DB62T 4030-2019 馬鈴薯黃萎病抗性室內(nèi)鑒定技術(shù)規(guī)程

馬鈴薯黃萎病抗性室內(nèi)鑒定技術(shù)規(guī)程2019-09-30實(shí)施2019-09-30實(shí)施甘肅省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省糧食作物栽培標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：定西市植保植檢站、定西市種子管理站、甘肅省農(nóng)科院植物保護(hù)研究所、蘭州市農(nóng)業(yè)科技研究推廣中心、定西誠(chéng)宏馬鈴薯專業(yè)合作社。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：魏周全、陳愛(ài)昌、梁平、安建華、李錦龍、李繼平、孫興明、王文慧、莊漢、莫娟、祿剛強(qiáng)、石娟娟、席旭東、鄧成貴、賀舒紅。1凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。變褐干枯，但不卷曲，直到全部葉片提早枯死，不脫落。成株期褐色至褐色，縱切病薯維管束變褐色等癥狀為主的馬鈴4.1PL培養(yǎng)液馬鈴薯去皮切片，稱取200g,加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min,用紗布過(guò)濾，補(bǔ)加蒸餾水至馬鈴薯去皮切片，稱取200g,加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min,用紗布過(guò)濾4.31%的次氯酸鈉(NaClO)溶液培養(yǎng)皿、錐形瓶、紗布、酒精燈、塑料花盆(直徑21cm、高13cm)等。2從馬鈴薯黃萎病發(fā)病植株莖基部用常規(guī)組織分離法分離黃萎病病原物(參見(jiàn)附錄A)。確認(rèn)為大麗輪枝菌(Verticilliumdahliae)后采用單孢分離法進(jìn)行分離物純化，經(jīng)柯赫氏(koch)法則驗(yàn)證后，保存?zhèn)鋵⒈４娴鸟R鈴薯黃萎病菌置于20℃~25℃PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)3d活化后，接種于盛有PL培養(yǎng)液的錐形瓶中，置下20℃~25℃搖床上，以120rpm振蕩培養(yǎng)3d～4d。培養(yǎng)液經(jīng)兩層醫(yī)用紗布過(guò)濾即得孢將馬鈴薯黃萎病接種于PDA斜面培養(yǎng)基上，在25℃的恒溫箱中培養(yǎng)7d,置4℃~8℃冰箱內(nèi)保存；或在斜面上加一層滅菌礦物油(超過(guò)斜面頂部1cm)后置冰箱冷藏空或室溫下保存。將馬鈴薯黃萎病菌接種于液體石蠟管，置2℃~8℃冰箱中保存。田土(2:1:1)。經(jīng)高溫蒸汽滅菌(134℃,30min)。在日光溫室里育苗，室內(nèi)溫度白天為20℃~25℃,3馬鈴薯生育期3葉期～5葉期。7.5.2接種濃度接種孢子懸浮液的濃度為1×10孢子/mL。7.5.3接種方法接種采用浸根接種法。將幼苗連根輕輕拔起后抖落干凈根部泥土，然后將根全都浸于接種懸浮液內(nèi)10min～15min,將接種后的馬鈴薯苗定植于裝有育苗基質(zhì)的育苗缽中，每缽1株。7.6接種后管理接種后將植株置于鑒定室內(nèi)，每天光照14h,強(qiáng)度為700001x,保持植株正常生長(zhǎng)的土壤濕度，接種期間鑒定室溫度控制在20℃~25℃范圍內(nèi)。7.7病情調(diào)查7.7.1調(diào)查時(shí)間接種后8周調(diào)查病情，根據(jù)此期間感病的對(duì)照品種病級(jí)擴(kuò)展到感病級(jí)的時(shí)間作適當(dāng)調(diào)整。7.7.2病情級(jí)別劃分病情級(jí)別及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見(jiàn)表1。表1馬鈴薯黃萎病抗性室內(nèi)鑒定病情級(jí)別的劃分病情級(jí)別0級(jí)1級(jí)下部葉片變色及輕微的萎蔫2級(jí)3級(jí)4級(jí)7.7.3調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種株發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載單株病情級(jí)別，并計(jì)算每份鑒定材料的病情指數(shù)(DI)。病情指數(shù)(DI)按式(1)計(jì)算。 N——調(diào)查總植株數(shù)；S——最高病情級(jí)別的代表數(shù)值。4依據(jù)鑒定材料的病情指數(shù)(DI)平均值確定其抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。病情指數(shù)(DI)免疫(I)高抗(HR)抗病(R)中抗(MR)感病(S)高感(HS)當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度(DI>50),抗病對(duì)照材料與實(shí)際抗性程度相符，該批次抗黃5(資料性附錄)鑒定結(jié)果原始記載表馬鈴薯黃萎病抗性室內(nèi)鑒定結(jié)果記載表格式見(jiàn)圖A.1。編號(hào)品種/品系名稱重復(fù)區(qū)號(hào)病情級(jí)別平均病