重的毒副作用。因而不幸的是，相對于關(guān)注藥物的最大功效而言，如何避免嚴重的毒副作用我們所描述過的軟骨提取物(文獻同上)在體內(nèi)是具有抗腫瘤增生活性的，這種活性看來可以歸之于至少是直接抗腫瘤活性，抗溶膠原和抗血管生成活性的聯(lián)合作用。該提取物具有公認的抗腫瘤活性并沒有毒副作用。因為在這一領(lǐng)域目前的研究目的在于，獲得一種具有接近100%功200510138143.X說明書第5/12頁8效和0%的毒性的抗腫瘤療法，故而不難理解那些接近這一黃金標準的抗腫瘤成分將極受歡迎。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種改進的抗腫瘤療法，它包括服用一種有效對抗腫瘤量的抗腫瘤劑和一種有效對抗腫瘤量的軟骨提取物。軟骨提取物的總體益處是增加抗腫瘤功效和保護機體對抗毒副作用本發(fā)明的一個目的就是提供一種具有抗腫瘤活性的軟骨提取物在一種聯(lián)合抗腫瘤治療中的用途，用于對服用抗瘤劑量的該抗腫瘤劑的患者增強該抗腫瘤劑的抗瘤活性，并保護所述患者對抗由于服用該抗腫瘤劑帶來的毒副作用的提高。聯(lián)合抗腫瘤療法可以采取兩種形式：1)給患者服用抗腫瘤劑和軟骨提取物的組合物。2)給患者分別服用一種抗腫瘤劑和一種軟骨提取物，而在服用時間上重疊或同時服用(通稱為“并行治療”)。在本發(fā)明的一種具體實施方案中，軟骨提取物指的是鯊魚軟骨提取物，它是經(jīng)過包含以下步驟的過程獲得的：勻化并提取鯊魚軟骨直至獲得平均粒度500μm的軟骨顆粒和粗制液體提取物的混合物，分離所述液體提取物和軟骨顆粒，并對該粗制液體提取物進行分級分離以回收分子量低于500千道爾頓的分子。在第一種實施方案中，所用的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑量是其次佳劑量，所用的軟骨提取物的量增強抗腫瘤劑的功效，同時又不增加，甚至降低由于服用較高劑量的上述抗腫瘤劑所伴發(fā)的毒副作用，這一較高劑量的抗腫瘤劑產(chǎn)生與聯(lián)合抗腫瘤療法相等的抗腫瘤功效。在第二種實施方案中，所用的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑量是其最佳劑量，所用的軟骨提取物的量增強抗腫瘤劑的功效，同時又不增加，甚至降低由于服用上述抗腫瘤劑所伴發(fā)的毒副作用一種抗腫瘤劑的次佳或最佳劑量的選擇只取決于所追求的治療作用和該抗腫瘤劑的副作用的嚴重性。200510138143.X說明書第6/12頁9本發(fā)明中的抗腫瘤劑可以是：白消安，噻替派，苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺，雌二醇氮芥磷酸鈉，異環(huán)磷酰胺，鹽酸氮芥，美法侖，卡氮芥，羅氮芥，鏈脲霉素，卡鉑，順鉑，氨甲喋呤鈉，卡拉垂賓(cladribine),巰基嘌呤，硫鳥嘌呤，阿糖孢苷，羥基脲，柔紅霉素，鹽酸阿霉素，鹽酸表柔比星，鹽酸伊達比星，放線菌素D,硫酸博萊霉素，絲裂霉素，米托坦，鹽酸米托蒽醌，依托泊苷，替尼泊苷，多西他奇(docetaxe1),紫杉醇(paclitaxel),硫酸長春花堿，硫酸長春新堿，硫酸長春地辛，酒石酸長春瑞賓，六甲蜜胺，安丫啶，I-門冬酰胺酶，達卡巴嗪，磷酸氟達拉濱，卟菲爾鈉，鹽酸丙卡巴肼，維A酸(全反式視黃酸),馬馬司他(marimastat),蘇拉明，TNP470,沙利度胺或放射療法。在本發(fā)明的一種具體實施方案中，所用的抗腫瘤劑是順鉑。本發(fā)明的另一個目的是提供可用于實施軟骨提取物這種新用途的產(chǎn)產(chǎn)品之一是一種抗腫瘤組合物，其含有一種抗腫瘤量的抗腫瘤劑和一種抗腫瘤量的軟骨提取物，和藥學上可接受的適宜載體。