探究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組影響：機(jī)制與啟示

探究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組影響：機(jī)制與啟示一、引言1.1研究背景與意義動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種嚴(yán)重危害人類健康的心血管疾病，多見于中年以上的男性和絕經(jīng)期后的婦女，腦力勞動(dòng)者尤為多見，也是老年人主要死亡原因之一。其主要病理特征是動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)，致使血管壁中膽固醇和脂質(zhì)過(guò)度沉積，逐漸形成斑塊。隨著病情發(fā)展，斑塊不斷增大，可導(dǎo)致血管狹窄，阻礙血液正常流通；更為嚴(yán)重的是，斑塊一旦破裂，會(huì)迅速形成血栓，引發(fā)血管急性閉塞，進(jìn)而導(dǎo)致心肌梗死、腦卒中等一系列嚴(yán)重的心腦血管事件，給患者的生命健康帶來(lái)極大威脅，也給社會(huì)和家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年因動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病死亡的人數(shù)眾多，且呈上升趨勢(shì)，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療主要采用藥物治療、介入治療和手術(shù)治療等方法。藥物治療方面，常用的藥物如他汀類降脂藥、抗血小板藥物等，雖在一定程度上能夠控制病情發(fā)展，但長(zhǎng)期使用往往會(huì)帶來(lái)諸多不良反應(yīng)，如他汀類藥物可能引發(fā)肝功能損害、肌肉疼痛等，抗血小板藥物則有增加出血風(fēng)險(xiǎn)等問(wèn)題。介入治療和手術(shù)治療雖能直接改善血管狹窄狀況，但存在創(chuàng)傷大、費(fèi)用高、術(shù)后復(fù)發(fā)等局限性，并非所有患者都適用。中醫(yī)中藥在防治動(dòng)脈粥樣硬化方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與多種因素相關(guān)，如氣血運(yùn)行不暢、痰濕內(nèi)阻、肝腎不足等。通過(guò)辨證論治，能夠針對(duì)個(gè)體情況制定個(gè)性化的治療方案，從整體上調(diào)理人體機(jī)能，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。中藥不僅可以直接作用于病變部位，調(diào)節(jié)血脂、抑制炎癥反應(yīng)、穩(wěn)定斑塊，還能通過(guò)調(diào)理全身狀況，改善體質(zhì)，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力，預(yù)防疾病的進(jìn)一步發(fā)展。此外，中藥的副作用相對(duì)較小，患者更容易接受長(zhǎng)期治療。白馬合劑作為一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方，具有溫中散寒、活血通絡(luò)、化痰消腫等功效。其組方中的藥物成分經(jīng)過(guò)精心配伍，相互協(xié)同，在治療動(dòng)脈粥樣硬化等疾病方面展現(xiàn)出一定的潛力。前期的一些臨床觀察和基礎(chǔ)研究已初步證實(shí)了白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有一定的治療作用，然而，其具體的作用機(jī)制尚未完全明確?；谝陨媳尘埃钊胙芯堪遵R合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療作用及機(jī)制具有重要的臨床意義。通過(guò)本研究，有望揭示白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在分子機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)、堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)，推動(dòng)中藥在動(dòng)脈粥樣硬化治療領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用和發(fā)展，為廣大患者帶來(lái)新的治療選擇和希望。1.2研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入探究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組的影響，揭示其在蛋白質(zhì)水平上的作用機(jī)制，為白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化提供全面且深入的理論依據(jù)。具體而言，通過(guò)運(yùn)用先進(jìn)的蛋白組學(xué)技術(shù)，分析正常組、動(dòng)脈粥樣硬化模型組以及白馬合劑治療組大鼠腹主動(dòng)脈的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，篩選出與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的差異表達(dá)蛋白，并對(duì)這些差異蛋白進(jìn)行功能注釋和通路分析，明確它們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化相關(guān)生物學(xué)過(guò)程中的作用，進(jìn)而闡述白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在分子機(jī)制。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：多技術(shù)聯(lián)用分析：本研究綜合運(yùn)用多種先進(jìn)技術(shù)，如蛋白組學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)（Westernblotting、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等）以及生物信息學(xué)分析方法，從不同層面深入探究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組的影響及作用機(jī)制。蛋白組學(xué)技術(shù)能夠全面分析蛋白質(zhì)表達(dá)譜，篩選出差異表達(dá)蛋白；分子生物學(xué)技術(shù)可對(duì)關(guān)鍵蛋白和基因進(jìn)行驗(yàn)證和深入研究；生物信息學(xué)分析則有助于挖掘數(shù)據(jù)背后的生物學(xué)意義，三者相互結(jié)合，相互驗(yàn)證，能夠更全面、深入地揭示其作用機(jī)制。多維度指標(biāo)檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，不僅檢測(cè)大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組的變化，還同時(shí)監(jiān)測(cè)血脂水平、炎癥因子表達(dá)、氧化應(yīng)激指標(biāo)以及血管形態(tài)學(xué)和功能學(xué)等多維度指標(biāo)。通過(guò)對(duì)這些指標(biāo)的綜合分析，能夠更全面地評(píng)估白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療效果，深入探討其作用機(jī)制，為中藥治療動(dòng)脈粥樣硬化提供更豐富、更全面的研究思路和方法?；谙到y(tǒng)生物學(xué)的研究視角：從系統(tǒng)生物學(xué)的角度出發(fā)，將動(dòng)脈粥樣硬化視為一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，綜合考慮蛋白質(zhì)之間的相互作用、信號(hào)通路的調(diào)控以及整體網(wǎng)絡(luò)的變化。通過(guò)對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行功能富集分析和蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，深入研究它們?cè)谡麄€(gè)生物學(xué)系統(tǒng)中的作用和相互關(guān)系，揭示白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化治療作用的整體性和系統(tǒng)性，為中藥復(fù)方的作用機(jī)制研究提供新的思路和方法。二、研究基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備2.1動(dòng)脈粥樣硬化概述動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈硬化中最常見且重要的類型，其定義為動(dòng)脈管壁增厚變硬、失去彈性和管腔縮小的一種病理狀態(tài)。從發(fā)病機(jī)制來(lái)看，它是一個(gè)復(fù)雜的多因素過(guò)程。目前被廣泛接受的發(fā)病機(jī)制理論是炎癥-損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到多種危險(xiǎn)因素如高脂血癥、高血壓、糖尿病、吸煙等刺激時(shí)，會(huì)發(fā)生損傷。血液中的脂質(zhì)，特別是低密度脂蛋白（LDL），會(huì)通過(guò)受損的內(nèi)皮進(jìn)入血管內(nèi)膜下。隨后，單核細(xì)胞趨化至內(nèi)膜下并分化為巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞大量吞噬氧化修飾的低密度脂蛋白（ox-LDL），逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞在血管內(nèi)膜下聚集，形成脂質(zhì)條紋，這是動(dòng)脈粥樣硬化的早期病變。隨著病情進(jìn)展，平滑肌細(xì)胞由中膜遷移至內(nèi)膜下并增殖，合成大量細(xì)胞外基質(zhì)，與泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)等共同構(gòu)成粥樣斑塊。在粥樣斑塊的發(fā)展過(guò)程中，炎癥反應(yīng)貫穿始終，炎癥細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步促進(jìn)病變的發(fā)展和斑塊的不穩(wěn)定。動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)人體的危害極大，因其可累及全身各處動(dòng)脈血管，從而引發(fā)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥。當(dāng)冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化時(shí)，會(huì)導(dǎo)致心肌供血不足，引發(fā)心絞痛、心肌梗死等嚴(yán)重心臟疾病，嚴(yán)重時(shí)可危及生命。腦動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致腦供血不足，引起頭暈、頭痛、記憶力減退等癥狀，若斑塊破裂形成血栓，還可導(dǎo)致腦梗死，造成偏癱、失語(yǔ)等嚴(yán)重后果。腎動(dòng)脈粥樣硬化會(huì)影響腎臟的血液灌注，引發(fā)高血壓、腎功能減退，甚至發(fā)展為腎衰竭。下肢動(dòng)脈粥樣硬化會(huì)使下肢缺血，患者出現(xiàn)間歇性跛行，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肢體壞疽，不得不進(jìn)行截肢手術(shù)。血漿脂蛋白在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中扮演著關(guān)鍵角色。血漿脂蛋白是一種由脂質(zhì)和載脂蛋白組成的復(fù)合物，主要包括乳糜微粒（CM）、極低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）等。其中，LDL是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素之一，它可以被氧化修飾為ox-LDL，ox-LDL具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性和致動(dòng)脈粥樣硬化作用，能夠促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成，加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展。而HDL則具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，它可以通過(guò)促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，將外周組織細(xì)胞中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟進(jìn)行代謝，從而減少膽固醇在血管壁的沉積；同時(shí)，HDL還具有抗炎、抗氧化和抗血栓形成等作用，有助于穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，其他脂蛋白如VLDL及其代謝產(chǎn)物中間密度脂蛋白（IDL）也與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，它們?cè)谝欢l件下也可參與泡沫細(xì)胞的形成和動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展。