母兔的同期發(fā)情與陰道涂片檢查及超排反應(yīng)與抽吸法采卵技術(shù)-培訓(xùn)課件

母兔的同期發(fā)情與陰道涂片檢查及超排反應(yīng)與抽吸法采卵技術(shù)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)，掌握雌性動物發(fā)情周期的調(diào)控機(jī)理、同期發(fā)情與超數(shù)排卵的基本原理、雌性動物陰道涂片技術(shù)和抽取法采卵技術(shù)，為今后胚胎生物技術(shù)的學(xué)習(xí)打下基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)動物：成年母兔實(shí)驗(yàn)藥品：

PMSG、FSH、HCG、氯前列烯醇；緩釋劑PVP；PBS緩沖液、CCM抽卵液；瑞氏染液、吉姆薩染液實(shí)驗(yàn)器材：動物（兔）保定臺、解剖器械、細(xì)胞培養(yǎng)皿、實(shí)體顯微鏡、電光顯微鏡、恒溫水浴鍋、超凈生物工作臺等實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法1、成年母兔的空孕檢查和預(yù)備飼喂（5-7天）。2、母兔同期發(fā)情及陰道涂片檢查：用氯前列烯醇對母兔進(jìn)行同期發(fā)情處理后，然后對未作激素處理前和處理后的各個階段，用生理鹽水棉棒進(jìn)行母兔陰道涂片，觀察涂片上母兔生殖道黏液及細(xì)胞類型，并分析原因。未發(fā)情發(fā)情母兔外陰變化發(fā)情前期（proestrum）發(fā)情期（oestrum）發(fā)情后期（metaestrum）間情期（diestrum）3、成年母兔的超排處理：采用PMSG+HCG、FSH+HCG、FSH+PVP+HCG不同激素組合處理及不同劑量水平處理兩個因素進(jìn)行母兔卵巢的卵泡發(fā)育調(diào)控（3天）。

時間流程安排第1天第2天第3天第4天第5天第6天上午外陰觀察陰道涂片①FSH注射②PMSG注射③FSH+PVP注射①FSH注射①FSH注射HCG注射下午外陰觀察陰道涂片PG注射外陰觀察陰道涂片①FSH注射①FSH注射①FSH注射解剖注意：上午下午的注射時間請要間隔12h氯前列烯醇：0.02mg/只FSH：10、30、50IU/只·次，2次/天，連續(xù)3天PMSG：80、100、120IU/只HCG：120IU/只（耳靜注）4、母兔解剖：觀察母兔子宮變化（質(zhì)地、顏色、大?。⒙殉沧兓ù笮?、顏色、排卵點(diǎn)、可見未成熟卵泡數(shù)等），并做好記錄統(tǒng)計(jì)。母兔子宮變化卵泡血體5、輸卵管沖卵：用CCM液在母兔輸卵管內(nèi)沖洗出排出的成熟卵母細(xì)胞，在實(shí)體顯微鏡觀察、記錄并統(tǒng)計(jì)。6、抽取法采卵：摘取母兔卵巢，用PBS液洗凈后，再用滅菌注射器吸取CCM液后穿刺卵巢上的卵泡，快速抽取卵母細(xì)胞，然后在實(shí)體顯微鏡下觀察、記錄并統(tǒng)計(jì)。抽吸法采卵操作實(shí)驗(yàn)記錄1、同期發(fā)情效果母兔外陰特征陰道涂片結(jié)果PG處理前PG處理后PG處理前PG處理后1組2組3組4組5組2、母兔解剖結(jié)果子宮卵巢質(zhì)地顏色大小顏色排卵點(diǎn)未成熟卵泡數(shù)左側(cè)右側(cè)左側(cè)右側(cè)1組2組3組4組5組3、沖卵結(jié)果左側(cè)卵巢右側(cè)卵巢排卵點(diǎn)沖出卵子數(shù)A級卵子B/C級卵子排卵點(diǎn)沖出卵子數(shù)A級卵子B/C級卵子1組2組3組4組5組作業(yè)根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請作出以下分析：1、母兔發(fā)情后