TGAIA 026-2024 水產(chǎn)品中河豚毒素的快速檢測膠體金免疫層析法

ICS67.080.10CCSB50團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/GAIA026—2024水產(chǎn)品中河豚毒素的快速檢測膠體金免疫層析法Rapiddetectionoftetrodotoxininaquaticproducts-Colloidalgoldimmunochromatographicassay2024-12-13發(fā)布 2024-12-20實(shí)施1廣東省分析測試協(xié)會(huì) 發(fā)布1T/GAIA026—2024T/GAIA026—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前 言 Ⅲ范圍 1規(guī)范引用件 1術(shù)語定義 1檢1控1原理 1試劑材料 1試劑 2標(biāo)物質(zhì) 2標(biāo)溶液制 2材料 3儀器設(shè)備 3分析驟 3試制備 3試提取 3試測定 4質(zhì)控制 4性能標(biāo) 4檢5靈5假性率 5假性率 5特5結(jié)果定 5陰結(jié)果 5陽結(jié)果 5無效 5確證 6其他 6附錄A（規(guī)性） 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廣東省分析測試協(xié)會(huì)提出并歸口。（本文件為首次發(fā)布。T/GAIA026—2024T/GAIA026—2024PAGEPAGE1水產(chǎn)品中河豚毒素的快速檢測膠體金免疫層析法范圍本文件規(guī)定了水產(chǎn)品中河豚毒素的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于河豚魚、織紋螺、蝦等水產(chǎn)品中的河豚毒素成分的快速篩查。（GB5009.206—2016GB/T6682下列術(shù)語和定義適用于本文件。檢測線 testline即T線，用于判斷是否檢測到特定抗原。控制線 controlline即C線，用于驗(yàn)證試劑的有效性。原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中河豚毒素經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的河豚毒（T（C定。除非另有說明，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的二級水。試劑乙酸（CH3COOH）（TsOH）。（KCl）（NaCl）。（Na2HPO4）。（KH2PO4）。3g（5.1.2），1001%1mL乙酸（5.1.1）1005.1.9 8.00g0.20g1.44g無水Na2HPO40.24gKH2PO4（5.1.6）800mL1000河豚毒素中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1，純度≥95%。表1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量河豚毒素Tetrodotoxin4368-28-9C11H17O8N3319（1mg/mL）：10.0mg0.1mg，用乙酸（5.1.8）10mL（5.1.8）1mg/mL4℃1（50μLmL50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)（1（5.3.2）200μLmL（5.1.9）1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)（1mol/L）中浸泡1h材料河豚毒素膠體金免疫層析試劑盒：一般包含膠體金試紙條、金標(biāo)微孔及配套試劑。儲(chǔ)存條件：室溫、密封、避光、通風(fēng)干燥保存，保質(zhì)期12個(gè)月。0.016.5 200μL，1000μL，5。4000r/min。100.0g2g±0.1g15mL2mL100℃10rpm2200μL35℃105mL400μL（5.1.9）30s201152（.1.，30s，4000r/min離心2。取2005400磷酸鹽緩（5.1.9）30s20.115230s，4000r/min離心2。取2005400磷酸鹽（5.1.9）30s取100μL樣品待測液加入金標(biāo)微孔中，充分混勻后室溫孵育3min，隨后將微孔內(nèi)的所有溶液吸出，加到試紙條的樣品墊上，反應(yīng)5min后觀察結(jié)果。100每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和質(zhì)控試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取空白試樣，按照7.1、7.2和7.3步驟與試樣同法操作。注：空白試樣為經(jīng)參比方法（GB5009.206—2016）第四法檢測不含河豚毒素的河豚、織紋螺或蝦。20.1于152010μg/kg7.1、7.2和7.3空白試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陽性。10μg/kg8.2 99%。。。8.5 97%。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。通過對比C線和T線的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定，目視判定示意圖見圖1或2，結(jié)果判定也可根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行。CTCTCCTCT無效：C注：T線為檢測線，C線為質(zhì)控線。圖1試紙條目視判定示意圖注：T線為檢測線，C線為質(zhì)控線。圖2檢測卡目視判定示意圖確證GB其他附錄A（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標(biāo)計(jì)算表快速檢測方法性能指標(biāo)計(jì)算方法見表A.1。A.1樣品情況a檢測結(jié)果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1.=N11+N12陰性N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異(X2)X2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21)，自由度(df)=1靈敏度（p+，%)p+=N11/N1.假陰性率（pf-，%)pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率（pf+，%)pf+=N21/N2.=100-特異性相對準(zhǔn)確度，%c（N11+N22)/(N1.+N2.)a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果；b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。c為方法的檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價(jià)。N任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第