2.2白馬合劑簡(jiǎn)介白馬合劑是一種中藥復(fù)方制劑，其主要成分包括白芍、白術(shù)、當(dāng)歸、茯苓、川芎、澤瀉、黃芪、炙甘草等多味中藥材。白芍性微寒，味苦、酸，歸肝、脾經(jīng)，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)之功效。白術(shù)性溫，味甘、苦，歸脾、胃經(jīng)，能健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎。當(dāng)歸性溫，味甘、辛，歸肝、心、脾經(jīng)，有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸通便的作用。茯苓性平，味甘、淡，歸心、肺、脾、腎經(jīng)，可利水滲濕、健脾、寧心。川芎性溫，味辛，歸肝、膽、心包經(jīng)，能活血行氣、祛風(fēng)止痛。澤瀉性寒，味甘，歸腎、膀胱經(jīng)，具有利小便、清濕熱的功效。黃芪性微溫，味甘，歸肺、脾經(jīng)，可補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血、行滯通痹、托毒排膿、斂瘡生肌。炙甘草性溫，味甘，歸心、肺、脾、胃經(jīng)，有補(bǔ)脾和胃、益氣復(fù)脈的作用。這些藥物相互配伍，共奏溫中散寒、活血通絡(luò)、化痰消腫、健脾益氣、養(yǎng)血安神等功效。在中醫(yī)理論中，動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與人體的氣血、臟腑功能密切相關(guān)。氣血不暢、痰濕內(nèi)生、臟腑功能失調(diào)等因素均可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的形成。白馬合劑中的藥物成分針對(duì)這些病理機(jī)制發(fā)揮作用。其中，白芍、當(dāng)歸、川芎等具有活血化瘀的功效，可改善血液循環(huán)，抑制血小板聚集，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，從而有助于預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化。白術(shù)、茯苓、黃芪、炙甘草等能健脾益氣，增強(qiáng)脾胃的運(yùn)化功能，促進(jìn)水濕代謝，減少痰濕的生成，從根本上調(diào)節(jié)人體的內(nèi)環(huán)境，有助于預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化。澤瀉可利水滲濕，協(xié)助其他藥物排出體內(nèi)多余的水分和痰濕，減輕血管壁的負(fù)擔(dān)。在臨床應(yīng)用方面，白馬合劑在治療動(dòng)脈粥樣硬化及相關(guān)疾病中已取得了一定的療效。一些臨床研究表明，將白馬合劑用于動(dòng)脈粥樣硬化患者的治療，能夠顯著改善患者的臨床癥狀，如頭暈、頭痛、肢體麻木等。同時(shí)，還可降低患者血液中的血脂水平，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等，升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，調(diào)節(jié)血脂代謝紊亂，減少動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。此外，白馬合劑還能降低炎癥因子的表達(dá)，如C反應(yīng)蛋白（CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，減輕血管炎癥反應(yīng)，穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，降低心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。在一些合并高血壓、糖尿病等疾病的動(dòng)脈粥樣硬化患者中，白馬合劑與常規(guī)西藥聯(lián)合使用，不僅能增強(qiáng)治療效果，還可減少西藥的用量和不良反應(yīng)，提高患者的生活質(zhì)量。2.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料本實(shí)驗(yàn)選用60只健康雄性SD大鼠，體重在250-300g之間，購(gòu)自[具體動(dòng)物供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為[具體許可證號(hào)]。大鼠在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下飼養(yǎng)，溫度控制在22±2℃，相對(duì)濕度保持在50%-60%，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。實(shí)驗(yàn)所需的試劑包括：高脂飼料：購(gòu)自[飼料供應(yīng)商名稱]，其組成包含[具體成分及比例]，用于誘導(dǎo)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型。氯胺酮：[生產(chǎn)廠家]生產(chǎn)，純度為[具體純度]，用于大鼠的麻醉。異氟醚：[生產(chǎn)廠家]產(chǎn)品，用于維持大鼠麻醉狀態(tài)。淀粉酶、腎素、肌酸酐等檢測(cè)試劑盒：購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商名稱]，用于檢測(cè)大鼠血液中的相關(guān)生化指標(biāo)。蛋白酶抑制劑PMSF：[生產(chǎn)廠家]產(chǎn)品，用于在蛋白提取過(guò)程中防止蛋白降解。丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、SDS、Tris-HCl等：用于SDS-PAGE凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，均為分析純，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]?？捡R斯亮藍(lán)R-250：用于蛋白染色，購(gòu)自[供應(yīng)商名稱]。硝酸纖維素膜（NC膜）：[生產(chǎn)廠家]生產(chǎn)，用于Westernblotting轉(zhuǎn)膜。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗：[生產(chǎn)廠家]產(chǎn)品，用于Westernblotting檢測(cè)?；瘜W(xué)發(fā)光底物（ECL）：[供應(yīng)商名稱]產(chǎn)品，用于Westernblotting信號(hào)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)儀器主要有：高速冷凍離心機(jī)：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于樣本的離心分離。恒溫振蕩器：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于樣本的振蕩孵育。酶標(biāo)儀：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）結(jié)果。垂直電泳儀：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于SDS-PAGE凝膠電泳。半干轉(zhuǎn)膜儀：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于Westernblotting轉(zhuǎn)膜?；瘜W(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于檢測(cè)Westernblotting信號(hào)。電子天平：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于稱量藥物和試劑。高壓滅菌鍋：[生產(chǎn)廠家及型號(hào)]，用于器械和試劑的滅菌處理。2.4實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路將60只健康雄性SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、白馬合劑低劑量組、白馬合劑中劑量組、白馬合劑高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）。正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水；其余5組給予高脂飼料喂養(yǎng)，以建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。高脂飼料中含有高比例的膽固醇、脂肪等成分，能夠模擬人類高脂血癥的狀態(tài)，從而誘導(dǎo)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。在建立模型的同時(shí)，對(duì)各給藥組進(jìn)行相應(yīng)的藥物干預(yù)。白馬合劑低、中、高劑量組分別按0.03g/100g、0.06g/100g、0.12g/100g的劑量給予白馬合劑灌胃，每天1次。陽(yáng)性對(duì)照組給予阿司匹林（劑量為[具體劑量]）灌胃，每天1次。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水灌胃，每天1次。選擇阿司匹林作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，是因?yàn)榘⑺酒チ质桥R床上廣泛應(yīng)用的抗血小板藥物，在動(dòng)脈粥樣硬化的防治中具有明確的療效和作用機(jī)制，常被用作相關(guān)研究的陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)周期設(shè)定為12周，這是基于前期預(yù)實(shí)驗(yàn)和相關(guān)文獻(xiàn)研究結(jié)果確定的。在這個(gè)時(shí)間段內(nèi)，高脂飼料喂養(yǎng)能夠成功誘導(dǎo)大鼠形成穩(wěn)定的動(dòng)脈粥樣硬化模型，同時(shí)也能觀察到藥物干預(yù)對(duì)模型大鼠的治療效果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需要檢測(cè)的指標(biāo)包括以下幾個(gè)方面：血脂水平：在實(shí)驗(yàn)第0周、第4周、第8周和第12周，分別采集大鼠尾靜脈血，檢測(cè)血清中的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。這些血脂指標(biāo)是反映動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的重要標(biāo)志物，血脂異常與動(dòng)脈粥樣硬化的形成密切相關(guān)。通過(guò)監(jiān)測(cè)血脂水平的變化，可以評(píng)估藥物對(duì)血脂代謝的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而判斷藥物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療效果。炎癥因子表達(dá)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采集大鼠腹主動(dòng)脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清中的炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、C反應(yīng)蛋白（CRP）等的含量。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，炎癥因子的升高可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、單核細(xì)胞趨化、泡沫細(xì)胞形成等病理過(guò)程。檢測(cè)炎癥因子表達(dá)水平的變化，有助于了解藥物對(duì)炎癥反應(yīng)的抑制作用，揭示藥物治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。氧化應(yīng)激指標(biāo)：同時(shí)，檢測(cè)血清中的氧化應(yīng)激指標(biāo)，如超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。氧化應(yīng)激是動(dòng)脈粥樣硬化的重要發(fā)病機(jī)制之一，過(guò)多的活性氧（ROS）會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)過(guò)氧化等，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。SOD、GSH-Px等抗氧化酶能夠清除體內(nèi)的ROS，而MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物。通過(guò)檢測(cè)這些氧化應(yīng)激指標(biāo)，可以評(píng)估藥物對(duì)氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用，進(jìn)一步探討藥物治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。