2024-2025學(xué)年高二生物人教版選擇性必修3教學(xué)課件 第2章- 第2節(jié)

第節(jié)2動(dòng)物細(xì)胞工程第2章高中生物學(xué)選擇性必修3闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過(guò)程。闡述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。闡明利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體的過(guò)程，認(rèn)同單克隆抗體在臨床上有重要的應(yīng)用價(jià)值闡明利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過(guò)程和該技術(shù)的應(yīng)用前景。學(xué)習(xí)目標(biāo)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是指從動(dòng)物體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后在適宜的培養(yǎng)條件下,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。2.原理：1.概念：細(xì)胞增殖第1課時(shí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，據(jù)此思考：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些營(yíng)養(yǎng)條件？培養(yǎng)基應(yīng)是液態(tài)還是固態(tài)？營(yíng)養(yǎng)條件：糖類、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素。液體培養(yǎng)基。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？

無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。適宜的溫度、pH值、滲透壓，適宜的氣體環(huán)境。3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件（2）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：

適宜的溫度：人和哺乳動(dòng)物最適溫度為36.5±0.5℃。適宜的酸堿度：pH：7.2-7.4液體合成培養(yǎng)基：（葡萄糖、氨基酸）、促生長(zhǎng)因子、（水、無(wú)機(jī)鹽、微量元素）等；通常還需加入血清等天然成分。（4）氣體環(huán)境：（1）營(yíng)養(yǎng)：（3）溫度、pH和滲透壓：“95％空氣+5％CO2”的混合氣體培養(yǎng)箱。

氧氣是細(xì)胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的pH。首先對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無(wú)菌處理；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。動(dòng)物培養(yǎng)基特有的特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動(dòng)物血清植物組織培養(yǎng)呢？無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、維生素、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物激素動(dòng)物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境拓展：為什么對(duì)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)通常添加血清？4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的類型①細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)增殖懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)因細(xì)胞密度過(guò)大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻。②需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長(zhǎng)增殖大多數(shù)細(xì)胞屬于這種類型。這類細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞貼壁。貼壁細(xì)胞在生長(zhǎng)增殖時(shí)，除受上述因素的影響外，還會(huì)發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，即當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖。定義：人們通常將分瓶之前的培養(yǎng)，即動(dòng)物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。用機(jī)械方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中培養(yǎng)（貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞。有接觸抑制現(xiàn)象）。①原代培養(yǎng)（2）過(guò)程原代培養(yǎng)增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白加培養(yǎng)液用機(jī)械方法，或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理②傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁接觸抑制傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長(zhǎng)緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）

定義：貼滿瓶壁的細(xì)胞，需要重新用胰蛋白酶處理,懸浮培養(yǎng)密度過(guò)大的細(xì)胞用離心法收集，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng),讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過(guò)程稱為傳代培養(yǎng)。強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過(guò)程■細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。■培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無(wú)毒、易于貼附?！霎?dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二：接觸抑制

瓶壁上的細(xì)胞層數(shù)是：一層（或單層）！

怎樣解除這種現(xiàn)象？細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能傳到10-50代，遺傳物質(zhì)一般不會(huì)發(fā)生改變強(qiáng)調(diào)：細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞系：傳代50代以后，有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，能連續(xù)傳代獲得不死性，叫細(xì)胞系。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官配置細(xì)胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋分瓶傳代培養(yǎng)細(xì)胞株：一般說(shuō)遺傳物質(zhì)未改變細(xì)胞系：遺傳物質(zhì)已改變?cè)囵B(yǎng)總結(jié)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官配置細(xì)胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長(zhǎng)緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？分瓶傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。細(xì)胞株：一般說(shuō)遺傳物質(zhì)未改變細(xì)胞系：遺傳物質(zhì)已改變?cè)囵B(yǎng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液細(xì)胞懸液傳代培養(yǎng)細(xì)胞株（10—50代）細(xì)胞系（＞50代）原代培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)接觸抑制分瓶培養(yǎng)50代細(xì)胞少數(shù)不死細(xì)胞保持正常二倍體核型遺傳物質(zhì)改變細(xì)胞貼壁總結(jié)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程細(xì)胞的全能性細(xì)胞群植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較問(wèn)題3：為什么用胰蛋白酶處理？問(wèn)題1：為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？因?yàn)槠浼?xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)，分化程度低。問(wèn)題2：為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？擴(kuò)大細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)。

動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，胰蛋白酶處理動(dòng)物組織，可分解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，獲得單個(gè)細(xì)胞。

