T-GXDSL 011-2024 基因工程菌低溫智能保藏存技術(shù)規(guī)程

.040T/GXDSLStandardOperatingProcedureforLow-TemperatureIntelligentPreservationofGeneticallyEngineeredMicr廣西電子商務(wù)企業(yè)聯(lián)合會發(fā)布IT/GXDSL003—2024 一、范圍 1二、規(guī)范性引用文件 1三、術(shù)語和定義 11.基因工程菌 12.低溫智能保藏 1四、保藏設(shè)施與設(shè)備 21.低溫保藏設(shè)備 22.保藏容器 2五、保藏前準(zhǔn)備 21.基因工程菌的鑒定 22.保護(hù)劑的選擇與制備 3六、保藏操作 31.菌液制備 32.分裝與標(biāo)記 33.降溫程序 3七、保藏后管理與監(jiān)測 41.庫存管理 42.環(huán)境監(jiān)測 4八、菌種復(fù)蘇與質(zhì)量控制 41.復(fù)蘇方法 42.質(zhì)量檢測 4九、安全與防護(hù) 5十、廢棄物處理 5十一、附則 5T/GXDSL011—2024本文件依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由廣西產(chǎn)學(xué)研科學(xué)研究院提出。本文件由廣西電子商務(wù)企業(yè)聯(lián)合會歸口。本文件起草單位：廣西研科院高新技術(shù)有限公司，廣西西藍(lán)腦科技有限公司，廣西產(chǎn)學(xué)研科學(xué)研究院，廣西玉美人電子商務(wù)有限公司，廣西研科院傳媒有限公司，廣西眾臻大數(shù)據(jù)科技有限公司，廣西茶福茶禧生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司，廣西玉美人電子商務(wù)有限公司，西安藍(lán)腦科技有限公司，廣西澤靈科技有限公司.本文件主要起草人：莊文斌，周伯韜，盛友平，韋新,嚴(yán)祥衛(wèi)，甘漢才,梅華,賴桂華，張婷，許春香.本文件為首次發(fā)布。1T/GXDSL011—2024基因工程菌低溫智能保藏存技術(shù)規(guī)程一、范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了基因工程菌低溫智能保藏的術(shù)語和定義、保藏設(shè)施與設(shè)備、保藏前準(zhǔn)備、保藏操作、保藏后管理與監(jiān)測、菌種復(fù)蘇與質(zhì)量控制等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于從事基因工程菌研究、開發(fā)、生產(chǎn)及相關(guān)應(yīng)用領(lǐng)域的機(jī)構(gòu)對基因工程菌的低溫智能保藏。二、規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。?GB19489《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》?GB/T27405《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測》?[具體微生物菌種保藏機(jī)構(gòu)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，如中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC）的菌種保藏技術(shù)規(guī)范等]三、術(shù)語和定義1.基因工程菌通過基因工程技術(shù)，將外源基因?qū)胨拗骶?，使其獲得特定的遺傳性狀或功能的菌株。2.低溫智能保藏2T/GXDSL011—2024利用智能控制的低溫環(huán)境，結(jié)合特定的保藏介質(zhì)和方法，維持基因工程菌的活性、穩(wěn)定性和遺傳完整性的保藏技術(shù)。四、保藏設(shè)施與設(shè)備1.低溫保藏設(shè)備應(yīng)配備高精度低溫冰箱，溫度范圍可精確控制在-20℃至-80℃,溫度波動(dòng)不超過±1℃。智能監(jiān)控系統(tǒng)應(yīng)能實(shí)時(shí)監(jiān)測溫度、濕度等環(huán)境參數(shù)，并具備遠(yuǎn)程報(bào)警功能，當(dāng)溫度偏離設(shè)定范圍時(shí)，能及時(shí)通過短信、郵件等方式通知管理人員。2.保藏容器采用耐低溫、密封性能良好的凍存管，材質(zhì)應(yīng)為聚丙烯等惰性材料，容積規(guī)格為1.5mL-2.0mL。管蓋應(yīng)密封嚴(yán)實(shí)，防止?jié)B漏和交叉污染。五、保藏前準(zhǔn)備1.基因工程菌的鑒定保藏前應(yīng)采用分子生物學(xué)方法（如PCR、DNA測序等）對基因工程菌進(jìn)行基因型鑒定，確定其攜帶的外源基因序列及遺傳穩(wěn)定性。同時(shí)進(jìn)行表型鑒定，包括菌落形態(tài)、生長特性、產(chǎn)物表達(dá)等特征分析，確保菌種的準(zhǔn)確性和純度。3T/GXDSL011—20242.保護(hù)劑的選擇與制備根據(jù)基因工程菌的特性選擇合適的保護(hù)劑，如甘油、二甲基亞砜（DMSO）等。保護(hù)劑應(yīng)經(jīng)過濾除菌處理，甘油終濃度一般為10%-20%（體積分?jǐn)?shù)），DMSO終濃度一般為5%-10%（體積分?jǐn)?shù)）。六、保藏操作1.菌液制備將處于對數(shù)生長期的基因工程菌離心收集，用預(yù)冷的無菌保護(hù)劑重懸菌體，使菌體濃度達(dá)到1×2.分裝與標(biāo)記將菌液分裝至凍存管中，每管分裝量為0.5mL-1.0mL。在凍存管外清晰標(biāo)注菌種名稱、編號、保藏日期、保藏人等信息。3.降溫程序采用梯度降溫法，先將凍存管置于-40℃預(yù)冷30-60分鐘，然后以每分鐘1℃-2℃的速率降至-80℃。4T/GXDSL011—2024七、保藏后管理與監(jiān)測1.庫存管理建立完善的菌種庫存管理系統(tǒng)，記錄菌種的出入庫信息、保藏位置、保藏時(shí)間等。定期對庫存菌種進(jìn)行盤點(diǎn)，確保菌種信息的準(zhǔn)確性和完整性。2.環(huán)境監(jiān)測定期對低溫保藏設(shè)備的溫度、濕度等環(huán)境參數(shù)進(jìn)行校準(zhǔn)和記錄，每月至少進(jìn)行一次全面檢查。如發(fā)現(xiàn)設(shè)備故障或環(huán)境參數(shù)異常，應(yīng)及時(shí)采取措施修復(fù)，并對受影響的菌種進(jìn)行評估和處理。八、菌種復(fù)蘇與質(zhì)量控制1.復(fù)蘇方法從低溫保藏環(huán)境中取出凍存管，迅速置于37℃水浴中解凍，解凍時(shí)間不超過2分鐘。然后將菌液接種至適宜的培養(yǎng)基中，在適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。2.質(zhì)量檢測復(fù)蘇后的菌種應(yīng)進(jìn)行純度檢測，采用平板劃線法觀察菌落形態(tài)是否一致，有無雜菌污染。同時(shí)進(jìn)行活性檢測，測定菌體濃度和產(chǎn)物表達(dá)量等指標(biāo)，與保藏前的數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，評估菌種的質(zhì)量和穩(wěn)定性。5T/GXDSL011—2024九、安全與防護(hù)在基因工程菌保藏過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守國家有關(guān)生物安全的法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。操作人員應(yīng)穿戴防護(hù)服、口罩、手套等防護(hù)用品，在生物安全柜內(nèi)進(jìn)