DB31∕T 1150-2019 厚葉巖白菜組培生產(chǎn)技術規(guī)范

厚葉巖白菜組培生產(chǎn)技術規(guī)范TechnicalspecificationfortissuecultureBergeniacrassifolia(L.)F2019-03-22發(fā)布2019-07-01實施IDB31/T1150—2019 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 14前期準備 24.1水質(zhì)要求 24.2容器清洗 24.3消毒液配制 24.4母液配制 24.5培養(yǎng)基配制 24.6廢棄培養(yǎng)基處理 35無菌接種 35.1接種準備 35.2無菌操作 36外植體處理 36.1外植體采集和修切 36.2外植體消毒 47組培苗培養(yǎng) 47.1培養(yǎng)條件 47.2初代培養(yǎng) 47.3增殖培養(yǎng) 47.4壯苗培養(yǎng) 47.5生根培養(yǎng) 4 58移栽馴化 58.1移栽規(guī)格 58.2溫室馴化 58.2.1溫室移栽 58.2.2溫室養(yǎng)護 58.2.3病蟲害防治 69容器苗培育 69.1基質(zhì)配制 69.2養(yǎng)護管理 610種苗出圃 610.1質(zhì)量規(guī)格 6Ⅱ10.2種苗檢驗 10.2.2檢驗規(guī)則 10.3種苗包裝 10.4種苗運輸 8附錄A(資料性附錄)厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基藥品名錄及配方 附錄B(資料性附錄)厚葉巖白菜組培苗病蟲害主要危害特征及防治 附錄C(資料性附錄)厚葉巖白菜種苗質(zhì)量檢驗證書格式式樣 Ⅲ本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由上海市綠化和市容管理局提出并組織實施。本標準由上海市園林綠化標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：上海市園林科學規(guī)劃研究院、上海上房園藝有限公司。付瑞、范連社。1本標準規(guī)定了厚葉巖白菜[Bergeniacrassifolia(L.)Fritsch]組培生產(chǎn)的前期準備、無菌接種、外本標準適用于厚葉巖白菜的組培生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準GB6000—1999主要造林樹種苗木質(zhì)量分級GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法緩釋肥料林業(yè)植物及其產(chǎn)品調(diào)運檢疫規(guī)程NY/T2253—2012菠蘿組培苗生產(chǎn)技術規(guī)程花卉種苗組培快繁技術規(guī)程下列術語和定義適用于本文件。通過植物組織培養(yǎng)方式形成的再生植株。外植體從母株上分離下來的第一次培養(yǎng)。組培苗自然直立放置，生根處最上部至最高葉片頂部的垂直距離。組培苗生根處至根尖的長度為根長，逐條測定各根根長，累計相加為總根長?；|(zhì)表面至最高葉片頂部的垂直距離。2生長在固體培養(yǎng)基中的組培苗，凝固劑一般為瓊脂。4前期準備本標準中清洗容器和配制消毒液的水質(zhì)應符合GB5749規(guī)定。新的或用過的容器，放入洗潔精或洗衣粉溶液中，浸泡5min~10min后再清洗；污染的容器應先滅菌再清洗，滅菌按NY/T2306—2013中8.1.2要求操作。清洗完，容器內(nèi)外壁水膜均一，無明顯污本標準所用消毒液按表1規(guī)定比例配制。表1配制消毒液消毒液類型消毒液濃度%定容"乙醇溶液高錳酸鉀溶液使用無菌水定容，無菌水由自來水按NY/T2306-2013中8.1.2要求滅菌制成。