問(wèn)題4：為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4，胰蛋白酶作用的適宜PH為7.2-8.4，胃蛋白酶適宜PH為2.胃蛋白酶在PH為7.2-7.4的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中無(wú)活性。問(wèn)題5：用胰蛋白酶處理不會(huì)把所培養(yǎng)的細(xì)胞消化掉嗎？控制好時(shí)間！長(zhǎng)時(shí)間處理當(dāng)然會(huì)損傷細(xì)胞。問(wèn)題6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？問(wèn)題7、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無(wú)機(jī)鹽）、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體問(wèn)題8、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理：細(xì)胞增殖。問(wèn)題9、目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常在10代以內(nèi)，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。例1下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此圖回答：

(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自_____________________________。(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是________，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。這樣做的目的是__________________________________________.(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有_______

___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為_(kāi)__________.(4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用_____處理，然后配置成___________，再分裝。(5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是_________________________。幼齡動(dòng)物的器官或組織、動(dòng)物胚胎用剪刀剪碎胰蛋白使細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸，便于獲取營(yíng)養(yǎng)和排出代謝廢物葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清原代培養(yǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液細(xì)胞沒(méi)有發(fā)生癌變二、干細(xì)胞的培養(yǎng)及應(yīng)用胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞1.種類：2.存在部位早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中胚胎干細(xì)胞（embryonicstemcell，簡(jiǎn)稱ES細(xì)胞）存在于早期胚胎中，具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織和器官甚至個(gè)體的潛能。3.胚胎干細(xì)胞來(lái)自早起胚胎的干細(xì)胞（1）存在部位：成體干細(xì)胞是成體組織或器官內(nèi)的干細(xì)胞。（2）種類：包括骨髓中的造血干細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)干細(xì)胞和睪丸中的精原干細(xì)胞等。（3）特點(diǎn)：成體干細(xì)胞具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力。4.成體干細(xì)胞造血干細(xì)胞注意：造血干細(xì)胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應(yīng)用也最為成熟的一類成體干細(xì)胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中。有著自我更新能力及分化潛能的干細(xì)胞，與組織、器官的發(fā)育、再生和修復(fù)等密切相關(guān)，因而在醫(yī)學(xué)上有著廣泛的應(yīng)用。例如，將正常的造血干細(xì)胞移植到病人體內(nèi)，恢復(fù)病人的造血和免疫功能，已成為治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病的一種重要手段；神經(jīng)干細(xì)胞在治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。ㄈ缗两鹕　柎暮Ｄ〉龋┓矫嬗兄匾膽?yīng)用價(jià)值。5.干細(xì)胞的應(yīng)用（1）含義：科學(xué)家通過(guò)體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞，獲得了類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞，將它稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（簡(jiǎn)稱iPS細(xì)胞），并用iPS細(xì)胞治療了小鼠的鐮狀細(xì)胞貧血。6.iPS細(xì)胞及應(yīng)用從胚胎中獲取胚胎干細(xì)胞，是否涉及倫理問(wèn)題？（2）應(yīng)用：用iPS細(xì)胞治療阿爾茨海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得了新進(jìn)展。因?yàn)檎T導(dǎo)過(guò)程無(wú)須破壞胚胎，而且iPS細(xì)胞可以來(lái)源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)，所以科學(xué)家普遍認(rèn)為iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景優(yōu)于胚胎干細(xì)胞。例2

干細(xì)胞是一種尚未充分分化的未成熟的細(xì)胞，醫(yī)學(xué)家們正在嘗試?yán)酶杉?xì)胞治療一些頑疾，下列說(shuō)法不正確的是（）A.各種組織干細(xì)胞分化形成不同組織細(xì)胞是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果B.利用干細(xì)胞治療某些頑疾，是因?yàn)楦杉?xì)胞具有再生各種組織、器官的潛能C.同一生物個(gè)體中，神經(jīng)細(xì)胞與干細(xì)胞所含有的遺傳物質(zhì)不同D.干細(xì)胞包括成體干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞【答案】C

【解析】細(xì)胞分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，A項(xiàng)正確；干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，可以分化成成年動(dòng)物的各種組織、器官，故可利用干細(xì)胞治療某些頑疾，B項(xiàng)正確；同一個(gè)體的神經(jīng)細(xì)胞和干細(xì)胞均是由受精卵通過(guò)細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化形成的，遺傳物質(zhì)相同，C項(xiàng)錯(cuò)誤；干細(xì)胞包括成體干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞，D項(xiàng)正確。例3

