DB62T 4068-2019 食用百合脫毒技術(shù)規(guī)程

2019-12-01實施2019-12-01實施甘肅省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語與定義 14食用百合脫毒種苗生產(chǎn)流程 15溶液的配制和保存 16室內(nèi)滅菌 37脫毒材料 38病毒檢測 49脫毒組培苗擴繁 410煉苗移栽與管理 4附錄A(規(guī)范性附錄)食用百合脫毒種苗生產(chǎn)流程 6附錄B(資料性附錄)培養(yǎng)基藥品名稱、用量及母液配制 7附錄C(資料性附錄)培養(yǎng)基配制 8附錄D(資料性附錄)基質(zhì)消毒方法 9本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出、歸口并監(jiān)督實施。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所制定。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：林玉紅、裴懷弟、崔文娟、石有太、陳軍、李淑潔。1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食用百合脫毒種苗生產(chǎn)的術(shù)語和定義、常用溶液配制、培養(yǎng)基制作與處理、消毒與接種、脫毒苗生產(chǎn)等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于莖尖培養(yǎng)和熱處理相結(jié)合方法生產(chǎn)食用百合脫毒種苗。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T603化學(xué)試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法NY/T1744切花百合脫毒種球3術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。利用生物技術(shù)手段，對感染病毒的植物組織進行莖尖剝離、熱處理、化學(xué)藥劑處理等有效脫毒方法，從而獲得的無病毒種苗材料。將離體無菌芽苗周期性的分株、分割、剪截等操作后轉(zhuǎn)接入新鮮增殖培養(yǎng)基中不斷倍增的培養(yǎng)過程。膨大培養(yǎng)expansionculture誘導(dǎo)百合試管苗鱗莖膨大的培養(yǎng)過程。4食用百合脫毒種苗生產(chǎn)流程見附錄A。5溶液的配制和保存5.1母液的配制5.1.1制備原則2鈣鹽母液配成50倍的貯備液。將稱量好的藥品不斷攪拌使之完全溶解，用三級蒸餾水定容至1000微量元素母液配成100倍的貯備液。不同藥品單獨溶解，待前一種藥品完全溶解后再加入后一種化鐵鹽母液配成100倍的貯備液。分別溶解FeSO?·7H?O和Na?-EDTA,不斷攪拌使之完全溶解，再將2 (萘乙酸)NAA用95%乙醇助溶，再用三級蒸餾水配制成0.5mg/L或者1mg/L的母液。配置好的母液貼基本培養(yǎng)基由化學(xué)藥品、蔗糖、瓊脂和水組成。所需蔗糖濃度為30g/L,瓊脂粉濃度是5g/L。配制5.2.2PH值的調(diào)整NaOH調(diào)節(jié)，>5.8用1M的HC1調(diào)節(jié)。3將裝入培養(yǎng)基的組培瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)，壓力0.11Mpa,溫度121℃,滅菌20min,滅菌后取出培鉀5g的配比液熏蒸。密封10h~12h后，開門窗通風(fēng)換氣。保持接種室清潔衛(wèi)生，在接種工作前進行紫外燈滅菌20min~30min,必要時用75%乙醇噴霧沉降灰開始工作前用紫外燈殺菌20min~30min,鼓風(fēng)20min以上。接種員先用肥皂洗手，接種前在緩沖間換好專用實驗服、拖鞋，戴上口罩，用75%乙醇噴霧消毒。接種器械(鑷子、解剖刀和剪刀等)置180℃烘箱消毒，然后用酒精燈火焰灼燒滅菌，超凈工作臺面、培養(yǎng)器皿外壁用75%的乙醇擦拭滅菌。60min,在超凈工作臺上用無菌水沖洗3遍～5遍后，用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%升汞溶液消毒8min~48病毒檢測脫毒組培苗(黃瓜花葉病毒(CMV)、百合無癥病毒(LSV)和百合斑駁病毒(LMoV))病毒檢測按由莖尖培養(yǎng)并經(jīng)過病毒檢測后的脫毒苗轉(zhuǎn)接在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)(配方見附錄C),培養(yǎng)25d～30d將增殖苗接種在1/2MS+NAA+蔗糖培養(yǎng)基上培養(yǎng)(配方見附錄C),50d～60d后煉苗、移栽。培養(yǎng)將煉苗后組培苗，從培養(yǎng)瓶中取出，洗去培養(yǎng)基，移栽入裝有基質(zhì)(珍珠巖：蛭=1:1:0.5)營養(yǎng)缽中，基質(zhì)消毒方法見附錄D,移栽后小水細噴，澆透水一次，濕度保持70%～80%。移栽后室溫保持在20℃~25℃,基質(zhì)溫度15℃~20℃。移栽后澆透水1次，根據(jù)天氣及基質(zhì)情況適時澆水，每隔7d～10d左右，澆灌營養(yǎng)液(用與MS濃度相同的大量元素配制，稀釋10倍進行葉面噴施)?；|(zhì)相對濕度保持在70%～80%,空氣濕度保持在50%~移栽后，架設(shè)防蟲網(wǎng)，及時防治病蟲草害。UOFOFGA6(規(guī)范性附錄)食用百合脫毒種苗生產(chǎn)流程食用百合鱗莖材料莖尖剝離莖尖組織培養(yǎng)養(yǎng)(實驗室)病毒檢測(實驗室)移栽技術(shù)(溫室設(shè)施)7g58(資料性附錄)培養(yǎng)基配制1//糖9(資料性附錄)基質(zhì)消毒方法D.1物理方法采用蒸汽消毒，即將多孔的管子平放并埋入基質(zhì)20cm深，基質(zhì)覆蓋塑料薄膜，然后從蒸汽鍋爐中放出200℃左右蒸汽，使基質(zhì)溫度上升70℃~90℃,持續(xù)保持0.5h~1h。然后再用清水淋洗。D.2化學(xué)制劑法D.2.140%甲醛：將40%的甲醛原液稀釋50倍，用噴壺將基質(zhì)均勻噴濕，所需藥液量一般為20L/m3~40L/m3基質(zhì)。之后用塑料薄膜覆蓋封閉24h～48h后揭膜，將基質(zhì)攤開，風(fēng)千2周或暴曬2d。D.2.2多菌靈：將50%多菌靈粉劑50g均勻拌入1m3的基質(zhì)中，用薄膜覆蓋3d~4d,揭膜1周后可用?；蛘哂?5%多菌靈可濕性粉劑500倍液澆