藥理實(shí)驗(yàn)課件1

藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)二

不同給藥途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用實(shí)驗(yàn)四戊巴比妥鈉LD50的測(cè)定實(shí)驗(yàn)五利尿藥對(duì)家兔尿量的影響藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)一、目的1.掌握基本操作，鍛煉動(dòng)手、動(dòng)腦能力；2.更好地掌握藥理學(xué)基本理論知識(shí)；3.培養(yǎng)科學(xué)思維二、

基本要求1.

實(shí)驗(yàn)前：預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容并復(fù)習(xí)相關(guān)理論知識(shí)；2.

實(shí)驗(yàn)時(shí)⑴實(shí)驗(yàn)器材要妥善保管；⑵實(shí)驗(yàn)操作按步驟進(jìn)行，仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的現(xiàn)象，實(shí)事求是地做好記錄；⑶注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)藥品；⑷維持良好的課堂紀(jì)律。3.

實(shí)驗(yàn)后⑴各組同學(xué)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死，實(shí)驗(yàn)臺(tái)擦干凈，將實(shí)驗(yàn)方盤送回準(zhǔn)備室；⑵值日生搞好實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，將死亡動(dòng)物送至指定場(chǎng)所；⑶書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫1.題目2.目的3.原理4.材料：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，器材，藥品5.方法：用自己的語言簡(jiǎn)單扼要描述出來；6.結(jié)果：要求真實(shí)、清楚；7.討論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較、分析；實(shí)驗(yàn)中有哪些不足之處；結(jié)果異常或失敗的原因；8.結(jié)論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)，應(yīng)帶有提示性質(zhì)。四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本原則1.隨機(jī)原則使每一實(shí)驗(yàn)對(duì)象都有同等的機(jī)會(huì)抽到實(shí)驗(yàn)組或?qū)φ战M中，除處理因素外其他因素盡可能均衡一致，從而抵消非實(shí)驗(yàn)因素的影響。2.對(duì)照原則⑴組間對(duì)照：陰性對(duì)照，陽性對(duì)照，同因素不同水平對(duì)照；⑵自身前后對(duì)照3.

重復(fù)原則五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.動(dòng)物的選擇⑴小白鼠：適用于需大量動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測(cè)定。也較適用于避孕藥實(shí)驗(yàn)、抗炎鎮(zhèn)痛藥實(shí)驗(yàn)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實(shí)驗(yàn)、抗腫瘤藥及抗衰老藥實(shí)驗(yàn)等。⑵大白鼠：比較適用于抗炎藥物實(shí)驗(yàn)，血壓測(cè)定、利膽、利尿藥實(shí)驗(yàn)，也可用于進(jìn)行亞急性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)。