有研究表明“漸凍癥”是由突變的基因?qū)е逻\(yùn)動(dòng)神經(jīng)元合成了某種毒蛋白，從而阻礙了軸突內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流動(dòng)。也有最新研究結(jié)果表明，利用誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）制作前驅(qū)細(xì)胞，然后移植給漸凍癥實(shí)驗(yàn)鼠，能延長(zhǎng)其壽命。下列相關(guān)描述錯(cuò)誤的是（）A.iPS細(xì)胞分化成的多種細(xì)胞中所有核酸相同，蛋白質(zhì)卻不完全相同B.iPS細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，細(xì)胞種類增多C.若控制運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元合成毒蛋白的基因替換，則可以起到良好的治療作用D.植入神經(jīng)干細(xì)胞，恢復(fù)受損的運(yùn)動(dòng)功能，也許會(huì)在一定程度上使“漸凍癥”病情改善【答案】A【解析】細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，因此iPS細(xì)胞分化成的多種細(xì)胞中DNA相同，RNA和蛋白質(zhì)不完全相同，A項(xiàng)錯(cuò)誤；細(xì)胞分化的結(jié)果是形成形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能不同的細(xì)胞，使細(xì)胞的種類增多，B項(xiàng)正確；若控制運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元合成毒蛋白的基因替換，則無(wú)法合成該毒蛋白，所以可以起到治療該病的作用，C項(xiàng)正確；植入神經(jīng)干細(xì)胞，誘導(dǎo)分化成前驅(qū)細(xì)胞，恢復(fù)受損的運(yùn)動(dòng)功能，也許會(huì)在一定程度上使“漸凍癥”病情改善，D項(xiàng)正確。1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)著名的實(shí)驗(yàn)：人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子是運(yùn)動(dòng)的。人—鼠細(xì)胞是怎樣實(shí)現(xiàn)融合的？動(dòng)物細(xì)胞融合有什么實(shí)踐意義呢？第2課時(shí)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體一、細(xì)胞融合技術(shù)1.細(xì)胞融合：是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。⑴自然發(fā)生：

受精卵⑵人工誘導(dǎo)：

利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合

誘導(dǎo)因素：聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法或滅活病毒誘導(dǎo)法等。

仙臺(tái)病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。

滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞正在融合的雞血細(xì)胞⑶動(dòng)物細(xì)胞融合的原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性

把兩個(gè)不同的動(dòng)物細(xì)胞放在一起，用滅活的病毒處理細(xì)胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進(jìn)而形成雜交細(xì)胞。

融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過(guò)有絲分裂后仍能形成兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞2.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用：

⑴突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；

⑵雜交瘤技術(shù)為制造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑

使用相應(yīng)的抗體檢測(cè)乙肝病毒——抗原二、單克隆抗體及其應(yīng)用醫(yī)院一般怎樣檢測(cè)人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？乙肝病毒模式圖

凡能夠引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。⑴什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有時(shí)自身的組織或細(xì)胞也會(huì)成為抗原，如癌細(xì)胞等?？乖瓫Q定簇：抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團(tuán)，能決定抗原特異性，是免疫細(xì)胞識(shí)別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇?cái)?shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。⑵什么是抗體？由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?起何作用？

當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后由效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白—抗體。

抗體主要分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。由血清中提取的抗體是由不同漿細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬(wàn)種以上，稱為多克隆抗體。特點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏?？乖患兛贵w不純

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B細(xì)胞

抗體血清抗體（也稱多克隆抗體）

每一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體。如果利用單個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖（克隆），形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體——單克隆抗體。問(wèn)題：怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體呢？在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖形成細(xì)胞群?jiǎn)?？什么樣的?xì)胞能夠在體外無(wú)限增殖呢？

——腫瘤細(xì)胞！科勒米爾斯坦榮獲1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)如果把一種B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，所得到的融合細(xì)胞既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。⑵如何誘導(dǎo)融合？PEG融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法、電融合法等⑴如何得到B淋巴細(xì)胞？用特定的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。1.制備單克隆抗體的過(guò)程⑶細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？B-B

B-瘤(雜交瘤細(xì)胞)瘤-瘤⑷如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？單克隆抗體制備過(guò)程中，總共有兩輪篩選，第一輪篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二輪篩選為多次篩選，篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，兩輪篩選的原理和方法是不相同的。①首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞·細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷?！と肆馨图?xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

·鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，可是能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？

小資料：在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖細(xì)胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因?yàn)榭梢岳昧馨图?xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)②再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞陽(yáng)性孔方法——抗原-抗體雜交法

