DB13T 499-2004 商品肉雞大腸桿菌病防治技術(shù)規(guī)程VIP

12規(guī)范性引用文件 (不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版木。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適NY5035無(wú)公害食品肉雞飼養(yǎng)獸藥使用準(zhǔn)則NY5036無(wú)公害食品肉雞飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T5038無(wú)公害食品肉雞飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法(第八屆全國(guó)人大常委會(huì)1997年7月3日頒布)中華人民共和國(guó)獸藥典(2000版)3術(shù)語(yǔ)和定義商品肉雞大腸桿菌病型，是日前危害商品肉雞業(yè)的一種重要的細(xì)菌性疾病之一。4.1診斷原則4.2流行特點(diǎn)4.2.1發(fā)病日齡各年齡商品肉雞均易感。20～45日齡的商品肉雞發(fā)病流行最普遍。臍炎型發(fā)病較早，出生后即可能發(fā)生。其他病型4~10日齡即可能發(fā)生，通常30日齡前后的肉仔雞發(fā)病較多。4.2.2發(fā)病率和病死率生條件、防治措施是否及時(shí)有效而差異較大。一般發(fā)病率為11%~69%,病死率3.8%~72.9%。4.2.3發(fā)病季節(jié)4.2.4.1消化道飼料及飲水被大腸桿菌污染，肉仔雞采食或飲用后通過消化道而感染。24.2.4.2呼吸道4.3臨床癥狀b)臍炎型：主要發(fā)生于孵化后期的胚胎及出殼后的雛雞。病死率為3%~10%,有時(shí)高達(dá)40%。c)腸炎型：主要表現(xiàn)腹瀉，類便呈黃綠色水樣，消瘦，脫水，最后衰竭死亡。d)氣囊炎型：多由敗血型轉(zhuǎn)變而米，發(fā)生氣囊炎與肺炎，3周齡以上肉仔雞多發(fā)。縮、凹陷，失明(多數(shù)為單側(cè)失明)。g)腦炎型：發(fā)病雞以嗜睡為主要特征。4.4.2臍炎型4.4.5關(guān)節(jié)炎型3病變關(guān)節(jié)(以跗關(guān)節(jié)多見)腫脹，滑液增多、混濁，關(guān)節(jié)囊內(nèi)有干酪樣物，有時(shí)出現(xiàn)關(guān)節(jié)粘連。4.5病原學(xué)診斷4.5.1病料的采集當(dāng)雞群發(fā)病后，最好將典型病例活體或整個(gè)4.5.2病原檢驗(yàn)程序病原檢驗(yàn)程序應(yīng)按圖1所示進(jìn)行。待檢病料待檢病料增菌培養(yǎng)血清學(xué)試驗(yàn)鑒別培養(yǎng)圖1大腸桿菌分離培養(yǎng)與鑒定程序框圖4.5.3病原分離培養(yǎng)培養(yǎng)基上或增菌肉湯中，37℃培養(yǎng)24h。用抗菌藥物治療過的病雞，在初步分離細(xì)菌時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行增菌培養(yǎng)，然后進(jìn)行鑒別培養(yǎng)。送檢尸體剖開后應(yīng)先進(jìn)行接種培養(yǎng)，然后觀察各內(nèi)臟器官的病理變化。4.5.4病原體形態(tài)學(xué)觀察4.5.4.1菌落特征大腸桿菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上形成的菌落邊緣整齊、表面光滑、小、無(wú)色半透明、露珠樣菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上菌落呈粉紅4.5.4.2細(xì)菌形態(tài)芽胞的短小桿菌，多單在或成雙而不形成長(zhǎng)鏈，多數(shù)有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。4.5.5生化試驗(yàn)鑒定4取分離物24h肉湯培養(yǎng)物腹腔接種18g~22g小鼠，每4.5.7血清學(xué)檢測(cè)5防治5.1.1每批雞出欄后應(yīng)對(duì)雞舍、用具進(jìn)行典》的規(guī)定。清理完畢到下次進(jìn)雞前空舍至少2周。5.2飼養(yǎng)方式5.3飲水管理5.4喂料管理自由采食或定期飼喂。不應(yīng)飼喂發(fā)霉變質(zhì)的飼料。上市前7d,飼料中應(yīng)不含任何藥物或藥物飼5.6藥物防治5(規(guī)范性附錄)A.1糖發(fā)酵試驗(yàn)A.1.1試驗(yàn)原理鑒別上具有一定的意義，是進(jìn)行大腸桿菌鑒A.1.2培養(yǎng)基蛋白胨10g,牛肉浸膏3g,氯化鈉5g,I.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1ml作指示劑，蒸餾水1000ml,調(diào)至pH7.4-7.6,分裝于事先裝有小倒管的小試管內(nèi)，于121℃高壓滅菌15min。供發(fā)酵試驗(yàn)常用的糖有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露務(wù)種糖的加量一般為0.5%～1%,但以1%為好。