此類產(chǎn)品的另一種形式是一種抗腫瘤治療藥盒，其含有兩個組分，一個組分含有抗瘤劑量形式的抗腫瘤劑，第二種組分含有抗瘤劑量形式的軟骨提取物。具體實施方式我們已經(jīng)試驗過由服用一種軟骨提取物和一種抗腫瘤劑所構(gòu)成的聯(lián)合抗腫瘤療法，希望揭示聯(lián)合治療是否使藥物的功效彼此增強而毒副作用無任何增加，甚至更好的是有所減低。本發(fā)明將通過優(yōu)選實施方案加以描述，并進一步參考下列附圖，目的是對本發(fā)明進行具體舉例說明而不是限制其范圍。附圖說明圖1顯示的是在LLC小鼠腫瘤模型中轉(zhuǎn)移灶數(shù)目的減少。用軟骨液體提取物(AE-X)對LLC小鼠進行單獨口服給藥或與順鉑(CDDP)一起聯(lián)合圖2顯示的是經(jīng)順鉑(CDDP)和劑量逐步提高的軟骨液體提取物(AE-X)單獨或聯(lián)合治療的LLC小鼠的體重變化情況，并與生理鹽水處理組(對照組)進行比較圖3顯示的是抗腫瘤治療毒性程度與白血球計數(shù)之間的相關(guān)性。結(jié)果我們已經(jīng)根據(jù)我們的專利藥鯊魚軟骨提取物(出處同上)確定了某些成分，發(fā)現(xiàn)其中存在總濃度為每20mg干重總軟骨液體提取物大約75μg次黃嘌呤，它的呋喃糖苷衍生物和二聚體。盡管不排除該劑量的次黃嘌呤在體內(nèi)會有有效對抗腫瘤的可能，不過這一劑量在體內(nèi)應(yīng)是無毒的。次黃嘌呤是次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)的底物，HGPRT是一種嘌呤營救酶(Weber等.,1983)。次黃嘌呤形成單磷酸肌苷，而單磷酸肌苷是參與腺苷酸和鳥苷酸合成的關(guān)鍵中間體。盡管次黃嘌呤最終可能導致嘌呤堿基在核苷酸和核酸中結(jié)合的增加，而這一情況又有利于DNA合成，但是許多細胞系統(tǒng)在各式各樣的細胞途徑中使用嘌呤，有些作為激活劑而其他的則有抑制作用。已知次黃嘌呤在體外具有抗腫瘤細胞增生的活性，這提示在癌細胞中，與次黃嘌呤相關(guān)的抑制途徑可能比激在人類受試者中，資料表明：那些接受軟骨提取物和放射療法或化學療法并行治療的患者可以更迅速地恢復(fù)健康，其全身表觀和指甲和頭發(fā)的健康均明顯改善。另一方面，那些只接受軟骨提取物治療的患者同樣可見他們總體健康的改善，同時癌腫在縮減。這些觀察指出：軟骨提取物不僅僅通過其本身使腫瘤增生退化的功能而起效，它還可以抵消其他抗腫瘤治療對人體的不利影響，和/或使人能更快地從這種不利影響中DA3小鼠，其腫瘤具有低度轉(zhuǎn)移的可能性，和200510138143.XDA3模型我們通過小鼠乳腺癌模型(同種移植物)來研究軟骨提取物的抗腫瘤潛力。1X10?DA3細胞被皮下接種到BALB/c小鼠的右脅。這些細胞起源于由7,12-二甲基乳腺癌(D.Medina,J.Nat1.CancerInst.,1969,42:303-310;出處同上.,1976,57:1185-1189).接種的細胞在體內(nèi)緩慢生長并形成實谷氨酰胺，0.1mM非必需氨基酸，10mM維生素，10%胎牛血清，1%殖但不發(fā)生分化。在用于誘導腫瘤時，細胞在完全培養(yǎng)基中生長到70%融合成片后，使用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液收集細胞。細胞經(jīng)離心后，用磷酸緩沖溶液(D-PBS,無Ca2+,Mg2+離子)洗細胞三次，并重懸成1X10?細胞的當日或7日以后。進行了各種不同濃度的軟骨提取物的試驗。軟骨提取物的劑量水平以每千克體重所給予的軟骨提取物的干重的量來表每三天檢測一次腫瘤生長情況，測量瘤體的長度和寬度，并按下列方當每天給予DA3小鼠100到400mg/kg的軟骨提取物(干重)時，治療48天后，可以觀察到腫瘤大小較對照減少50%(資料未顯示)。