在單克隆抗體制備過(guò)程中，兩輪篩選的原理和方法是不相同的。⑻如何得到大量的單克隆抗體？體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)——化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)、靈敏度高單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過(guò)程：特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原免疫2.單抗隆抗體的應(yīng)用

利用同位素或熒光標(biāo)記的單克隆抗體在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病，純度高、特異性強(qiáng)，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。（2）用于運(yùn)載藥物和治療疾?。?）用作診斷試劑抗體—藥物偶聯(lián)物（antibody-drugconjugates，ADC）；項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性融合前提分散成單個(gè)細(xì)胞去除細(xì)胞壁誘導(dǎo)方法聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、結(jié)果獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙第3課時(shí)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物卵母細(xì)胞黑面母綿羊白面母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞核移植早期胚胎C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母細(xì)胞受體供體代孕受體白面◆核移植的卵細(xì)胞可以發(fā)育成個(gè)體，但乳腺細(xì)胞不能直接發(fā)育成個(gè)體，這說(shuō)明了什么？體外培養(yǎng)母羊一、克隆羊二、動(dòng)物核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1.概念：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。3.分類：

胚胎核移植、體細(xì)胞核移植。胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易。動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難2.原理：

動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性?？寺?dòng)物供體受體供體體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核

無(wú)核卵母細(xì)胞注入重組細(xì)胞重構(gòu)胚胚胎移植代孕母體生出與供體遺傳性狀基本相同的動(dòng)物4.過(guò)程克隆動(dòng)物的性狀表現(xiàn)與三個(gè)親本的關(guān)系大多數(shù)與母羊____相同，少數(shù)與母羊____相同，與母羊____無(wú)關(guān)。因?yàn)椋嚎寺?dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA來(lái)自受體卵母細(xì)胞。ABC

克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)不是對(duì)供體動(dòng)物的100％的復(fù)制動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物核移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)體細(xì)胞核移植流程體細(xì)胞核移植流程１.核移植之前，為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的核遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。２.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞遺傳物質(zhì)不改變保持正常二倍體的核型3.細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞。思考討論（1）共分成兩大階段：（2）移植過(guò)程用到的生物技術(shù)：核移植和胚胎移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（3）克隆的繁殖方式：無(wú)性繁殖總結(jié)核移植流程:1.供體細(xì)胞的采集與培養(yǎng)5.電刺激促融使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，構(gòu)建重構(gòu)胚。6.用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂進(jìn)程4.將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞3.顯微操作去除卵母細(xì)胞中的核2.受體卵母細(xì)胞的采集與體外培養(yǎng)7.胚胎移植入代孕母牛體內(nèi)8.妊娠分娩與供體遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛5.應(yīng)用前景（1）畜牧業(yè)方面：（2）醫(yī)藥衛(wèi)生方面：可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育。保護(hù)瀕危物種，增加其存活數(shù)量生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)組織器官的移植（3）其他領(lǐng)域：了解胚胎發(fā)育及衰老過(guò)程克隆一批遺傳背景相同的動(dòng)物，可以通過(guò)它們之間的對(duì)比來(lái)分析致病基因?？寺√囟膊∧Ｐ偷膭?dòng)物，還能為研究該疾病的致病機(jī)制和開(kāi)發(fā)相應(yīng)的藥物提供幫助6.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題該技術(shù)的成功率仍然非常低，各個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)也有待進(jìn)一步改進(jìn)相對(duì)于技術(shù)研究，核移植的理論研究較為滯后，需要與發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子遺傳學(xué)等學(xué)科更深層次的理論研究相結(jié)合。絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康問(wèn)題【典例】1.如圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物（二倍體）的流程．回答下列問(wèn)題：（1）圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_(kāi)_________．過(guò)程①表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用_________________的方法．②代表的過(guò)程是___________．（2）經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中____________的穩(wěn)定性會(huì)降低，因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)，一般選取傳代____以內(nèi)的細(xì)胞．（3）若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是______________________________________XX或XY顯微操作胚胎移植遺傳物質(zhì)10代卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響．（4）圖中“代孕個(gè)體”為同種的雌性動(dòng)物，移植后的胚胎能在“代孕個(gè)體”子宮中存活的生理基礎(chǔ)是___________________________________________________．（5）與克隆羊“多莉（利）”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了______________________________________．（6）該“流程”中采用了那些生物工程技術(shù)：______________________________________（至少寫(xiě)出三個(gè)）．已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植受體子宮對(duì)外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)2、回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問(wèn)題：(1)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面___________時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的___________。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是________。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用酶處理，可用的酶是________________。(2)隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)_______________的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成________細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性________，細(xì)胞膜表