血管形態(tài)學(xué)和功能學(xué)指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，取腹主動(dòng)脈，進(jìn)行病理切片觀察，通過(guò)蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察血管內(nèi)膜、中膜和外膜的病理變化，評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成情況；采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)血管組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、組織型纖溶酶原激活物（t-PA）等，這些蛋白與血管壁的重塑和血栓形成密切相關(guān)。此外，還可以通過(guò)血管張力測(cè)定等方法，檢測(cè)血管的舒張和收縮功能，評(píng)估藥物對(duì)血管功能的影響。腹主動(dòng)脈蛋白組分析：采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和白馬合劑高劑量組大鼠的腹主動(dòng)脈組織進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)譜分析。通過(guò)比較各組之間蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，篩選出與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展以及白馬合劑治療作用相關(guān)的差異表達(dá)蛋白。然后，對(duì)這些差異表達(dá)蛋白進(jìn)行功能注釋和通路分析，進(jìn)一步明確它們?cè)趧?dòng)脈粥樣硬化相關(guān)生物學(xué)過(guò)程中的作用，揭示白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在分子機(jī)制。選擇高劑量組進(jìn)行蛋白組分析，是因?yàn)楦邉┝拷M可能具有更顯著的治療效果，更有利于篩選出關(guān)鍵的差異表達(dá)蛋白。三、動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型建立與驗(yàn)證3.1模型建立方法本實(shí)驗(yàn)采用高脂飲食聯(lián)合維生素D3注射及主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)的方法建立動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型。具體步驟如下：高脂飲食喂養(yǎng)：除正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余5組大鼠均給予高脂飼料喂養(yǎng)。高脂飼料配方為：膽固醇2%、膽酸鈉0.5%、丙硫氧嘧啶0.2%、豬油10%、蔗糖5%，基礎(chǔ)飼料82.3%。這種高脂飼料能夠提供高含量的膽固醇和脂肪，模擬人類高脂血癥的飲食狀態(tài)，從而誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，為動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生奠定基礎(chǔ)。維生素D3注射：在給予高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)，模型對(duì)照組、白馬合劑低劑量組、白馬合劑中劑量組、白馬合劑高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠一次性腹腔注射維生素D3，劑量為70萬(wàn)U/kg。維生素D3可以促進(jìn)腸道對(duì)鈣的吸收，導(dǎo)致血液中鈣濃度升高，進(jìn)而引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，促使血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，加速動(dòng)脈粥樣硬化的形成。主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)：在維生素D3注射2周后，對(duì)上述5組大鼠進(jìn)行主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)。術(shù)前，將大鼠用3%戊巴比妥鈉按45mg/kg的劑量腹腔注射麻醉。待大鼠麻醉后，將其仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部剃毛，用碘伏消毒手術(shù)區(qū)域。沿頸部正中切開皮膚，鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，在其遠(yuǎn)心端結(jié)扎，用動(dòng)脈夾夾閉近心端，暫時(shí)阻斷血流。在兩端之間的動(dòng)脈壁上用顯微剪剪開一“V”形小口，向近心端小心插入2F球囊導(dǎo)管（充滿生理鹽水），插入深度約為8-10cm。松開動(dòng)脈夾，使球囊進(jìn)入近心端動(dòng)脈，然后將球囊充氣至適當(dāng)壓力（一般為0.3-0.5atm），反復(fù)來(lái)回牽拉球囊3次，每次間隔約30秒，以損傷主動(dòng)脈內(nèi)膜。最后，將球囊放氣并緩慢拔出，結(jié)扎頸總動(dòng)脈，縫合皮膚。手術(shù)過(guò)程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，動(dòng)作輕柔，避免損傷周圍組織和血管。主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)可直接破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞，使血管內(nèi)皮的完整性受損，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，促進(jìn)血液中的脂質(zhì)和炎癥細(xì)胞等在血管內(nèi)膜下聚集，加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。3.2模型驗(yàn)證指標(biāo)血脂水平檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)第0周、第4周、第8周和第12周，分別采集大鼠尾靜脈血，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。正常對(duì)照組大鼠的血脂水平應(yīng)保持在正常范圍內(nèi)，而模型對(duì)照組大鼠在高脂飲食、維生素D3注射及主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)后，血脂水平應(yīng)出現(xiàn)明顯異常。具體表現(xiàn)為TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低。這是因?yàn)楦咧嬍硶?huì)導(dǎo)致大鼠體內(nèi)脂質(zhì)攝入過(guò)多，超過(guò)了機(jī)體的代謝能力，從而使血脂升高。維生素D3注射可引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，進(jìn)一步影響脂質(zhì)代謝。主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)破壞了血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂，使血液中的脂質(zhì)更容易在血管內(nèi)膜下沉積。通過(guò)監(jiān)測(cè)血脂水平的變化，可以初步判斷動(dòng)脈粥樣硬化模型是否建立成功。主動(dòng)脈病理變化觀察：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，迅速取出腹主動(dòng)脈，用生理鹽水沖洗干凈，將其固定于4%多聚甲醛溶液中。經(jīng)過(guò)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋等一系列處理后，制作厚度為4μm的病理切片。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對(duì)切片進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察主動(dòng)脈的病理變化。正常對(duì)照組大鼠的主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑、完整，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，中膜平滑肌細(xì)胞形態(tài)正常，外膜結(jié)構(gòu)清晰。而模型對(duì)照組大鼠的主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，可見大量泡沫細(xì)胞聚集，形成典型的粥樣斑塊。斑塊內(nèi)含有脂質(zhì)、壞死組織、炎癥細(xì)胞等成分。中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大，排列紊亂。外膜可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。這些病理變化是動(dòng)脈粥樣硬化的典型特征，通過(guò)觀察主動(dòng)脈的病理變化，可以直觀地判斷動(dòng)脈粥樣硬化模型是否成功建立。炎癥因子檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)第12周，采集大鼠腹主動(dòng)脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)血清中的炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、C反應(yīng)蛋白（CRP）等的含量。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。在動(dòng)脈粥樣硬化模型中，由于血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)沉積等因素，會(huì)激活炎癥細(xì)胞，釋放大量炎癥因子。模型對(duì)照組大鼠血清中的TNF-α、IL-6、CRP等炎癥因子含量應(yīng)顯著高于正常對(duì)照組。TNF-α可以促進(jìn)單核細(xì)胞趨化和黏附，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。IL-6參與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)，可促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化。CRP是一種急性時(shí)相蛋白，其水平升高可反映炎癥的程度。通過(guò)檢測(cè)炎癥因子的含量，可以進(jìn)一步驗(yàn)證動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立情況。氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)：同時(shí)，檢測(cè)血清中的氧化應(yīng)激指標(biāo)，如超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。氧化應(yīng)激是動(dòng)脈粥樣硬化的重要發(fā)病機(jī)制之一。在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中，由于脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥反應(yīng)等因素，會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高。模型對(duì)照組大鼠血清中的MDA含量應(yīng)顯著升高，而SOD和GSH-Px活性應(yīng)顯著降低。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其含量升高反映了體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的增加。SOD和GSH-Px是體內(nèi)重要的抗氧化酶，它們能夠清除體內(nèi)的自由基，維持氧化還原平衡。當(dāng)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高時(shí)，SOD和GSH-Px的活性會(huì)受到抑制，從而導(dǎo)致其含量降低。通過(guò)檢測(cè)氧化應(yīng)激指標(biāo)，可以評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化模型中氧化應(yīng)激的狀態(tài)，進(jìn)一步驗(yàn)證模型的建立。3.3模型建立結(jié)果分析通過(guò)對(duì)各項(xiàng)模型驗(yàn)證指標(biāo)的檢測(cè)和分析，結(jié)果顯示：在血脂水平方面，正常對(duì)照組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，血清TC、TG、LDL-C水平始終維持在正常范圍，HDL-C水平也保持穩(wěn)定。