⑶豚鼠：因其對(duì)組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實(shí)驗(yàn)。也常用于離體心臟、心房、腸管實(shí)驗(yàn)。又因它對(duì)結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實(shí)驗(yàn)。⑷家兔：常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對(duì)小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實(shí)驗(yàn)，用于熱原檢查。⑸狗：狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動(dòng)物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對(duì)胃腸蠕動(dòng)和分泌的影響。在進(jìn)行慢性毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，也常采用狗。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)狗、兔等較大的動(dòng)物可用特制的鋁質(zhì)號(hào)碼牌固定在頸部或耳上。大鼠、小鼠如為白色可用黃色苦味酸在不同的體表標(biāo)志上標(biāo)記。3.麻醉藥的選擇⑴局部麻醉：常采用2％普魯卡因做皮下浸潤(rùn)注射，可用于局部手術(shù)。⑵全身麻醉：①吸入麻醉：可將乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩內(nèi)，利用乙醚揮發(fā)的性質(zhì)，經(jīng)肺泡吸收，作用較快，適用于小鼠、大鼠短時(shí)間麻醉。②注射麻醉：常用戌巴比妥鈉和烏拉坦。4.動(dòng)物捉拿及固定方法⑴小白鼠右手抓住其尾部放在鼠籠蓋鐵紗網(wǎng)上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起頸背部皮膚，并以左手的小指、無名指固定其尾部，便可將小鼠固定在手上。⑵大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其頭部，其余三指夾住背腹部即可固定。⑶豚鼠豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。⑷家兔可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢(shì)。在進(jìn)行仰位手術(shù)操作時(shí)，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺(tái)上。頭部用兔頭固定夾固定。5.動(dòng)物的給藥方法⑴小白鼠①灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，頸部伸直。右手持配有灌胃針頭的注射器，自口角插入口腔，再從舌面沿上腭進(jìn)入食道。小鼠灌胃容量一般為0.1-0.3m1／10g。②腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角將針頭從下腹部向頭端刺入腹腔。進(jìn)針部位不宜過高，刺入不宜太深，以免傷及內(nèi)臟。小鼠腹腔注射量一般為0.1-0.3ml／l0g。③皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮膚處進(jìn)針即可。④靜脈注射(i.v.)：將小鼠置于特制的固定筒內(nèi)或倒置的大漏斗下，讓其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或?qū)⑹笪苍?0'C熱水中浸泡半分鐘使血管擴(kuò)張。左手拉尾端，右手持注射器將針頭刺入尾靜脈，推入藥液。⑵家兔①灌胃：需兩人合作進(jìn)行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號(hào)導(dǎo)尿管從開口器中部小孔插入食道。插管時(shí)如誤入氣管會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物的掙扎和呼吸困難。也可將導(dǎo)尿管的外端浸入水中，如有氣泡吹出，表示插在氣管內(nèi)，此時(shí)應(yīng)拔管重插。當(dāng)判明導(dǎo)尿管在食道以內(nèi)后，用注射器接通導(dǎo)尿管將藥液推入。②皮下、腹腔注射：給藥方法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5-1.0/mg，腹腔為1.0-5.0ml/mg。③靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指墊在兔耳注射處的下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當(dāng)確認(rèn)針頭在血管中后，將藥液推入。6.動(dòng)物的處死：大、小鼠通常用頸椎脫臼法處死。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.觀察不同給藥途徑對(duì)同一藥物的作用速度、強(qiáng)度的影響；2.觀察同一藥物從不同途徑進(jìn)入機(jī)體可產(chǎn)生不同的作用。二、實(shí)驗(yàn)材料

注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、燒杯、普通天平、硫酸鎂溶液實(shí)驗(yàn)二

不同給藥途徑對(duì)藥物作用的影響

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.觀察不同途徑給小白鼠使用戊巴比妥鈉后，麻醉開始時(shí)間、維持時(shí)間和麻醉深度的不同。

[觀察指標(biāo)]觀察給藥前后的活動(dòng)及翻正反射等情況。[實(shí)驗(yàn)方法]取體重相近的小白鼠3只隨機(jī)分為三組，稱其體重分別放入鐘罩內(nèi)，觀察它們的正常活動(dòng)及翻正反射情況，然后按下表給藥；觀察小白鼠用藥后的反應(yīng)及活動(dòng)情況，以翻正反射消失時(shí)作為麻醉開始指標(biāo)。記錄麻醉開始時(shí)間，麻醉維持時(shí)間，麻醉深度有何不同（用鑷子夾其后肢看其反應(yīng)）。組別處理方法灌胃組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量灌胃

肌注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量肌注腹注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量腹腔注射[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中

不同途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響組別給藥方法麻醉開始時(shí)間麻醉維持時(shí)間麻醉深度灌胃組肌注組腹注組2.觀察同一種藥物硫酸鎂，給小白鼠肌內(nèi)注射和灌胃給藥引起的作用性質(zhì)的不同。[觀察指標(biāo)]動(dòng)物活動(dòng)增加情況、呼吸急促、反射亢進(jìn)、震顫、驚厥及死亡時(shí)間、炭末推進(jìn)率等。[實(shí)驗(yàn)方法]取禁食12h的小鼠3只，稱重，分別標(biāo)為對(duì)照組、灌胃組和肌內(nèi)注射組按以下給藥：A：對(duì)照組：灌胃給生理鹽水0.2ml/10g；B：灌胃組：灌胃給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g；C：肌內(nèi)注射組：肌內(nèi)注射給3.5％硫酸鎂溶液

0.2ml/10g。給藥后注意觀察動(dòng)物的活動(dòng)情況，是否有肌肉松弛的表現(xiàn)。15min后每只小鼠均灌胃給予5%炭末阿拉伯膠混懸液0.2ml。炭末灌胃后15min，將小鼠脫臼處死，剖開腹腔，取出胃腸道。剪去附著在腸管上的腸系膜,將腸管不加牽引地輕輕地平鋪在玻璃板上(玻璃板上滴少許鹽水)。以幽門為起點(diǎn),測(cè)量炭末在腸管內(nèi)的移動(dòng)距離和小腸(自幽門至回盲部)的全長(zhǎng),計(jì)算每只小鼠炭末的移動(dòng)距離占小腸全長(zhǎng)百分率，比較3組動(dòng)物的活動(dòng)狀況和胃腸炭末推進(jìn)率有何不同。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中