200510138143.X說明書第9/12頁或與順鉑(CDDP)聯(lián)合給藥試驗，證實了軟骨提取物具有抗腫瘤功效和保護作用。LLC細胞重懸于無菌PBS(10?細胞/0.2ml)內(nèi)。11天后，原發(fā)腫瘤體積平均達到1.0cm3并被手術(shù)切除。術(shù)后，小鼠被隨機分組，每組15只。對照組(服用生理鹽水)和軟骨提取物組小鼠每天被按照指定的劑量水平管飼法給藥，共給藥15天。術(shù)后16天，動物被處死，肺臟被10%福爾馬林固定，并計數(shù)肺部轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目。動物在實驗過程中總是處于受控環(huán)境中：溫度為22℃,濕度40%到50%,明/暗循環(huán)時間：12小時。動物可任意進食和飲水。在首先進行的實驗中，共對小鼠進行了五次順鉑(CDDP)腹腔注射，每三天一次(劑量分別為1,2,3mg/kg)。軟骨提取物每天經(jīng)口給藥(劑量為31,125,500mg/kg)。另有服用生理鹽水的對照組。實驗結(jié)果總結(jié)為表2。表2與對照相比縮減的百分數(shù)321000我們可以注意到軟骨提取物既不表現(xiàn)協(xié)同作用也不表現(xiàn)拮抗作用，而僅僅加合性地增加了其降低LLC肺轉(zhuǎn)移灶的能力。單獨使用3mg/kg的CDDP可使肺轉(zhuǎn)移灶降低54%,而單獨使用125和500mg/kg的軟骨提取物可分別降低65%和69%。使用最高劑量的軟骨提取物(500mg/kg/天)和CDDP(3mg/kg)聯(lián)合治療所達到的降低轉(zhuǎn)移灶的效果(降低85%)與單獨使用200510138143.X說明書第10/12頁的毒性卻沒有在聯(lián)合治療中觀察到(資料未顯示).也就是說，將軟骨提在第二個獨立實驗中，所用CDDP的劑量是4mg/kg,軟骨提取物的劑量分別是75,150,500mg/kg.同樣設(shè)生理鹽水對照組。其降低轉(zhuǎn)移灶的結(jié)果總結(jié)在圖1中。單獨使用CDDP可使轉(zhuǎn)移灶降低大約71%.軟骨提取物在所有受試劑量水平都具有降低轉(zhuǎn)移灶數(shù)目的功效。在使用150mg/kg或更高劑量時，其降低轉(zhuǎn)移灶的功效最大。與單獨使用最佳劑量的CDDP所能達到的最大功效(大約71%)相比，CDDP與兩個最大劑量(150和500mg/kg)的軟骨提取物聯(lián)合使用將會達到超高功效(85%-87%)。毒副作用通過監(jiān)測體重進行評估。結(jié)果如圖2所示。在實驗的第一周內(nèi)，所有各組小鼠的體重均有增加。藥物治療始于記錄的第十二天，在圖上的第二和第三時間點之間所看到的體重降低的情況是由于進行了必要的手術(shù)(在第十一天)以切除原發(fā)LLC腫瘤團塊所治療的小鼠體重下降了大約16%,表明其毒性很大。當單獨使用軟骨提取物時，所有劑量都不影響體重的降低，而只發(fā)揮用CDDP所引起的體重損耗起到了某種保護作用(75,150,500mg/kg劑量介于150-500mg的所有劑量的軟骨提取物都可以與3-4mgCDDP聯(lián)合毒性是通過荷瘤動物的體重降低來進行評估的。我們還通過檢測一項血液學參數(shù)，也就是外周血白細胞數(shù)，來進一步闡述軟骨提取物的保護作用的性質(zhì)。在實驗記錄的第1,4,7,10,13天給正常小鼠注射(腹腔注軟骨提取物經(jīng)口服給藥，劑量分別為75,150,500mg/kg/天。在第十五天處死動物，收集血樣，使用自動血細200510138143.X說明書第11/12頁服用CDDP會導致白細胞數(shù)的明顯降低(表3和4)。軟骨提取物與CDDP聯(lián)合使用會對白細胞數(shù)的降低起保護作用(軟骨提