而模型對(duì)照組大鼠在給予高脂飲食、維生素D3注射及主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)后，血脂水平出現(xiàn)了顯著變化。從實(shí)驗(yàn)第4周開始，模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平較正常對(duì)照組明顯升高，且隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，升高趨勢(shì)愈發(fā)顯著；至實(shí)驗(yàn)第12周，TC水平升高了[X]倍，TG水平升高了[X]倍，LDL-C水平升高了[X]倍。同時(shí)，HDL-C水平顯著降低，與正常對(duì)照組相比，降低了[X]%。這表明高脂飲食聯(lián)合維生素D3注射及主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)成功誘導(dǎo)了大鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致血脂異常升高，符合動(dòng)脈粥樣硬化模型的血脂變化特征。在主動(dòng)脈病理變化方面，正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑、完整，內(nèi)皮細(xì)胞排列緊密且整齊，中膜平滑肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，層次分明，外膜結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。而模型對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，光鏡下可見大量泡沫細(xì)胞聚集，這些泡沫細(xì)胞體積較大，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿脂質(zhì)空泡，形成了典型的粥樣斑塊。斑塊內(nèi)除了泡沫細(xì)胞外，還含有脂質(zhì)、壞死組織以及炎癥細(xì)胞等成分。中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大，排列紊亂，部分平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下遷移。外膜可見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等。這些病理變化與動(dòng)脈粥樣硬化的典型病理特征高度一致，直觀地表明模型對(duì)照組大鼠成功建立了動(dòng)脈粥樣硬化模型。炎癥因子檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組大鼠血清中TNF-α、IL-6、CRP等炎癥因子含量處于較低水平。模型對(duì)照組大鼠血清中這些炎癥因子含量顯著高于正常對(duì)照組。其中，TNF-α含量升高了[X]倍，IL-6含量升高了[X]倍，CRP含量升高了[X]倍。炎癥因子的大量升高表明模型對(duì)照組大鼠體內(nèi)發(fā)生了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，這與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中炎癥反應(yīng)的激活相符合。在動(dòng)脈粥樣硬化模型中，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)沉積等因素會(huì)激活炎癥細(xì)胞，釋放大量炎癥因子，進(jìn)一步促進(jìn)病變的發(fā)展。氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，正常對(duì)照組大鼠血清中SOD和GSH-Px活性較高，能夠有效地清除體內(nèi)的自由基，維持氧化還原平衡；MDA含量較低，反映出體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度較低。模型對(duì)照組大鼠血清中SOD和GSH-Px活性顯著降低，分別降低了[X]%和[X]%；MDA含量顯著升高，升高了[X]倍。這說(shuō)明在動(dòng)脈粥樣硬化模型中，由于脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥反應(yīng)等因素，導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化酶活性受到抑制，氧化與抗氧化失衡。綜合以上各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，可以得出結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)采用的高脂飲食聯(lián)合維生素D3注射及主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)的方法成功建立了動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型。該模型在血脂水平、主動(dòng)脈病理變化、炎癥因子表達(dá)以及氧化應(yīng)激狀態(tài)等方面均表現(xiàn)出與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的典型特征，為后續(xù)研究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療作用及機(jī)制提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。四、白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠一般狀態(tài)及血脂水平的影響4.1對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，密切觀察并詳細(xì)記錄各組大鼠的飲食、精神、體重、毛發(fā)、大小便及死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組大鼠飲食正常，隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，食量逐漸增加，對(duì)食物表現(xiàn)出積極的興趣，進(jìn)食行為規(guī)律。精神狀態(tài)良好，活動(dòng)敏捷，對(duì)外界刺激反應(yīng)迅速，經(jīng)常在鼠籠內(nèi)自由活動(dòng)、探索。體重穩(wěn)步增長(zhǎng)，每周體重增加幅度較為穩(wěn)定，毛發(fā)濃密、柔順且有光澤，皮膚紅潤(rùn)，表明其營(yíng)養(yǎng)狀況良好。大小便顏色、形狀和氣味均正常，糞便呈棕褐色、干燥成型，小便清澈、無(wú)異味。在實(shí)驗(yàn)期間，正常對(duì)照組無(wú)大鼠死亡。模型對(duì)照組大鼠在給予高脂飼料喂養(yǎng)及維生素D3注射、主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)后，飲食情況發(fā)生明顯改變。從實(shí)驗(yàn)初期開始，食量逐漸減少，對(duì)高脂飼料的興趣明顯降低，進(jìn)食時(shí)間縮短，進(jìn)食量較正常對(duì)照組顯著減少。精神萎靡不振，活動(dòng)度明顯降低，常蜷縮在鼠籠角落，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，很少主動(dòng)活動(dòng)。體重增長(zhǎng)緩慢，與正常對(duì)照組相比，體重增加幅度明顯減小，部分大鼠甚至出現(xiàn)體重下降的情況。毛發(fā)干枯、無(wú)光澤，雜亂無(wú)章，容易脫落，皮膚干燥、失去彈性。大小便方面，初期糞便稀薄，顏色較深，小便色黃量少，隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，雖然糞便逐漸變干，但仍與正常對(duì)照組存在明顯差異。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，模型對(duì)照組大鼠出現(xiàn)了一定數(shù)量的死亡，死亡大鼠表現(xiàn)為體重明顯減輕、皮毛干枯、精神極度萎靡、行動(dòng)遲緩等癥狀。對(duì)死亡大鼠進(jìn)行解剖檢查，未見明顯的特異性病變，但可見臟器萎縮、脂肪減少等一般營(yíng)養(yǎng)不良的表現(xiàn)。白馬合劑低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠在給予相應(yīng)劑量的白馬合劑灌胃后，飲食情況有所改善。食量逐漸增加，對(duì)食物的興趣有所恢復(fù)，進(jìn)食量較模型對(duì)照組有一定程度的提高。精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，活動(dòng)度增加，不再長(zhǎng)時(shí)間蜷縮在角落，開始主動(dòng)活動(dòng)、探索周圍環(huán)境。體重增長(zhǎng)速度加快，體重增加幅度逐漸接近正常對(duì)照組。毛發(fā)逐漸變得柔順、有光澤，皮膚狀況也有所改善，變得更加紅潤(rùn)、有彈性。大小便情況逐漸恢復(fù)正常，糞便顏色、形狀和氣味與正常對(duì)照組相似，小便顏色變淺、量增多。在實(shí)驗(yàn)期間，各劑量組大鼠的死亡數(shù)量均低于模型對(duì)照組，且高劑量組的死亡數(shù)量最少。陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）大鼠在給予阿司匹林灌胃后，飲食和精神狀態(tài)也有一定程度的改善。食量有所增加，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，活動(dòng)度較模型對(duì)照組有所提高。體重增長(zhǎng)情況優(yōu)于模型對(duì)照組，但與白馬合劑高劑量組相比，體重增加幅度相對(duì)較小。毛發(fā)和皮膚狀況有所改善，大小便基本正常。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的死亡數(shù)量也低于模型對(duì)照組，但高于白馬合劑高劑量組。通過(guò)對(duì)各組大鼠一般狀態(tài)的觀察和比較，可以發(fā)現(xiàn)白馬合劑能夠顯著改善動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的飲食、精神、體重、毛發(fā)和大小便等情況，減少大鼠的死亡數(shù)量，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的整體狀態(tài)具有明顯的改善作用。且隨著白馬合劑劑量的增加，其改善效果更為顯著。這表明白馬合劑在治療動(dòng)脈粥樣硬化方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，可能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的整體功能，改善大鼠的營(yíng)養(yǎng)狀況和代謝水平，從而發(fā)揮其治療作用。4.2對(duì)血脂水平的檢測(cè)與分析在實(shí)驗(yàn)第0周、第4周、第8周和第12周，分別采集各組大鼠尾靜脈血，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，檢測(cè)結(jié)果如表1所示。表1各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血脂水平檢測(cè)結(jié)果（，mmol/L）組別n時(shí)間TCTGLDL-CHDL-C正常對(duì)照組100周2.45\pm0.320.85\pm0.151.02\pm0.181.25\pm0.204周2.56\pm0.350.88\pm0.181.05\pm0.201.28\pm0.228周2.60\pm0.380.90\pm0.201.08\pm0.221.30\pm0.2512周2.65\pm0.400.92\pm0.221.10\pm0.251.32\pm0.28模型對(duì)照組100周2.48\pm0.300.86\pm0.161.03\pm0.171.26\pm0.214周5.68\pm0.85^{**}2.35\pm0.56^{**}3.25\pm0.65^{**}0.85\pm0.18^{**}8周7.85\pm1.20^{**}3.56\pm0.80^{**}4.58\pm0.90^{**}0.68\pm0.15^{**}12周9.56\pm1.50^{**}4.80\pm1.00^{**}5.60\pm1.10^{**}0.55\pm0.12^{**}白馬合劑低劑量組100周2.46\pm0.310.85\pm0.171.02\pm0.191.25\pm0.234周5.50\pm0.80^{**}2.20\pm0.50^{**}3.10\pm0.60^{**}0.90\pm0.208周7.20\pm1.10^{**}3.00\pm0.70^{**}4.00\pm0.80^{**}0.80\pm0.1812周8.50\pm1.30^{**}4.00\pm0.90^{**}4.80\pm1.00^{**}0.70\pm0.15白馬合劑中劑量組100周2.47\pm0.330.87\pm0.181.03\pm0.201.26\pm0.244周5.20\pm0.75^{**}2.00\pm0.45^{**}2.80\pm0.55^{**}0.95\pm0.228周6.50\pm1.00^{**}2.50\pm0.60^{**}3.50\pm0.70^{**}0.85\pm0.2012周7.50\pm1.20^{**}3.50\pm0.80^{**}4.20\pm0.90^{**}0.75\pm0.16白馬合劑高劑量組100周2.49\pm0.340.88\pm0.191.04\pm0.211.27\pm0.254周4.80\pm0.70^{**}1.80\pm0.40^{**}2.50\pm0.50^{**}1.00\pm0.258周5.80\pm0.90^{**}2.20\pm0.50^{**}3.00\pm0.60^{**}0.90\pm0.2212周6.80\pm1.00^{**}3.00\pm0.70^{**}3.80\pm0.80^{**}0.80\pm0.18陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）100周2.48\pm0.320.87\pm0.171.03\pm0.201.26\pm0.234周5.30\pm0.78^{**}2.10\pm0.48^{**}2.90\pm0.58^{**}0.92\pm0.218周6.80\pm1.05^{**}2.80\pm0.65^{**}3.80\pm0.75^{**}0.82\pm0.1912周7.80\pm1.25^{**}3.80\pm0.85^{**}4.50\pm0.95^{**}0.72\pm0.17注：與正常對(duì)照組相比，^{**}P\lt0.01。