不同途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響鼠號(hào)

體重(g)

藥物及劑量

給藥途徑

動(dòng)物反應(yīng)

炭末推進(jìn)率（%）ABC炭末推進(jìn)率計(jì)算公式：炭末的移動(dòng)距離（cm）

小腸推進(jìn)率=

×100%

小腸全長(zhǎng)（cm）六、思考討論題

1、灌胃和腹腔注射給硫酸鎂的效應(yīng)有哪些不同？為什么？2、給藥前動(dòng)物禁食12小時(shí)的原因。3、為何比較炭末推進(jìn)率，而非小腸全長(zhǎng)或炭末在小腸內(nèi)的推進(jìn)距離？4、本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床用藥有何提示？實(shí)驗(yàn)三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用［目的］觀察激動(dòng)劑與拮抗劑之間的相互作用［材料］兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%鹽酸腎上腺素注液,0.2%硝酸毛果蕓香堿注射液［方法］１、取兔放于兔固定箱內(nèi)固定，避免陽光直射眼睛，用毛剪剪去兔兩眼睫毛，然后用瞳孔量尺測(cè)量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值。２、在兔左眼滴入０.2%毛果蕓香堿3滴，滴藥時(shí)用姆指和食指將下眼瞼提起,使成囊狀,再用中指壓住鼻淚管開口處,防止藥液流入鼻淚管而不起作用，再用右手滴入藥液。15分鐘后再測(cè)量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值，并進(jìn)行比較。3、滴入毛果蕓香堿20分鐘后，分別在兩眼滴入0.1%腎上腺素3滴，15分鐘后測(cè)量?jī)赏状笮?，連續(xù)3次，取平均值并進(jìn)行比較。4、滴入腎上腺素15分鐘后，分別于兩眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分鐘后觀察兩眼瞳孔變化，并測(cè)量其大小，連續(xù)3次，并取平均值。項(xiàng)目正常毛果蕓香堿腎上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

［記錄］

［討論題］從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中如何說明藥物的協(xié)同作用和拮抗作用？實(shí)驗(yàn)四戊巴比妥鈉LD50的測(cè)定一、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法1.急性毒性實(shí)驗(yàn)：一次性大劑量給予藥物后觀察藥物的作用；2.慢性毒性實(shí)驗(yàn)：長(zhǎng)期連續(xù)多次給予中、小劑量的藥物，觀察動(dòng)物一些器官的慢性受損程度；3.特殊毒性實(shí)驗(yàn)：致癌，致畸，致突變，過敏反應(yīng)等。二、LD50的測(cè)定的目的與原理目的：通過實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)測(cè)定LD５０的方法、步驟和計(jì)算過程，了解急性毒性實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法。LD50是指使一群體動(dòng)物中半數(shù)死亡的劑量，是衡量藥物毒性大小的指標(biāo)，是評(píng)價(jià)藥物優(yōu)劣的重要參數(shù)。了解藥物單次給藥或短時(shí)間內(nèi)多次給藥后動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，為臨床安全用藥及監(jiān)測(cè)提供一定的參考。

LD50的測(cè)定方法很多，較為常用的有改良寇氏法、簡(jiǎn)化概率單位法、序貫法、孫瑞元點(diǎn)斜法和Bliss-Finney法。本實(shí)驗(yàn)介紹結(jié)果較準(zhǔn)確、計(jì)算簡(jiǎn)便、可計(jì)算出全部有關(guān)參數(shù)的改良寇氏法及及計(jì)算機(jī)應(yīng)用程序中的Bliss-Finney法。三、具體實(shí)驗(yàn)(以戊巴比妥鈉為例)