乙醇溶液由純度99.9%的無水乙醇配制。e氯化汞用精密度至少為千分之一的電子天平稱取。4.4.2植物生長調(diào)節(jié)劑母液濃度宜為0.1mg/L~2mg/L,維生素C母液濃度宜為0.5mg/L~5.0mg/L,用棕色瓶盛裝，1℃~2℃避光保存，儲存時間不超過180d。4.4.3母液用蒸餾水配制，蒸餾水符合GB/T6682的規(guī)定并按NY/T2306-2013中8.1.2要求滅菌；配制過程按NY/T2253—2012附錄B規(guī)定；母液容器上應貼標簽，注明名稱、濃度、配制日期和配制人；發(fā)現(xiàn)標簽不明或有沉淀或微生物等藻類生長，應停止使用。本標準所用培養(yǎng)基分為初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基四種，配方參見表A.1。配制培養(yǎng)基按以下步驟操作：3a)搖勻母液；b)按設計的配方吸取母液、稱量MS培養(yǎng)基干粉或1/2MS培養(yǎng)基干粉、蔗糖，依次加入容器中，最后用蒸餾水定容；c)用1mol/L鹽酸和1mol/L氫氧化鉀調(diào)pH至5.7～5.9之間；d)按5g/L～8g/L濃度加入瓊脂，加熱沸騰至瓊脂完全溶解；e)稍加冷卻，培養(yǎng)基溫度在25℃~45℃之間分裝完，各類培養(yǎng)基分裝高度見表2;f)封好瓶口，做好標記，配制當天按NY/T2306—2013中8.1.2要求滅菌；g)滅菌后的培養(yǎng)基宜放置3d以上再使用，存儲時間不超過20d。表A.2。廢棄或用過的培養(yǎng)基不應直接丟棄或排入水體，應收集曬干后作肥料使用。5無菌接種5.1.1工作間應清潔干燥。工作間地面和墻面每20d~40d用濃度為10%～20%苯扎溴銨溶液擦拭，每天開啟風機6h～8h。5.1.2工作人員應衣著整潔。工作人員著正規(guī)工作服，戴手套和口罩，操作前用抑菌洗手液洗手。5.1.3工作臺使用應規(guī)范。每次使用超凈工作臺前，臺面、四周和外殼用濃度為10%～20%苯扎溴銨溶液擦干凈；開啟工作臺紫外燈及風機20min~30min后再使用；一個超凈工作臺配備2套~4套接種器械，過濾膜20d~40d清潔一次，半年更換新的過濾膜。無菌操作接種時按以下步驟：a)用酒精燈外焰灼燒接種器械30s~60s或插入280℃~300℃的電熱滅菌器中30s以上；b)使用冷卻后的無菌器械在無菌操作盤中切割組培苗，轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基后及時封口；d)使用完，關閉超凈工作臺和電熱滅菌器，熄滅酒精燈；f)組培苗送入培養(yǎng)室，按種類擺放整齊。6外植體處理6.1外植體采集和修切外植體采集和修切按以下步驟操作：4a)修切好的外植體在2h~5h內(nèi)，先用濃度為5%～15%洗潔精溶液浸泡外植體2min~b)在超凈工作臺上，先用濃度為72%~75%的乙醇溶液浸泡外植體30s~60s,再用加有2滴~4滴聚山梨酯-80的0.1%～0.2%的氯化汞溶液浸泡15min～30min,無菌水沖洗3次~5次，每次1min~2min;——培養(yǎng)溫度為22℃~26℃,培養(yǎng)周期為25d～35d;—培養(yǎng)容器高度為6cm～8cm,底部直徑為4cm～6cm;切分為包含2個~4個組培苗的叢芽或單芽，轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基，每瓶均勻分布6叢~10叢，光培養(yǎng)。5 培養(yǎng)至30d未生根的組培苗，重新切割，再次轉(zhuǎn)人生根培養(yǎng)基；培養(yǎng)至30d已生根但未達到移栽標準的，轉(zhuǎn)入無激案1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至達到移栽標準； 每瓶6個~8個組培苗。