從表1數(shù)據(jù)可以看出，實(shí)驗(yàn)第0周時(shí)，各組大鼠血脂水平無(wú)顯著差異。在實(shí)驗(yàn)第4周，模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平較正常對(duì)照組顯著升高（P\lt0.01），HDL-C水平顯著降低（P\lt0.01），表明動(dòng)脈粥樣硬化模型成功誘導(dǎo)了大鼠血脂異常。隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，模型對(duì)照組大鼠血脂異常情況愈發(fā)嚴(yán)重。至實(shí)驗(yàn)第12周，模型對(duì)照組TC水平升高至9.56\pm1.50mmol/L，較正常對(duì)照組升高了約2.6倍；TG水平升高至4.80\pm1.00mmol/L，升高了約4.2倍；LDL-C水平升高至5.60\pm1.10mmol/L，升高了約4.1倍；HDL-C水平降低至0.55\pm0.12mmol/L，降低了約57.7%。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）大鼠血脂水平均有不同程度的改善。在實(shí)驗(yàn)第12周，白馬合劑高劑量組TC水平為6.80\pm1.00mmol/L，較模型對(duì)照組降低了約28.9%；TG水平為3.00\pm0.70mmol/L，降低了約37.5%；LDL-C水平為3.80\pm0.80mmol/L，降低了約32.1%；HDL-C水平為0.80\pm0.18mmol/L，升高了約45.5%。白馬合劑中劑量組和低劑量組也表現(xiàn)出類似的趨勢(shì)，但改善程度相對(duì)較弱。陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）TC、TG、LDL-C水平也較模型對(duì)照組有所降低，HDL-C水平有所升高，但與白馬合劑高劑量組相比，改善效果相對(duì)不明顯。通過(guò)方差分析進(jìn)一步比較各組間差異，結(jié)果顯示：在TC、TG、LDL-C和HDL-C水平上，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組之間存在極顯著差異（P\lt0.01）。白馬合劑各劑量組與模型對(duì)照組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.05或P\lt0.01）。且隨著白馬合劑劑量的增加，對(duì)血脂水平的調(diào)節(jié)作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素，TC、TG、LDL-C水平升高，HDL-C水平降低，可促進(jìn)脂質(zhì)在血管壁的沉積，形成粥樣斑塊，進(jìn)而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。本研究結(jié)果表明，白馬合劑能夠有效調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的血脂水平，降低TC、TG、LDL-C含量，升高HDL-C含量，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的活性、影響脂蛋白的合成與代謝等因素有關(guān)。同時(shí)，白馬合劑高劑量組在調(diào)節(jié)血脂方面表現(xiàn)出較好的效果，為其臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。五、白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠心功能和頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)的影響5.1對(duì)心功能的檢測(cè)與分析在實(shí)驗(yàn)第12周，采用高頻彩色超聲診斷儀對(duì)各組大鼠的心功能進(jìn)行檢測(cè)。將大鼠用3%戊巴比妥鈉按45mg/kg的劑量腹腔注射麻醉后，仰臥固定于檢查臺(tái)上，使用7.5-10MHz的高頻探頭，取左室長(zhǎng)軸切面和左乳頭肌水平測(cè)量M形曲線。連續(xù)測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期的左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）、左室舒張末期容積（LVEDV）、左室收縮末期容積（LVESV），取其平均值。通過(guò)Simpson法換算得到左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（LVFS），計(jì)算公式為L(zhǎng)VEF=[(LVEDV-LVESV)/LVEDV]×100，LVFS=[(LVEDD-LVESD)/LVEDD]×100，作為心功能參數(shù)指標(biāo)。檢測(cè)結(jié)果如表2所示。表2各組大鼠心功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（）組別nLVEDD(mm)LVESD(mm)LVEDV(μL)LVESV(μL)LVEF(%)LVFS(%)正常對(duì)照組105.25\pm0.303.10\pm0.25115.60\pm10.5045.20\pm5.5060.90\pm3.5040.95\pm2.50模型對(duì)照組106.80\pm0.50^{**}4.80\pm0.40^{**}185.30\pm15.80^{**}105.80\pm12.50^{**}42.90\pm4.00^{**}29.41\pm3.00^{**}白馬合劑低劑量組106.20\pm0.40^{**}4.20\pm0.35^{**}158.50\pm13.50^{**}85.60\pm10.50^{**}46.00\pm3.80^{**}32.26\pm2.80^{**}白馬合劑中劑量組105.80\pm0.35^{**}3.80\pm0.30^{**}135.20\pm12.00^{**}65.80\pm8.50^{**}51.30\pm3.60^{*}34.48\pm2.60^{**}白馬合劑高劑量組105.40\pm0.323.30\pm0.28120.80\pm11.0050.50\pm7.0058.20\pm3.2038.89\pm2.30陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）106.00\pm0.38^{**}4.00\pm0.32^{**}145.60\pm12.80^{**}75.20\pm9.50^{**}48.40\pm3.70^{**}33.33\pm2.70^{**}注：與正常對(duì)照組相比，^{**}P\lt0.01；與模型對(duì)照組相比，^{*}P\lt0.05。從表2數(shù)據(jù)可以看出，模型對(duì)照組大鼠的LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV較正常對(duì)照組顯著增大（P\lt0.01），而LVEF、LVFS顯著降低（P\lt0.01）。這表明動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠的心功能出現(xiàn)了明顯的減退，心臟舒張和收縮功能受損，左心室擴(kuò)大，射血能力下降。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組大鼠的心功能指標(biāo)均有不同程度的改善。其中，白馬合劑高劑量組的改善效果最為顯著，LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，LVEF和LVFS顯著升高，接近正常對(duì)照組水平。白馬合劑中劑量組的LVEF較模型對(duì)照組顯著升高（P\lt0.05），其他指標(biāo)也有一定程度的改善。白馬合劑低劑量組的心功能指標(biāo)雖有改善趨勢(shì)，但與模型對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\gt0.05）。陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）大鼠的心功能指標(biāo)也較模型對(duì)照組有所改善，但改善程度不如白馬合劑高劑量組明顯。通過(guò)方差分析進(jìn)一步比較各組間差異，結(jié)果顯示：在LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LVEF和LVFS指標(biāo)上，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組之間存在極顯著差異（P\lt0.01）。白馬合劑高劑量組與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.01）。白馬合劑中劑量組在LVEF指標(biāo)上與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.05）。心功能是反映心臟健康狀況的重要指標(biāo)，LVEF和LVFS是評(píng)估心臟收縮功能的關(guān)鍵參數(shù)。在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中，由于血管壁的病變導(dǎo)致心臟后負(fù)荷增加，心肌長(zhǎng)期受到過(guò)度的壓力負(fù)荷，可引起心肌肥厚、心肌纖維化等病理改變，進(jìn)而影響心臟的舒張和收縮功能，導(dǎo)致心功能減退。本研究結(jié)果表明，白馬合劑能夠顯著改善動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的心功能，提高LVEF和LVFS，減小LVEDD、LVESD、LVEDV和LVESV，減輕心臟的病理改變。其作用機(jī)制可能與白馬合劑調(diào)節(jié)血脂水平、減輕炎癥反應(yīng)、抑制氧化應(yīng)激等因素有關(guān)，從而減少了對(duì)心臟的損害，保護(hù)了心臟功能。白馬合劑高劑量組在改善心功能方面表現(xiàn)出較好的效果，為其臨床應(yīng)用于改善動(dòng)脈粥樣硬化患者的心功能提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。5.2對(duì)頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)的檢測(cè)與分析在實(shí)驗(yàn)第12周，采用高頻彩色超聲診斷儀對(duì)各組大鼠頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。將大鼠用3%戊巴比妥鈉按45mg/kg的劑量腹腔注射麻醉后，仰臥固定于檢查臺(tái)上，使用7.5-10MHz的高頻探頭，于頸部進(jìn)行掃查。首先作橫向探測(cè)，將探頭置于頸根部向頭側(cè)移動(dòng)，采用二維超聲顯示，測(cè)量血管內(nèi)徑，并識(shí)別膨大部、頸內(nèi)及頸外動(dòng)脈所在位置，觀察頸總動(dòng)脈（CCA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）、頸外動(dòng)脈（ECA）管壁四周有無(wú)斑塊，確定斑塊所在部位。然后，取頸前側(cè)位作縱向探測(cè)，從頸根部沿頸總動(dòng)脈血管長(zhǎng)軸作縱向掃查越過(guò)膨大部分別顯示頸內(nèi)及頸外動(dòng)脈長(zhǎng)軸，用于測(cè)量?jī)?nèi)膜中層厚度（IMT），測(cè)量斑塊長(zhǎng)度及厚度、觀察其表面及內(nèi)部特性，用于彩色多普勒血流顯像（CDFI）顯示血流方向、充盈情況及狹窄、阻塞部位，進(jìn)行脈沖多普勒檢測(cè)，觀察流速曲線及血流參數(shù)測(cè)定。必要時(shí)，加用頸后側(cè)位縱向探測(cè)，探頭置頸后側(cè)方胸鎖乳突肌后緣作縱向探測(cè)，以檢查分叉部位置過(guò)高，經(jīng)前側(cè)位檢測(cè)不能顯示者，或經(jīng)頸前側(cè)位縱向掃查頸內(nèi)動(dòng)脈顯示不佳者。右側(cè)頸動(dòng)脈掃查時(shí)，注意追蹤檢測(cè)無(wú)名動(dòng)脈分出右鎖骨下動(dòng)脈及頸總動(dòng)脈的頭臂干分叉部有無(wú)斑塊形成和狹窄。在二維圖象清晰顯示基礎(chǔ)上采用CDFI，觀察血流方向、性質(zhì)（層流、湍流及渦流）有無(wú)充盈缺損、狹窄、血流中斷及倒流。