2.2.2動物細胞融合技術與單克隆抗體課件高二下學期生物人教版（2019）選擇性必修3VIP

課前提問：1.動物細胞工程有哪些技術？2.動物細胞融合的原理及完成的標志？3.誘導動物細胞融合的方法？4.什么是雜交瘤細胞？5.雜交瘤細胞的特點？6.什么是單克隆抗體？A細胞B細胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體正在融合的原生質(zhì)體雜種細胞愈傷組織雜種植株去壁去壁融合再生出細胞壁脫分化再分化植物體細胞雜交技術馬的細胞A天鵝的細胞B飛馬？A細胞B細胞雜交細胞一動物細胞融合技術實例：1970年，人—鼠細胞熒光標記融合實驗實驗表明：細胞膜具有流動性一.動物細胞融合技術使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。1、概念：3、原理：細胞膜具有一定的流動性4、誘導方法物理法：電融合法化學法：聚乙二醇融合法一、動物細胞融合技術生物法：滅活病毒誘導法2、結果：融合后的細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息滅活病毒誘導細胞融合的原理是動物細胞融合實質(zhì)及完成的標志：細胞核的融合4.意義：（1）研究遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物

新品種等重要手段（2）為制造單克隆抗體開辟了新途徑5.應用：一、動物細胞融合技術突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能第2章第2節(jié)人教版選擇性必修3第2課時

動物細胞融合與單克隆抗體12

闡明動物細胞融合技術的概念，舉例說出誘導動物細胞融合的方法。概述單克隆抗體的制備過程。學習目標使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。1、概念：3、原理：細胞膜具有一定的流動性4、誘導方法物理法：電融合法化學法：聚乙二醇融合法一、動物細胞融合技術生物法：滅活病毒誘導法2、結果：融合后的細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息二、單克隆抗體1.定義：體液免疫

抗體抗體2.抗體的分布：機體產(chǎn)生的，專門應對抗原的蛋白質(zhì)。①血清（主要）②組織液及外分泌液（如乳汁中）早期獲得抗體的方法動物體內(nèi)特定抗原漿細胞抗體（血清）反復注射缺點：制備的抗體產(chǎn)量低，純度低，特異性差?？贵w不純多種二、單克隆抗體及其應用單克隆抗體遺憾：體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細胞不能無限增殖一個B淋巴細胞B淋巴細胞群克隆獲得大量的單一抗體單一抗體二B淋巴細胞抗體產(chǎn)生能產(chǎn)生抗體，但不能大量增殖骨髓瘤細胞能大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體二B淋巴細胞骨髓瘤細胞特點：既能大量增殖，

又能產(chǎn)生抗體雜交瘤細胞單克隆抗體的制備過程獲得多種B淋巴細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞誘導融合注射特定抗原培養(yǎng)骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞誘導融合單克隆抗體的制備過程目的：獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞1234誘導融合后會出現(xiàn)哪些不同細胞？多種B淋巴細胞二單克隆抗體及其應用用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。抗原1從小鼠脾臟中獲取B淋巴細胞B細胞1B細胞2B細胞3B細胞4……等多種B細胞

培養(yǎng)骨髓瘤細胞誘導融合融合后會出現(xiàn)哪些不同細胞？B細胞1骨髓瘤細胞雜交瘤細胞1B細胞2B細胞3B細胞4骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞2雜交瘤細胞3雜交瘤細胞4B細胞B細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞B細胞骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞融合的具有同種核的細胞未融合的細胞第一次篩選的目的：篩選出雜交瘤細胞方法：用特定的選擇培養(yǎng)基知識拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細胞的原理①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細胞方法？B淋巴細胞及同型融合細胞：不能無限增殖，死亡骨髓瘤細胞及同型融合細胞：不能無限增殖，死亡雜交瘤細胞：能無限增殖，生長培養(yǎng)基中加入氨基蝶呤（HAT培養(yǎng)基）單克隆抗體的制備過程特定培養(yǎng)基

抗原抗體雜交獲得多種B淋巴細胞第一次篩選：篩選雜交瘤細胞培養(yǎng)＋第二次篩選：篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞誘導融合第二次篩選第一次篩選得到的雜交瘤細胞（多種）多孔板單克隆抗體的制備過程方法：克隆化培養(yǎng)和

抗體檢測二單克隆抗體及其應用將第一次篩選后得到的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)并稀釋每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞。二單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用抗原1二單克隆抗體及其應用抗體檢測呈陽性第二次篩選第一次篩選得到的雜交瘤細胞（多種）多孔板單克隆抗體的制備過程方法：克隆化培養(yǎng)和

抗體檢測原理：抗體與抗原特異性結合目的：獲得足夠數(shù)量的能分

泌特定抗體的雜交瘤

細胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞特點：既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生特定的抗體單克隆抗體的制備過程特定培養(yǎng)基

抗原抗體雜交獲得多種B淋巴細胞大量培養(yǎng)雜交瘤細胞第一次篩選：篩選雜交瘤細胞培養(yǎng)＋第二次篩選：篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞誘導融合抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞單克隆抗體注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖腹水培養(yǎng)液單克隆抗體的制備過程體外培養(yǎng)注射抗原多種B淋巴細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合誘導融合多種細胞雜交瘤細胞多輪次的克隆化培養(yǎng)和抗體檢測抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到腹腔單克隆抗體從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得大量的單克隆抗體第一次篩選第二次篩選單克隆抗體的制備過程動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)1.應用到的細胞工程技術:單克隆抗體的制備過程2.單克隆抗體的優(yōu)點（1）能準確地識別抗原的細微差異（3）可以大量制備。（2）與特定抗原發(fā)生特異性結合三.單克隆抗體的應用在受精后不久，胎盤滋養(yǎng)層細胞就會分泌人絨毛膜促性腺激素（HCG），在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有。1.診斷試劑抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體二單克隆抗體及其應用抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）細胞凋亡①ADC被細胞吞噬②⑤ADC抗體藥物接頭實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。三.單克隆抗體的應用2.運載藥物將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合思考

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討論討論1：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）三.單克隆抗體的應用2.運載藥物藥物發(fā)揮治療效應，如殺傷靶細胞