pcr考試試題多選題及答案

pcr考試試題多選題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.在PCR反應(yīng)中，哪種酶起到關(guān)鍵的合成新DNA鏈的作用（）A.限制性?xún)?nèi)切酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.RNA聚合酶答案：C3.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供3'-OH末端開(kāi)始DNA合成B.切割DNA模板C.連接DNA片段D.解開(kāi)雙鏈DNA答案：A4.以下哪個(gè)不是PCR反應(yīng)的基本步驟（）A.變性B.轉(zhuǎn)錄C.退火D.延伸答案：B5.通常情況下，PCR反應(yīng)中變性溫度大約是（）A.50-55℃B.72℃C.94-95℃D.100℃答案：C6.PCR反應(yīng)體系中，dNTPs的作用是（）A.提供能量B.提供合成DNA的原料C.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.調(diào)節(jié)pH值答案：B7.在進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，如果沒(méi)有模板DNA會(huì)出現(xiàn)（）A.正常擴(kuò)增產(chǎn)物B.非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物C.沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物D.無(wú)限量的產(chǎn)物答案：C8.以下哪種物質(zhì)可以提高PCR反應(yīng)的特異性（）A.增加引物濃度B.增加dNTPs濃度C.提高退火溫度D.提高延伸溫度答案：C9.PCR產(chǎn)物的分析方法不包括（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）D.測(cè)序答案：C10.如果PCR反應(yīng)中引物二聚體大量形成，可能的原因是（）A.引物濃度過(guò)低B.退火溫度過(guò)高C.引物自身互補(bǔ)性強(qiáng)D.模板DNA質(zhì)量過(guò)高答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系通常包含以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPsE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物設(shè)計(jì)B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶的活性E.循環(huán)次數(shù)答案：ABCDE3.在PCR技術(shù)中，以下哪些操作可以減少非特異性擴(kuò)增（）A.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)B.提高退火溫度C.減少引物量D.增加模板量E.使用高純度的模板答案：ABCE4.以下關(guān)于TaqDNA聚合酶的特性正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.催化DNA合成方向?yàn)?'到3'C.缺乏3'-5'外切酶活性D.可以在較低溫度下啟動(dòng)DNA合成E.對(duì)dNTPs有特異性答案：ABCE5.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用（）A.基因診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.古生物學(xué)研究D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)E.腫瘤研究答案：ABCDE6.以下哪些是PCR引物設(shè)計(jì)的原則（）A.長(zhǎng)度一般為18-25個(gè)核苷酸B.GC含量在40%-60%C.避免引物自身互補(bǔ)D.引物之間避免互補(bǔ)E.引物3'端避免為A答案：ABCDE7.在進(jìn)行PCR產(chǎn)物電泳分析時(shí)，影響電泳結(jié)果的因素有（）A.瓊脂糖濃度B.電泳電壓C.緩沖液種類(lèi)D.上樣量E.電泳時(shí)間答案：ABCDE8.以下關(guān)于PCR反應(yīng)中變性步驟的說(shuō)法正確的是（）A.使雙鏈DNA變?yōu)閱捂淏.為后續(xù)的退火和延伸做準(zhǔn)備C.一般變性溫度為94-95℃D.變性時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)E.變性不完全會(huì)影響擴(kuò)增結(jié)果答案：ABCDE9.對(duì)于PCR反應(yīng)中的退火步驟，以下描述正確的是（）A.引物與模板結(jié)合B.退火溫度主要取決于引物的長(zhǎng)度和GC含量C.退火溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合D.退火溫度過(guò)高會(huì)使引物與模板不能有效結(jié)合E.是一個(gè)溫度依賴(lài)性的過(guò)程答案：ABCDE10.PCR反應(yīng)中的延伸步驟（）A.由Taq酶催化B.按照模板鏈合成新的DNA鏈C.延伸溫度一般為72℃D.延伸時(shí)間取決于擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度E.延伸不完全會(huì)影響產(chǎn)物的量和質(zhì)量答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR可以無(wú)限擴(kuò)增DNA，不需要任何限制。（）答案：錯(cuò)誤2.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤3.引物的特異性對(duì)PCR結(jié)果沒(méi)有影響。（）答案：錯(cuò)誤4.在PCR反應(yīng)中，增加循環(huán)次數(shù)總是能提高產(chǎn)物量。（）答案：錯(cuò)誤5.只要有模板和引物，PCR反應(yīng)就一定能得到特異性產(chǎn)物。（）答案：錯(cuò)誤6.PCR反應(yīng)中，dNTPs的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤7.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA片段越大，遷移速度越快。（）答案：錯(cuò)誤8.Taq酶在PCR反應(yīng)中具有校對(duì)功能。（）答案：錯(cuò)誤9.退火溫度越高，引物與模板結(jié)合越牢固。（）答案：錯(cuò)誤10.PCR反應(yīng)中，緩沖液的pH值對(duì)反應(yīng)結(jié)果沒(méi)有影響。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR的基本原理。答案：PCR是一種體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)。它以DNA為模板，在Taq酶的作用下，通過(guò)高溫變性（使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湥?、低溫退火（引物與模板結(jié)合）、適溫延伸（合成新的DNA鏈）三個(gè)基本步驟不斷循環(huán)，使特定的DNA片段得到指數(shù)級(jí)的擴(kuò)增。2.請(qǐng)說(shuō)出至少3種PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)需要避免的情況。答案：需要避免引物自身互補(bǔ)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；避免引物之間互補(bǔ)形成二聚體；避免3'端為A；避免引物過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短；避免GC含量過(guò)高或過(guò)低。3.簡(jiǎn)述在PCR反應(yīng)中，模板DNA質(zhì)量對(duì)反應(yīng)結(jié)果的影響。答案：高質(zhì)量的模板DNA有利于特異性擴(kuò)增。如果模板含有雜質(zhì)、降解或量過(guò)多/過(guò)少都會(huì)影響結(jié)果。雜質(zhì)可能抑制Taq酶活性，降解的模板無(wú)法提供完整序列，模板量過(guò)多可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，量過(guò)少則可能擴(kuò)增失敗。4.說(shuō)明PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析的目的。答案：目的包括判斷是否有擴(kuò)增產(chǎn)物；估計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小；確定產(chǎn)物的純度；分析是否存在非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何提高PCR反應(yīng)的特異性。答案：可以?xún)?yōu)化引物設(shè)計(jì)，保證引物特異性；提高退火溫度，減少非特異性結(jié)合；減少引物量；使用高純度模板；優(yōu)化反應(yīng)體系中各成分的濃度等。2.分析PCR技術(shù)在基因診斷中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。答案：PCR在基因診斷中優(yōu)勢(shì)明顯，可特異性擴(kuò)增目的基因，靈敏度高，能檢測(cè)微量的DNA樣本，操作相對(duì)簡(jiǎn)便、快速，可用于檢測(cè)多種基因異常如突變、缺失等。3.闡述Taq酶在PCR反應(yīng)中的重要性及局限性。答