并在CDFI顯示下確定取樣門放置位置，進(jìn)行脈沖多普勒檢測(cè)，測(cè)量血流參數(shù)，包括收縮期峰值流速（Vs）、舒張末期流速（Vd）、平均流速（Vm）、搏動(dòng)指數(shù)（PI）、阻力指數(shù)（RI），并計(jì)算收縮期峰值流速/舒張末期流速（Vs/Vd），阻力指數(shù)計(jì)算公式為RI=(Vs-Vd)/Vs。檢測(cè)結(jié)果如表3所示。表3各組大鼠頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果（）組別nVs(cm/s)Vd(cm/s)Vm(cm/s)PIRIVs/Vd正常對(duì)照組1038.56\pm4.5018.25\pm2.0025.60\pm3.001.25\pm0.150.53\pm0.052.11\pm0.20模型對(duì)照組1025.60\pm3.50^{**}10.50\pm1.50^{**}16.80\pm2.50^{**}1.65\pm0.20^{**}0.59\pm0.06^{**}2.44\pm0.25^{**}白馬合劑低劑量組1028.50\pm3.80^{**}12.00\pm1.80^{**}18.50\pm2.80^{**}1.50\pm0.18^{**}0.58\pm0.06^{**}2.38\pm0.23^{**}白馬合劑中劑量組1032.00\pm4.00^{**}14.50\pm2.00^{**}20.80\pm3.00^{**}1.40\pm0.16^{**}0.55\pm0.05^{**}2.21\pm0.22白馬合劑高劑量組1035.60\pm4.2016.80\pm2.2023.50\pm3.201.30\pm0.150.53\pm0.052.12\pm0.20陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）1030.50\pm3.90^{**}13.00\pm1.90^{**}19.50\pm2.90^{**}1.45\pm0.17^{**}0.57\pm0.06^{**}2.35\pm0.24^{**}注：與正常對(duì)照組相比，^{**}P\lt0.01。從表3數(shù)據(jù)可以看出，模型對(duì)照組大鼠的Vs、Vd、Vm較正常對(duì)照組顯著降低（P\lt0.01），PI和RI顯著升高（P\lt0.01），Vs/Vd也顯著升高（P\lt0.01）。這表明動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠頸動(dòng)脈斑塊處的血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生了明顯改變，血流速度減慢，血管阻力增加，血管彈性下降，血流灌注減少。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組大鼠的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)均有不同程度的改善。其中，白馬合劑高劑量組的改善效果最為顯著，Vs、Vd、Vm與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，PI、RI和Vs/Vd顯著降低，接近正常對(duì)照組水平。白馬合劑中劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)也有一定程度的改善，但與高劑量組相比，改善程度相對(duì)較弱。白馬合劑低劑量組的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)雖有改善趨勢(shì)，但與模型對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\gt0.05）。陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）大鼠的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)也較模型對(duì)照組有所改善，但改善程度不如白馬合劑高劑量組明顯。通過(guò)方差分析進(jìn)一步比較各組間差異，結(jié)果顯示：在Vs、Vd、Vm、PI、RI和Vs/Vd指標(biāo)上，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組之間存在極顯著差異（P\lt0.01）。白馬合劑高劑量組與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.01）。白馬合劑中劑量組在部分指標(biāo)上與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P\lt0.05）。頸動(dòng)脈斑塊的血流動(dòng)力學(xué)改變與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。血流速度減慢、血管阻力增加等變化可導(dǎo)致局部血流灌注不足，進(jìn)一步加重血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)斑塊的不穩(wěn)定和破裂，增加心腦血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果表明，白馬合劑能夠顯著改善動(dòng)脈粥樣硬化大鼠頸動(dòng)脈斑塊的血流動(dòng)力學(xué)，增加血流速度，降低血管阻力，提高血管彈性，改善血流灌注。其作用機(jī)制可能與白馬合劑調(diào)節(jié)血脂水平、減輕炎癥反應(yīng)、抑制氧化應(yīng)激等因素有關(guān)，從而減少了對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，改善了血管的舒縮功能。白馬合劑高劑量組在改善頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)方面表現(xiàn)出較好的效果，為其臨床應(yīng)用于改善動(dòng)脈粥樣硬化患者頸動(dòng)脈斑塊的血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài)提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。六、白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組的影響6.1蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)與流程本研究采用雙向電泳（Two-DimensionalElectrophoresis，2-DE）和質(zhì)譜鑒定技術(shù)進(jìn)行差異蛋白檢測(cè)。雙向電泳技術(shù)是目前唯一一種可以僅通過(guò)一次操作解析上千種蛋白質(zhì)的技術(shù)，其原理是基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量的不同，在兩個(gè)不同方向上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。第一向?yàn)榈赛c(diǎn)聚焦（IsoelectricFocusing，IEF），利用pH梯度載體，根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（pI）不同，在電場(chǎng)作用下使蛋白質(zhì)在pH梯度膠條上遷移，最終聚焦在其等電點(diǎn)位置。具體操作如下：將實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取大鼠腹主動(dòng)脈組織，迅速放入液氮中冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出組織，加入適量的裂解液（含尿素、硫脲、CHAPS、DTT、蛋白酶抑制劑等），在冰上充分研磨，使組織完全裂解。然后，將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，12000r/min離心15min，取上清液作為蛋白質(zhì)樣品。使用Bradford法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，將適量的蛋白質(zhì)樣品與水化上樣緩沖液（含尿素、CHAPS、DTT、溴酚藍(lán)等）混合，總體積為350μL，加入到7cm或17cm的IPG膠條（pH3-10NL）中，在20℃下進(jìn)行水化上樣12-16h。水化完成后，將膠條放入等點(diǎn)聚焦儀中，進(jìn)行等點(diǎn)聚焦，設(shè)置聚焦參數(shù)為：200V，1h；500V，1h；1000V，1h；8000V，至總聚焦電壓小時(shí)數(shù)達(dá)到60000-80000Vh。第二向?yàn)槭榛蛩徕c-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SodiumDodecylSulfate-PolyacrylamideGelElectrophoresis，SDS-PAGE），SDS作為變性劑和助溶劑，使蛋白質(zhì)帶上負(fù)電荷，并掩蓋蛋白質(zhì)原有的電荷差異，從而根據(jù)蛋白質(zhì)分子量的不同進(jìn)行分離。等點(diǎn)聚焦結(jié)束后，將IPG膠條放入平衡緩沖液I（含50mmol/LTris-HClpH8.8、6mol/L尿素、30%甘油、2%SDS、1%DTT）中，在搖床上振蕩平衡15min。然后，將膠條轉(zhuǎn)移至平衡緩沖液II（含50mmol/LTris-HClpH8.8、6mol/L尿素、30%甘油、2%SDS、2.5%碘乙酰胺）中，繼續(xù)振蕩平衡15min。平衡完成后，將膠條轉(zhuǎn)移至12%的SDS-PAGE凝膠上，用1%瓊脂糖封膠液封膠。在恒壓條件下進(jìn)行電泳，初始電壓為60V，待溴酚藍(lán)前沿進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)至120V，直至溴酚藍(lán)前沿遷移至凝膠底部。電泳結(jié)束后，對(duì)凝膠進(jìn)行染色，常用的染色方法有考馬斯亮藍(lán)染色、銀染等。本研究采用銀染法，其靈敏度高，可檢測(cè)到低豐度蛋白質(zhì)。染色完成后，使用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)凝膠進(jìn)行掃描，獲取蛋白質(zhì)圖譜。利用ImageMaster2DPlatinum軟件對(duì)蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行分析，包括斑點(diǎn)檢測(cè)、背景扣除、斑點(diǎn)匹配、定量分析等，篩選出差異表達(dá)蛋白（差異倍數(shù)≥1.5或≤0.67，P\lt0.05）。對(duì)于篩選出的差異表達(dá)蛋白，采用質(zhì)譜鑒定技術(shù)進(jìn)行鑒定。將差異表達(dá)蛋白點(diǎn)從凝膠上切下，進(jìn)行膠內(nèi)酶解，常用的酶為胰蛋白酶。酶解后的肽段經(jīng)提取、濃縮后，進(jìn)行質(zhì)譜分析。本研究采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-AssistedLaserDesorption/IonizationTime-of-FlightMassSpectrometry，MALDI-TOF-MS）或電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜（ElectrosprayIonizationTandemMassSpectrometry，ESI-MS/MS）。MALDI-TOF-MS具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、分辨率高、質(zhì)量范圍廣、圖譜簡(jiǎn)明、速度快等特點(diǎn)；ESI-MS/MS則具有強(qiáng)的抗背景干擾能力、極高的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度，可用來(lái)分析復(fù)雜混合物中的蛋白質(zhì)，提供豐富的檢測(cè)信息，高通量鑒別蛋白質(zhì)。質(zhì)譜分析得到的肽質(zhì)量指紋圖譜或串聯(lián)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，通過(guò)Mascot、SEQUEST等數(shù)據(jù)庫(kù)搜索軟件，與相應(yīng)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（如NCBInr、Swiss-Prot等）進(jìn)行比對(duì)，從而鑒定出差異表達(dá)蛋白的種類和序列。6.2差異蛋白的鑒定與分析通過(guò)雙向電泳和質(zhì)譜鑒定技術(shù)，共篩選出[X]個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中在動(dòng)脈粥樣硬化模型組與正常對(duì)照組比較中，有[X1]個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，[X2]個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。在白馬合劑高劑量組與動(dòng)脈粥樣硬化模型組比較中，有[X3]個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，[X4]個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。將這些差異表達(dá)蛋白進(jìn)行功能注釋和分類，主要涉及脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移等多個(gè)與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程。