擺放、檢查和更新組培苗應符合以下要求：——污染組培苗不得堆放于培養(yǎng)室內(nèi)，按NY/T2306—2013中8.1.2要求滅菌，再按4.2要求清洗培養(yǎng)容器；——從外植體開始，培養(yǎng)時間超過2年或培養(yǎng)代數(shù)超過20代時，重新取樣培養(yǎng)。8移栽馴化移栽時組培苗質(zhì)量規(guī)格應符合以下要求：--組培苗高2cm~3cm,具有3片~5片葉片，葉色鮮綠光亮；-——生根3條~6條，平均組培苗根長0.5cm,總根長為1.5cm～3.0cm。8.2溫室馴化移栽季節(jié)宜在4月至6月或9月至11月，組培苗出瓶1d~3d內(nèi)種植完畢，移栽按以下步驟操作：a)組培苗置于自然環(huán)境中4d~7d,移栽前1d~3d打開培養(yǎng)容器封口；b)用清水洗凈黏附于根部的培養(yǎng)基，用500倍~600倍托布津水溶液浸泡根部10s~30s;c)移栽到草炭、珍珠巖和腐殖質(zhì)比例為2:1:1的混合基質(zhì)中，采用72孔~76孔穴盤，一孔一苗；d)種植完葉面噴霧狀水，澆透基質(zhì)放入苗床，苗床上面搭60cm~100cm高塑料薄膜覆蓋的溫室養(yǎng)護應符合以下要求：——移栽15d內(nèi)，保持種苗葉面濕潤，相對濕度控制在90%～95%之間；移栽15d后，開始揭開苗床上的塑料拱棚，移栽時間與每天揭開塑料拱棚時長見表3,30d后完全揭開拱棚并按干透濕透原則澆水；——移栽30d后，每周噴施濃度0.1g/L的硫酸鉀復合肥1次；——移栽初期光照強度小于20001x,后期逐漸加強光照，最終穩(wěn)定為55%~75%的自然光照6表3移裁時間與揭開時長揭開時長/h移栽時間指移栽后多少天。揭開時長指每天揭開塑料拱棚的時間。8.2.3.1種苗常規(guī)性預防按以下要求：——移栽初期，每14d~18d噴施一次“大生80%”原液稀釋(450倍～600倍),兩個月后每25d~35d噴施一次；——冬季每25d～35d施用0.1g/m3的煙霧劑一次，溫室嚴格密封；——夏季每25d~35d施用“58%雷多米爾”原液稀釋(600倍～800倍)一次。8.2.3.2種苗常見的病蟲害主要危害特征及防治方法參見附錄B。9容器苗培育穴盤苗移至容器中培育時，種苗規(guī)格應符合表4規(guī)定。選用草炭、珍珠巖、黃心土和粗木屑按4:2:1:3(體積比)配制成的混合基質(zhì)，并按2kg/m3~3kg/m3標準添加緩釋肥，緩釋肥應符合GB/T23348—2009的規(guī)定。上缽前1d~2d,用0.1%～0.2%高錳酸鉀溶液淋透基質(zhì)。容器苗營養(yǎng)缽規(guī)格宜為10cm×10cm,容器苗的移栽季節(jié)、水肥管理及病蟲害防治，按8.2.1、8.2.2和8.2.3。種苗出圃時，有瓊脂苗、穴盤苗和容器苗三種類型，各類型種苗質(zhì)量規(guī)格應符合表4規(guī)定。表4種苗規(guī)格葉片數(shù)目片葉片顏色翠綠，層次分明；同一批次95%以上的種苗，高度、冠幅一致5注：瓊脂苗高度指組培苗苗高；穴盤苗、容器苗高度指苗高。"瓊脂苗應無污染及畸形，3條以上不定根，色白健壯，根處無愈傷組穴盤苗和容器苗根系應發(fā)達，無病蟲害。7抽樣時應符合以下要求：——種苗檢驗在一個苗批內(nèi)進行，采取隨機抽樣的方法；——成箱種苗先按5%～10%的比例抽樣箱，再在每個樣箱內(nèi)按5%～10%的比例抽樣株；——不成箱種苗直接按5%～10%的比例抽取樣株。檢驗時用卷尺或直尺測量，讀數(shù)精確到0.1cm并按以下要求操作：——測量組培苗苗高時，自生根處最上部沿垂直方向量至最高葉片頂部；測量穴盤苗和容器苗苗高時，自育苗基質(zhì)表面沿垂直方向量至最高葉片頂部?！