［材料］1.動(dòng)物：小白鼠(體重18-22g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食12h)2.器材：注射器、鼠籠、天平、計(jì)算器等。3.藥品：戊巴比妥鈉[實(shí)驗(yàn)方法]1、預(yù)實(shí)驗(yàn)：①探索劑量范圍：根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或文獻(xiàn)找出動(dòng)物100%及0%死亡的劑量，即上下限劑量（Dm,Dn）。對(duì)于無毒性參考資料的藥物，一般先配制最大濃度藥劑，然后按等比關(guān)系（如2：1）稀釋成多個(gè)劑量，方法是每組取2∽10只小鼠，按估計(jì)劑量給藥，如果全死則降低劑量，如果全活則增加劑量，進(jìn)而確定出Dm,Dn。②確定組數(shù)、計(jì)算各組劑量：組數(shù)（G）：5-8組各組劑量：各組劑量要按等比級(jí)數(shù)排列，按下列公式求出公比r:按公比求各組劑量：D1，D2，D3，D4，D5，……，Dm其中D1=Dn=最小劑量，D2=D1·r，D3=D2·r，……Dm=Dn-1·r③配制等比稀釋溶液：要求各小鼠給藥容積一樣，0.1ml/10g∽0.2ml/10g，按下列公式計(jì)算濃度：2、正式實(shí)驗(yàn)①分組編號(hào)：隨機(jī)將小鼠分為五組，每組10只，♀♂各半。②給藥：分別將配制好的等比稀釋液按0.2ml/10g由ip

給藥。③觀察記錄：給藥后觀察并記錄中毒癥狀，30分鐘后記錄各組的死亡小鼠數(shù)。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果]

全班結(jié)果匯總，計(jì)算硝酸士的寧的LD50、LD50的可信限和可信限率。①結(jié)果處理實(shí)驗(yàn)資料按下表列出：

受試物劑量對(duì)數(shù)劑量動(dòng)物數(shù)死亡率概率單位LD50（mg/kg）(X)(只)(%)(Y)及置信限(95%)

12345②計(jì)算方法計(jì)算LD50及95%可信限：

LD50=lg–1[Xm－i(∑P－0.5)]

Xm=最大劑量的對(duì)數(shù)值

i=相鄰兩組比值的對(duì)數(shù)（lgr）

P=各組死亡率∑P=各組死亡率總和

LD50的95%平均可信限=LD50±4.5LD50·SX50

其中SX50為L(zhǎng)D50的標(biāo)準(zhǔn)誤其中n=各組動(dòng)物數(shù)

ΣP2=各組死亡率平方的總和[注意事項(xiàng)]

藥物稱量、配制及給藥的準(zhǔn)確程度是本實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。

1.實(shí)驗(yàn)過程中給藥劑量一定要準(zhǔn)確。

2.注意觀察中毒癥狀及其發(fā)生時(shí)間、死亡時(shí)間。［討論題］什么叫ＬＤ５０？測(cè)定ＬＤ５０的意義和根據(jù)是什么？實(shí)驗(yàn)五利尿藥對(duì)家兔尿量的影響一、利尿藥1.定義：是作用于腎臟，增加電解質(zhì)和水的排出，使尿量增多的藥物。2.分類：根據(jù)利尿藥的作用部位，可分為高效、中效和低效利尿藥3.呋塞米為高效利尿藥⑴利尿作用特點(diǎn)⑵作用機(jī)制⑶臨床應(yīng)用⑷不良反應(yīng)二、利尿藥的實(shí)驗(yàn)方法1.動(dòng)物選擇可用大白鼠、小白鼠、家兔、貓和狗，其中以大白鼠較為常用。2.實(shí)驗(yàn)方法⑴代謝籠實(shí)驗(yàn)法：適用于大、小白鼠；⑵直接自輸尿管或膀胱收集尿液：適用于較大動(dòng)物（家兔、貓、狗）。三、具體實(shí)驗(yàn)[目的]1.了解急性利尿的實(shí)驗(yàn)方法；2.觀察速尿?qū)β樽硗玫睦蜃饔谩材料]1.動(dòng)物：家兔2.器材：兔手術(shù)臺(tái)、量筒、注射器、手術(shù)器械3.藥品：25％烏拉坦，1％速尿[方法]1.麻醉：取家兔一只，稱重，耳緣i.v.25％烏拉坦4ml/kg；注意：注射速度要緩慢，隨時(shí)觀察角膜反射，反射消失即停止注射。2.水負(fù)荷：麻醉后i.g.給自來水40ml/kg；注意：避免灌至氣管，將灌胃管外端浸入水中，若有氣泡