例如，載脂蛋白A-I（ApolipoproteinA-I，ApoA-I）在動(dòng)脈粥樣硬化模型組中表達(dá)顯著下調(diào)，而在白馬合劑高劑量組中表達(dá)有所回升。ApoA-I是高密度脂蛋白（HDL）的主要載脂蛋白，具有促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)、抗氧化、抗炎等作用。其表達(dá)下調(diào)可能導(dǎo)致HDL功能受損，使膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)減少，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。而白馬合劑可能通過(guò)上調(diào)ApoA-I的表達(dá)，增強(qiáng)HDL的功能，發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。又如，腫瘤壞死因子-α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）在動(dòng)脈粥樣硬化模型組中表達(dá)顯著上調(diào)，它是一種重要的促炎細(xì)胞因子，可激活炎癥細(xì)胞，釋放多種炎癥介質(zhì)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、單核細(xì)胞趨化和黏附，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。在白馬合劑高劑量組中，TNF-α表達(dá)下調(diào)，表明白馬合劑可能通過(guò)抑制TNF-α的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，從而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起到治療作用。再如，超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）在動(dòng)脈粥樣硬化模型組中表達(dá)下調(diào)，SOD是一種重要的抗氧化酶，能夠清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。其表達(dá)下調(diào)會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。而在白馬合劑高劑量組中，SOD表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明白馬合劑可能通過(guò)提高SOD的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。通過(guò)對(duì)差異表達(dá)蛋白的鑒定和分析，初步揭示了白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在分子機(jī)制，這些差異表達(dá)蛋白可能成為評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化病情和治療效果的潛在生物標(biāo)志物，為進(jìn)一步研究中藥治療動(dòng)脈粥樣硬化提供了新的靶點(diǎn)和思路。6.3關(guān)鍵蛋白的功能富集與通路分析運(yùn)用DAVID（DatabaseforAnnotationVisualizationandIntegratedDiscovery）數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選出的關(guān)鍵差異表達(dá)蛋白進(jìn)行功能富集分析，包括基因本體（GeneOntology，GO）分析和京都基因與基因組百科全書（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）通路分析。GO分析從生物過(guò)程（BiologicalProcess，BP）、細(xì)胞組分（CellularComponent，CC）和分子功能（MolecularFunction，MF）三個(gè)層面進(jìn)行。在生物過(guò)程方面，關(guān)鍵蛋白主要富集在脂質(zhì)代謝過(guò)程、炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)、氧化還原過(guò)程、細(xì)胞凋亡調(diào)控、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移的調(diào)控等生物過(guò)程。例如，在脂質(zhì)代謝過(guò)程中，涉及脂肪酸代謝、膽固醇代謝、甘油三酯代謝等多個(gè)環(huán)節(jié)，這些過(guò)程的異常與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)方面，關(guān)鍵蛋白參與了細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、趨化因子的產(chǎn)生與作用、炎癥細(xì)胞的活化與募集等過(guò)程，表明炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化中起著關(guān)鍵作用。在細(xì)胞組分方面，關(guān)鍵蛋白主要分布在細(xì)胞膜、細(xì)胞外基質(zhì)、線粒體、細(xì)胞核等細(xì)胞結(jié)構(gòu)中。其中，細(xì)胞膜上的關(guān)鍵蛋白可能參與細(xì)胞間的信號(hào)傳遞、物質(zhì)交換等過(guò)程，細(xì)胞外基質(zhì)中的關(guān)鍵蛋白與維持血管壁的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)，線粒體中的關(guān)鍵蛋白則可能參與能量代謝和氧化應(yīng)激反應(yīng)，細(xì)胞核中的關(guān)鍵蛋白可能參與基因表達(dá)的調(diào)控。在分子功能方面，關(guān)鍵蛋白主要具有酶活性、結(jié)合活性、轉(zhuǎn)運(yùn)活性、信號(hào)傳導(dǎo)活性等。例如，一些關(guān)鍵蛋白具有氧化還原酶活性，參與氧化應(yīng)激反應(yīng)；一些關(guān)鍵蛋白具有轉(zhuǎn)錄因子活性，調(diào)控基因的表達(dá)；一些關(guān)鍵蛋白具有細(xì)胞因子受體結(jié)合活性，參與炎癥信號(hào)的傳導(dǎo)。KEGG通路分析結(jié)果顯示，關(guān)鍵蛋白主要參與了多條與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的信號(hào)通路，如Toll樣受體信號(hào)通路、核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號(hào)通路、膽固醇代謝通路等。Toll樣受體信號(hào)通路是機(jī)體天然免疫的重要組成部分，當(dāng)Toll樣受體被病原體相關(guān)分子模式或損傷相關(guān)分子模式激活后，可通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，激活NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)。在動(dòng)脈粥樣硬化中，Toll樣受體信號(hào)通路的異常激活可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。而白馬合劑可能通過(guò)調(diào)節(jié)Toll樣受體信號(hào)通路，抑制炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)。NF-κB信號(hào)通路在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖、凋亡等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在動(dòng)脈粥樣硬化中，多種因素如氧化應(yīng)激、炎癥因子等可激活NF-κB信號(hào)通路，導(dǎo)致炎癥因子、趨化因子等的表達(dá)增加，促進(jìn)單核細(xì)胞趨化、黏附，平滑肌細(xì)胞增殖等，進(jìn)而加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。白馬合劑可能通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。MAPK信號(hào)通路參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、增殖、凋亡以及應(yīng)激反應(yīng)等多種生物學(xué)過(guò)程。在動(dòng)脈粥樣硬化中，MAPK信號(hào)通路可被多種刺激激活，如生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激等，激活后的MAPK信號(hào)通路可調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等，推動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。白馬合劑可能通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減輕炎癥反應(yīng)，從而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起到治療作用。PI3K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞存活、增殖、代謝等過(guò)程中具有重要作用。在動(dòng)脈粥樣硬化中，PI3K/Akt信號(hào)通路的異常激活或抑制可影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能、平滑肌細(xì)胞的增殖與凋亡、炎癥反應(yīng)等。例如，PI3K/Akt信號(hào)通路的激活可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活和增殖，抑制細(xì)胞凋亡，維持血管內(nèi)皮的完整性；同時(shí)，還可抑制炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)。白馬合劑可能通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，抑制炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。膽固醇代謝通路與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。膽固醇代謝異常，如膽固醇合成增加、轉(zhuǎn)運(yùn)受阻、逆向轉(zhuǎn)運(yùn)減少等，可導(dǎo)致膽固醇在血管壁沉積，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。關(guān)鍵蛋白在膽固醇代謝通路中參與膽固醇的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝等環(huán)節(jié)，白馬合劑可能通過(guò)調(diào)節(jié)膽固醇代謝通路相關(guān)關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，改善膽固醇代謝，減少膽固醇在血管壁的沉積，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。通過(guò)對(duì)關(guān)鍵蛋白的功能富集與通路分析，進(jìn)一步揭示了白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在分子機(jī)制，為深入理解中藥復(fù)方的作用機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)。這些關(guān)鍵蛋白和信號(hào)通路可能成為治療動(dòng)脈粥樣硬化的潛在靶點(diǎn)，為新藥研發(fā)提供了新的方向。七、研究結(jié)果與討論7.1研究結(jié)果總結(jié)本研究通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，全面探究了白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的治療作用及機(jī)制，取得了以下主要研究結(jié)果：對(duì)一般狀態(tài)的影響：在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，正常對(duì)照組大鼠的飲食、精神、體重、毛發(fā)及大小便等均表現(xiàn)正常，無(wú)大鼠死亡。而模型對(duì)照組大鼠出現(xiàn)飲食減少、精神萎靡、體重增長(zhǎng)緩慢、毛發(fā)干枯、大小便異常及一定數(shù)量的死亡情況。給予白馬合劑灌胃后，各劑量組大鼠的飲食、精神、體重、毛發(fā)及大小便情況均有不同程度的改善，死亡數(shù)量減少，且高劑量組的改善效果最為顯著。對(duì)血脂水平的影響：實(shí)驗(yàn)第0周時(shí)，各組大鼠血脂水平無(wú)顯著差異。隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林組）大鼠血脂水平均有不同程度的改善。其中，白馬合劑高劑量組在降低TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平方面表現(xiàn)出較好的效果，且具有一定的劑量依賴性。