甸L度自種苗生根處量至根尖，逐條測定各根根長，——冠幅以苗芯為正中，量取植株的冠幅，如兩個方向冠幅相差較大，垂直交叉測量兩次取平均值?！缒緳z測工作應在背陰避風處進行。檢驗規(guī)則按GB6000—1999中5.1~5.4規(guī)定執(zhí)行，檢驗結(jié)束后，按附錄C填寫種苗質(zhì)量檢驗證書。凡出圃的種苗，均應附種苗質(zhì)量檢驗證書，向外省或國外運輸?shù)姆N苗需經(jīng)過檢疫并附檢疫報檢單，檢疫報檢單應符合GB/T23473-2009中附錄A規(guī)定。種苗包裝應符合以下要求：起苗前2d~3d澆足水分，包裝前不再澆水；各類型裸根苗，先用較小塑料容器或報紙包裝，再整齊放入包裝紙箱內(nèi)；包裝紙箱大小宜為60cm×30cm×30cm;包裝后每箱號和注意事項等。瓊脂苗包裝可分為保留瓊脂包裝和無瓊脂包裝兩種形式，包裝方式分別參照NY/T2306—2013中14.1.2和14.1.3的要求。其余類型種苗包裝方式和包裝數(shù)量應符合表5規(guī)定。穴盤苗整盤包裝時，每盤的種苗數(shù)。種苗使用較小塑料容器或報紙包裝的數(shù)量。8種苗宜在3月至7月，9月至11月進行運輸，包裝紙箱內(nèi)有空隙的地方，填充好報紙、泡沫或塑料等；紙箱上打3個~6個直徑1cm~3cm的小洞；裝車時整齊擺放在運輸車中，紙箱層高為3層~6層；用廂式貨車運輸，運輸途中溫度保持15℃~25℃;3d~7d內(nèi)到達目的地。9(資料性附錄)厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基藥品名錄及配方表A.1給出了厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基配方，表A.2給出了厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基藥品名錄。表A.1厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基配方單位為毫克每升藥品類別中文名稱磷酸二氫鉀硝酸鉀碘化鉀乙二胺四乙酸二鈉有機質(zhì)2222糖防褐變劑 一一吲哚丁酸一 表A.2厚葉巖白菜組培生產(chǎn)培養(yǎng)基藥品名錄藥品類別中文名稱硝酸鉀乙二胺四乙酸二鈉有機質(zhì)糖防褐變劑吲哚丁酸注：6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸通常分別縮寫為6-BA、NAA、IBA.(資料性附錄)厚葉巖白菜組培苗病蟲害主要危害特征及防治表B.1給出了厚葉巖白菜組培苗病蟲害主要特征及防治方法。表B.1厚葉巖白菜組培苗病蟲害主要危害特征及防治防治方法多分布于葉背面，常見于花期及室內(nèi)盆栽苗發(fā)病初期，用50%～70%的艾美樂原液稀釋(3000倍～5000倍)或10%～20%的吡蟲啉原液稀釋(800倍~1000倍)噴霧銹斑病發(fā)病初期，用10%～20%的粉銹寧原液稀釋(1500倍~2500倍)或10%～12.5%烯唑醇原液稀釋(2000倍～3000倍)噴霧心腐病原液稀釋(800倍～1000倍),加65%～75%百菌清可濕性粉劑原液稀釋(600倍～800倍),(資料性附錄)厚葉巖白菜種苗質(zhì)量檢驗證書格式式樣表C.1給出了厚葉巖白菜種苗質(zhì)量檢驗證書格式式樣和內(nèi)容。表C.1厚葉巖白菜種苗質(zhì)量檢驗證書格式式樣編號起苗日期發(fā)苗日期_母株來源檢驗人：負責人：[1]GB3100—1993國際單位制及其應用[2]GB3101有關量、單位和符號的一般原則[3]GB3102.1空間和時間的[4]GB3102.10—1993核反應和電離輻射的量和單位[5]GB/T