除萄萄糖、甘露醇在培養(yǎng)基高壓滅菌前加入外，乳糖、蔗糖和麥芽糖則需先配制成10%～20%水溶液，過濾除菌或115℃加熱15min滅菌后，以無(wú)菌A.1.3試驗(yàn)方法以無(wú)菌操作，用接種環(huán)取少量供試大腸桿菌純培養(yǎng)物接種于糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)，每天觀察并記錄結(jié)果，根據(jù)需要可培養(yǎng)觀察10d。A.1.4結(jié)果判定或產(chǎn)氣。大多數(shù)菌株在24h內(nèi)能分解乳糖、麥芽糖，半數(shù)菌株能發(fā)酵蔗糖。也可采用半固體瓊脂培養(yǎng)基，即在上述培養(yǎng)基內(nèi)按0.4%～0.6%加入瓊脂，省去小倒管，做穿刺接種。若分解糖、醇類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則培養(yǎng)基變?yōu)辄S色且沿穿刺線或管壁及管底處有微小氣泡形成。A.2甲基紅(MR)試驗(yàn)A.2.1試驗(yàn)原理細(xì)菌在葡萄糖代謝中生成丙酮酸，丙酮酸再被分解生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，使pH降至4.5或更低，甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。A.2.2培養(yǎng)基磷酸氫二鉀(K?HPO?)5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,蒸餾水1000ml。各成分溶解后調(diào)至pH7.2,過濾，分裝試管，121℃高壓滅菌15min備用。A.2.3指示劑甲基紅0.1g,95%酒精300ml,蒸餾水200mlA.2.4試驗(yàn)方法與結(jié)果判定在培養(yǎng)基中接種少量大腸桿菌培養(yǎng)物，于37℃培養(yǎng)2d~5d,然后于每5ml培養(yǎng)物中加入甲基紅指示劑5滴～6滴，立即觀察結(jié)果，呈鮮紅色的判為陽(yáng)性反應(yīng)，弱陽(yáng)性的為橘紅色，陰性的為黃色。若48h培養(yǎng)物為陰性的(可取部分培養(yǎng)液試驗(yàn)),則應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)4d~5d重試。A.3維-培(V-P)二氏試驗(yàn)A.3.1試驗(yàn)原理6A.3.2培養(yǎng)基A.3.3試劑A.3.3.1奧梅拉(O-Meara)氏法試劑肌酸0.3g,氫氧化鉀(KOH)40g,蒸餾水100m1。將KOII溶于蒸餾水中后加入肌酸。A.3.3.2貝克脫(Barrit)氏法試劑甲液為6%a-萘酚酒精溶液；乙液為40%KOH水溶液。A.3.4.1奧梅拉氏法取少量營(yíng)養(yǎng)瓊脂幼齡培養(yǎng)物接種，37℃培養(yǎng)48h,在每1ml培養(yǎng)物中加入相應(yīng)試劑1ml,充分混勻后置于室溫或37℃下4h觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性。A.3.4.2貝克脫氏法按A.3.4.1的方法接種并培養(yǎng)4d后，在每2.5ml培養(yǎng)物中加入相應(yīng)試劑甲液0.6ml,再加乙液0.2ml,充分混勻，陽(yáng)性反應(yīng)即刻或在5min內(nèi)呈現(xiàn)紅色，若無(wú)紅色出現(xiàn)，可靜置于室溫或37℃下2h內(nèi)觀察結(jié)果，仍不呈現(xiàn)紅色者判為陰性。大腸桿菌的維-培(V-P)二氏試驗(yàn)陰性。A.4靛基質(zhì)(吲哚，indole)試驗(yàn)A.4.1試驗(yàn)原理細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成丙酮酸、淀基質(zhì)(吲哚)、氨等，靛基質(zhì)與試劑中的對(duì)二甲基A.4.2培養(yǎng)基蛋白胨(或胰蛋白陳)20g,氯化鈉5g,蒸餾水1000ml。溶解后調(diào)至pll7.4,分裝小試管，121A.4.3試劑對(duì)二甲氨基苯甲醛1g,95%灑精95ml,純濃鹽酸20ml。A.4.3.2柯凡克(Kovac)氏試劑對(duì)二甲氨基苯甲醛5g,純戊醇75ml,純濃鹽酸25ml。A.4.4試驗(yàn)方法與結(jié)果判定取純培養(yǎng)物少量接種后置于37℃培養(yǎng)24h~48h(必要時(shí)可培養(yǎng)4d~5d)后，每2ml培養(yǎng)物中加入上述試劑中的任何一種試劑2滴~3滴，輕搖試管，呈紅色者為陽(yáng)性?；蛳燃由倭恳衙鸦蚨妆?，A.5.1試驗(yàn)原理A.5.2培養(yǎng)基7氯化鈉5g,硫酸鎂(MgS0?·7H?O)0.2g,磷酸二氫銨1g,磷酸二氫鉀1g,檸檬酸鈉2g,瓊脂15g,0.2%溴麝香草酚藍(lán)40ml,蒸餾水1000ml。將各成分(指示劑除外)加熱溶解后調(diào)至pH6.8,然后加入溴麝香草酚藍(lán)指示劑，混勻后分裝試管，121℃高壓滅菌15min,制成斜面?zhèn)溆谩.5.3試驗(yàn)方法及結(jié)果判定8B.1紙片擴(kuò)散法B.1.3菌液的準(zhǔn)備18h,取出作為原菌液。再用普通肉湯培養(yǎng)基或1%無(wú)菌蛋白胨水把原菌液作1:1000倍稀釋后備用。B.1.4操作步驟B.1.4.1涂菌B.1.4.2放置紙片B.1.5結(jié)果判定B.1.6注意事項(xiàng)B.2稀釋法B.2.1藥液的準(zhǔn)備B.2.2培養(yǎng)基準(zhǔn)備普通肉湯培養(yǎng)基，分裝成13