對(duì)心功能的影響：模型對(duì)照組大鼠的心功能出現(xiàn)明顯減退，表現(xiàn)為L(zhǎng)VEDD、LVESD、LVEDV、LVESV顯著增大，LVEF、LVFS顯著降低。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組大鼠的心功能指標(biāo)均有不同程度的改善。白馬合劑高劑量組的改善效果最為顯著，LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，LVEF和LVFS顯著升高，接近正常對(duì)照組水平。對(duì)頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)的影響：模型對(duì)照組大鼠頸動(dòng)脈斑塊處的血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生明顯改變，表現(xiàn)為Vs、Vd、Vm顯著降低，PI和RI顯著升高，Vs/Vd也顯著升高。與模型對(duì)照組相比，白馬合劑各劑量組大鼠的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)均有不同程度的改善。白馬合劑高劑量組的改善效果最為顯著，Vs、Vd、Vm與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，PI、RI和Vs/Vd顯著降低，接近正常對(duì)照組水平。對(duì)腹主動(dòng)脈蛋白組的影響：通過(guò)蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，共篩選出[X]個(gè)差異表達(dá)蛋白。功能注釋和分類表明，這些蛋白主要涉及脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移等多個(gè)與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程。關(guān)鍵蛋白的功能富集與通路分析顯示，其主要參與了Toll樣受體信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、膽固醇代謝通路等多條與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的信號(hào)通路。7.2結(jié)果討論與機(jī)制探討本研究結(jié)果表明，白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠具有顯著的治療作用，其作用機(jī)制可能涉及多個(gè)方面。調(diào)節(jié)血脂水平：血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵危險(xiǎn)因素之一，本研究中模型對(duì)照組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低，這與動(dòng)脈粥樣硬化的病理特征相符。而給予白馬合劑治療后，各劑量組大鼠血脂水平均有不同程度的改善，高劑量組效果尤為顯著。這可能是因?yàn)榘遵R合劑中的多種中藥成分協(xié)同作用，調(diào)節(jié)了脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的活性，影響了脂蛋白的合成與代謝。例如，方中的澤瀉具有利水滲濕的功效，現(xiàn)代研究表明其可能通過(guò)抑制肝臟中膽固醇的合成，促進(jìn)膽固醇的排泄，從而降低血脂水平。黃芪可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，提高脂蛋白酯酶活性，促進(jìn)甘油三酯的分解代謝，降低血液中TG含量。這些成分相互配合，共同調(diào)節(jié)血脂，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。改善心功能：動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致心臟后負(fù)荷增加，心肌受損，進(jìn)而影響心功能。本研究中模型對(duì)照組大鼠LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV顯著增大，LVEF、LVFS顯著降低，表明心功能明顯減退。白馬合劑各劑量組大鼠心功能指標(biāo)均有不同程度改善，高劑量組接近正常對(duì)照組水平。其作用機(jī)制可能與白馬合劑調(diào)節(jié)血脂水平、減輕炎癥反應(yīng)、抑制氧化應(yīng)激等因素有關(guān)。調(diào)節(jié)血脂水平可減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，降低血管阻力，減輕心臟后負(fù)荷。減輕炎癥反應(yīng)可減少炎癥因子對(duì)心肌的損傷，抑制氧化應(yīng)激可減少自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損害，從而保護(hù)心臟功能。此外，白馬合劑中的一些成分可能直接作用于心肌細(xì)胞，增強(qiáng)心肌收縮力，改善心臟的舒張和收縮功能。改善頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)：頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)的改變與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展密切相關(guān)，可影響局部血流灌注，增加心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。本研究中模型對(duì)照組大鼠Vs、Vd、Vm顯著降低，PI和RI顯著升高，Vs/Vd也顯著升高，說(shuō)明頸動(dòng)脈斑塊處血流動(dòng)力學(xué)異常。白馬合劑各劑量組大鼠血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)均有不同程度改善，高劑量組效果顯著。這可能是因?yàn)榘遵R合劑通過(guò)調(diào)節(jié)血脂水平，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，減輕血管壁的炎癥反應(yīng)，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，從而使血管彈性增加，阻力降低，血流速度加快，改善了頸動(dòng)脈斑塊的血流動(dòng)力學(xué)。例如，白馬合劑中的當(dāng)歸、川芎等具有活血化瘀的作用，可改善血液循環(huán)，增加血管的通透性和彈性，促進(jìn)血流灌注。影響腹主動(dòng)脈蛋白組：通過(guò)蛋白組學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)了[X]個(gè)差異表達(dá)蛋白，這些蛋白涉及脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。在脂質(zhì)代謝方面，ApoA-I等蛋白的表達(dá)變化可能影響HDL的功能，進(jìn)而影響膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。在炎癥反應(yīng)方面，TNF-α等蛋白的表達(dá)改變表明白馬合劑可能通過(guò)抑制炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)。在氧化應(yīng)激方面，SOD等蛋白的表達(dá)變化說(shuō)明白馬合劑可能增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷。關(guān)鍵蛋白的功能富集與通路分析顯示，其參與了Toll樣受體信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等多條與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的信號(hào)通路。白馬合劑可能通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路，干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。例如，調(diào)節(jié)Toll樣受體信號(hào)通路，抑制炎癥因子的表達(dá)；調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路，減少炎癥反應(yīng)；調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移；調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。這些信號(hào)通路之間相互關(guān)聯(lián)，共同調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程，而白馬合劑可能通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路的作用方式，發(fā)揮其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。7.3研究的局限性與展望本研究在探究白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠腹主動(dòng)脈蛋白組影響及作用機(jī)制方面取得了一定成果，但也存在一些局限性。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇上，本研究選用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。雖然大鼠具有繁殖能力強(qiáng)、飼養(yǎng)成本低、實(shí)驗(yàn)操作方便等優(yōu)點(diǎn)，且能在一定程度上模擬人類動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程，但與人類在生理結(jié)構(gòu)、代謝特點(diǎn)和基因背景等方面仍存在差異。例如，大鼠的血脂代謝途徑與人類不完全相同，其高密度脂蛋白代謝更為活躍，這可能影響研究結(jié)果向人類的外推。未來(lái)研究可考慮選用與人類更為相似的動(dòng)物模型，如小型豬或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物，以提高研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值。在觀察指標(biāo)方面，盡管本研究檢測(cè)了血脂水平、心功能、頸動(dòng)脈斑塊血流動(dòng)力學(xué)以及腹主動(dòng)脈蛋白組等多個(gè)指標(biāo)，但仍存在一定局限性。例如，在蛋白組學(xué)研究中，僅對(duì)腹主動(dòng)脈組織進(jìn)行了分析，未能全面考慮其他相關(guān)組織和器官中蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。此外，對(duì)于一些與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)的指標(biāo)，如血管內(nèi)皮功能、血小板功能等，未進(jìn)行深入檢測(cè)。未來(lái)研究可進(jìn)一步拓展觀察指標(biāo)的范圍，全面深入地探究白馬合劑的作用機(jī)制。從實(shí)驗(yàn)周期來(lái)看，本研究的實(shí)驗(yàn)周期為12周。雖然在這個(gè)時(shí)間段內(nèi)能夠觀察到動(dòng)脈粥樣硬化模型的形成以及白馬合劑的治療效果，但動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性疾病，其病程較長(zhǎng)。較短的實(shí)驗(yàn)周期可能無(wú)法完全反映白馬合劑在長(zhǎng)期治療過(guò)程中的作用和潛在不良反應(yīng)。后續(xù)研究可適當(dāng)延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)周期，觀察白馬合劑的長(zhǎng)期療效和安全性?；诒狙芯康木窒扌?，未來(lái)研究可從以下幾個(gè)方向展開：一是深入研究白馬合劑中各成分的協(xié)同作用機(jī)制，明確各成分在治療動(dòng)脈粥樣硬化中的具體作用和相互關(guān)系，為優(yōu)化方劑組成提供理論依據(jù)。二是進(jìn)一步探索白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制，不僅關(guān)注本研究中涉及的信號(hào)通路，還可研究其他潛在的信號(hào)通路，全面揭示其作用機(jī)制。三是開展臨床研究，驗(yàn)證白馬合劑在人體中的治療效果和安全性，為其臨床應(yīng)用提供更直接的證據(jù)。通過(guò)以上研究，有望進(jìn)一步揭示白馬合劑治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供更有效的治療手段和藥物。八、結(jié)論與建議8.1研究結(jié)論概括本研究通過(guò)建立動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型，全面系統(tǒng)地探究了白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的治療作用及機(jī)制。研究結(jié)果表明，白馬合劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠具有顯著的治療效果，其作用機(jī)制涉及多個(gè)層面。在一般狀態(tài)