DB23-T2750-2020-水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法-黑龍江省

ICS13.060.01Z16DB23黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)DB23/T2750—2020水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB23/T2750—2020目??次前言......................................................................................................................................................................II引言.....................................................................................................................................................................III1范圍.................................................................................................................................................................12規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................1345678方法原理.........................................................................................................................................................1試劑和材料.....................................................................................................................................................1儀器設(shè)備.........................................................................................................................................................2測(cè)定.................................................................................................................................................................2結(jié)果計(jì)算與表示.............................................................................................................................................3方法的精密度.................................................................................................................................................3附錄A（資料性附錄）結(jié)果判定參考內(nèi)容...................................................................................................4IDB23/T2750—2020前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由黑龍江省生態(tài)環(huán)境廳提出并歸口。本文件參與起草單位：黑龍江省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。本文件主要起草人：王鵬杰、曹勝、邢延峰、孟慶慶、李博、胡麗娜、張蕊、楊宏坤、姜景陽(yáng)、關(guān)吉鑫、李經(jīng)緯、王國(guó)梁、李海智、蘆旭峰、蘇曉慧、于宗靈、柏廣宇、李慧。IIDB23/T2750—2020引??言為貫徹《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國(guó)水污染防治法》等法律法規(guī)，保護(hù)和改善生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，制定本文件。IIIDB23/T2750—2020水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法1范圍本文件規(guī)定了水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法的方法原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、測(cè)定、結(jié)果計(jì)算和表示及方法的精密度。本文件適用于工業(yè)廢水，納污水體及實(shí)驗(yàn)室條件下可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15441-1995水質(zhì)急性毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌法3方法原理水樣在一定的時(shí)間和條件下與發(fā)光細(xì)菌接觸后，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度變化與水樣中毒性組分總濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，通過(guò)生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣與發(fā)光細(xì)菌接觸一定時(shí)間后的發(fā)光抑制率來(lái)表征水樣的急性毒性水平。4.1所有的試劑除另有說(shuō)明外，均應(yīng)為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，蒸餾水或同等純度的水。4.2超純水，常溫保存。4.5復(fù)蘇稀釋液（0.85%的氯化鈉溶液）。4.6滲透壓液（17%的氯化鈉溶液）。4.7青?；【鶴67。注：菌株凍干粉封裝于透明小玻璃瓶中，于-18℃至-20℃下儲(chǔ)存。使用前，添加復(fù)蘇液使發(fā)光細(xì)菌恢復(fù)活性后用于1DB23/T2750—20205儀器設(shè)備生物發(fā)光光度計(jì)技術(shù)規(guī)格：可探測(cè)光譜范圍，320nm～1000nm；探測(cè)結(jié)果范圍，0～65535RLU；最快檢測(cè)時(shí)間，5min；相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度，0-200%；可進(jìn)行ATP測(cè)試；測(cè)試試管，規(guī)格為5ml的反應(yīng)試管和10ml的測(cè)試試管。6測(cè)定6.1測(cè)定條件6.1.1室溫室溫20-25℃，同一批樣品在測(cè)試過(guò)程中要求溫度波動(dòng)不超過(guò)±1℃。且所有測(cè)試器皿及試劑，溶液測(cè)前1h均置于控溫的測(cè)試室內(nèi)。6.1.2pH若需測(cè)定包括pH影響在內(nèi)的急性毒性，不應(yīng)調(diào)節(jié)水樣pH。若需測(cè)定排除pH影響在內(nèi)的急性毒性，需將水樣和復(fù)蘇液（氯化鈉0.85g/100ml）pH測(cè)前調(diào)至下值：主要含銅的水樣為4.5，主要含其他金屬水樣為5.4，主要含有機(jī)化合物水樣為7.0。6.2測(cè)定步驟6.2.1試管的排列6.2.2青海弧菌Q67凍干粉劑復(fù)蘇從冷凍環(huán)境（-18℃）中取出青?；【鶴67凍干粉（含量約為0.0015-0.0018g）小瓶，在常溫環(huán)境（25℃左右）下放置15min后，啟開(kāi)并輕敲小瓶，確保凍干細(xì)菌充分落在小瓶底部。移取0.5mL0.85%的復(fù)蘇液或3%的復(fù)蘇液至菌種中，搖勻，放置10min后可以使用。a）分別往三支反應(yīng)試管中加入2ml的標(biāo)準(zhǔn)品（稀釋液），2ml（1:19-稀釋液：樣品）的陰性質(zhì)控及2ml（1:19-稀釋液：樣品）的被測(cè)水樣；2DB23/T2750—20207結(jié)果計(jì)算與表示7.1計(jì)算結(jié)果計(jì)算結(jié)果以發(fā)光強(qiáng)度來(lái)表示。相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的表達(dá)式：樣品發(fā)光強(qiáng)度（s1）相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度RLI(%)標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)光強(qiáng)度（s1100%.............（1））7.2結(jié)果表示用氯化汞表達(dá)樣品毒性，見(jiàn)表1。表1氯化汞表達(dá)樣品毒性相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度（RLI）抑制率（IR%）等當(dāng)?shù)腍gCl2溶液濃度CHg（mg/L）毒性級(jí)別90%＜RLI≤110%80%≤RLI＜90%50%≤RLI＜80%30%≤RLI＜50%0%≤RLI＜30%RLI=0-10＜IR≤1010≤IR＜2020≤IR＜5050≤IR＜7070≤IR＜100IR=100CHg＜0.030.03≤CHg＜0.050.05≤CHg＜0.090.09≤CHg＜0.120.12≤