X年版中國(guó)藥典微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi)容

2010年版中國(guó)藥典

微生物檢驗(yàn)主要增修訂內(nèi)容1增修訂背景藥品微生物限度檢查、無菌檢查各論標(biāo)準(zhǔn)化的研究藥品微生物限度檢查用培養(yǎng)基靈敏度檢查方法的研究中國(guó)藥典與國(guó)外藥典細(xì)菌計(jì)數(shù)方法的比較離心集菌法標(biāo)準(zhǔn)化的研究貼膏劑微生物限度檢查法的研究大腸菌群檢查用培養(yǎng)基的比較白色念珠菌檢查法的研究防腐劑效力測(cè)定方法的研究藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證的方法研究2浙江所承擔(dān)的主要工作科研工作藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證的方法研究藥品微生物限度檢查、無菌檢查各論標(biāo)準(zhǔn)化的研究藥品微生物限度檢查用培養(yǎng)基靈敏度檢查方法的研究中國(guó)藥典與國(guó)外藥典細(xì)菌計(jì)數(shù)方法的比較大腸菌群檢查用培養(yǎng)基的比較附錄增修訂工作藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則3主要成果藥品微生物限度檢查和無菌檢查的各論標(biāo)準(zhǔn)化修訂了無菌檢查法增修訂了微生物限度檢查法修訂了一個(gè)指導(dǎo)原則－滅菌法新增了四個(gè)指導(dǎo)原則抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則4各論標(biāo)準(zhǔn)化微生物限度檢查各論富馬酸酮替芬滴鼻液、聚維酮碘溶液5各論標(biāo)準(zhǔn)化無菌檢查各論亞葉酸鈣注射液注射用泮托拉唑鈉復(fù)方庚酸炔諾酮注射液甲硝唑注射液注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉

6無菌檢查法前言部分培養(yǎng)基靈敏度檢查稀釋液、沖洗液等方法驗(yàn)證薄膜過濾法培養(yǎng)及觀察結(jié)果判斷表1、表2和表37前言部分規(guī)定了防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出規(guī)定了日常檢驗(yàn)還需要對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控對(duì)無菌檢查的人員資質(zhì)提出了要求8培養(yǎng)基刪除了硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基用于培養(yǎng)好氧菌、厭氧菌的規(guī)定刪除了改良馬丁培養(yǎng)基用于培養(yǎng)真菌的規(guī)定9靈敏度檢查修訂了黑曲霉的孢子懸液制備方法，規(guī)定應(yīng)使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋規(guī)定了稀釋后的工作用菌液的保存條件和保存期限10稀釋液、沖洗液等規(guī)定可根據(jù)供試品的特性，選用其他經(jīng)驗(yàn)證的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液11方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)菌種的選擇上，刪除了銅綠假單胞菌，增訂了大腸埃希菌明確規(guī)定了薄膜過濾法驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量用于過濾12薄膜過濾法增訂了抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜的規(guī)定對(duì)每片濾膜的總沖洗量進(jìn)行了規(guī)定，不得過1000ml修訂了無菌氣（噴）霧劑供試品的檢驗(yàn)方法，規(guī)定冰室的溫度應(yīng)至少為-20℃對(duì)裝有藥物的注射器供試品的檢驗(yàn)方法進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)定13培養(yǎng)及觀察對(duì)于培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長(zhǎng)的情況，刪除了可劃線接種于斜面培養(yǎng)基上的規(guī)定，同時(shí)刪除了可根據(jù)斜面是否有菌生長(zhǎng)而判斷的規(guī)定14結(jié)果判斷增訂了陽(yáng)性對(duì)照管和陰性對(duì)照管的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷的作用15表1、表2和表3表1修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍表2修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定液體制劑的最少檢驗(yàn)量修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍表3修訂了表格名稱，明確了該表格用于確定固體制劑的最少檢驗(yàn)量修訂了注釋項(xiàng)，對(duì)供試品容器裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基的情況，明確規(guī)定最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)加倍16微生物限度檢查法前言及檢驗(yàn)量供試液制備計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基適用性計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的操作方法控制菌檢查的培養(yǎng)基適用性控制菌檢查的方法驗(yàn)證控制菌檢查的內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)體系17前言及檢驗(yàn)量前言中修訂了控制菌檢查的溫度，規(guī)定與細(xì)菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)溫度相同，均為30～35℃前言中增訂了對(duì)于特殊品種可以最小包裝單位報(bào)告的規(guī)定檢驗(yàn)量中對(duì)要求進(jìn)行沙門菌檢查的供試品，其檢驗(yàn)量應(yīng)增加20g或20ml的規(guī)定18供試液制備增訂了貼劑供試品的制備方法修訂了離心沉淀法，刪除了高速離心的規(guī)定，并對(duì)該方法的使用范圍進(jìn)行了限定19計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基適用性該部分內(nèi)容均為新增規(guī)定了該內(nèi)容的應(yīng)用范圍采用標(biāo)準(zhǔn)菌種計(jì)數(shù)，回收率以及形態(tài)比較的判定方法標(biāo)準(zhǔn)菌種為：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；規(guī)定了稀釋后的工作菌液的保存條件和保存期限引入了對(duì)照培養(yǎng)基的概念判定的依據(jù)：回收率大于70％，且形態(tài)一致20計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的方法驗(yàn)證增訂了常見干擾物的中和劑或滅活方法的參考表格對(duì)采用多種方法仍無法得到滿意驗(yàn)證結(jié)果的情況，提供了兩種辦法允許使用更高稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，并以該稀釋級(jí)供試液作為最低稀釋級(jí)供試液進(jìn)行供試品檢驗(yàn)允許選擇回收情況最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢驗(yàn)21計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的操作方法平皿法刪除了應(yīng)取2～3個(gè)連續(xù)適宜稀釋級(jí)供試液進(jìn)行檢驗(yàn)的規(guī)定細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)為3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)為5天；規(guī)定必要時(shí)均可延長(zhǎng)至7天菌數(shù)報(bào)告規(guī)則進(jìn)行了修訂：計(jì)數(shù)不再設(shè)置下限；以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告供試品中所含的菌數(shù)薄膜過濾法濾膜直徑調(diào)整為約50mm，并規(guī)定若采用其它直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整總沖洗量規(guī)定不得超過1000ml22控制菌檢查的培養(yǎng)基適用性該部分內(nèi)容均為新增規(guī)定了該部分內(nèi)容的應(yīng)用范圍以及檢查的項(xiàng)目采用標(biāo)準(zhǔn)菌種比較的判定方法根據(jù)培養(yǎng)基的用途不同，分為增菌培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力、固體培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力、培養(yǎng)基的抑制能力、固體培養(yǎng)基的指示能力、液體培養(yǎng)基的指示能力等5種檢查方法在檢查中引入了涂布接種的概念23控制菌檢查的方法驗(yàn)證刪除了陰性菌對(duì)照組的概念24控制菌檢查的內(nèi)容所有的生化試驗(yàn)均修訂為鑒定試驗(yàn)大腸菌群的培養(yǎng)基進(jìn)行了修訂，現(xiàn)改用乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基梭菌的增菌培養(yǎng)基修訂為梭菌增菌培養(yǎng)基，刪除了庖肉培養(yǎng)基增訂了白色念珠菌檢查法，并增訂了與之相關(guān)的培養(yǎng)基25標(biāo)準(zhǔn)體系菌落計(jì)數(shù)單位從“個(gè)”修訂為“cfu”陰道、尿道給藥制劑增訂了白色念珠菌控制要求直腸給藥制劑刪除了大腸埃希菌的控制要求26滅菌法前言濕熱滅菌法過濾除菌法生物指示劑的制備27前言修訂了滅菌法的定義，強(qiáng)調(diào)滅菌法的作用是使被滅菌物品中殘存微生物的概率下降至某一預(yù)期水平，從而突出了滅菌不是絕對(duì)的這一理念。修訂了無菌保證水平的表述方式，強(qiáng)調(diào)其含義在于物品中活微生物的概率降低至某個(gè)可接受的水平。明確了對(duì)于最終滅菌物品而言，其微生物存活概率，即無菌保證水平不得高于百萬(wàn)分之一。在選擇確定滅菌工藝時(shí)，增訂了應(yīng)考慮滅菌后物品的穩(wěn)定性的規(guī)定。28濕熱滅菌法增訂了選擇濕熱滅菌條件時(shí)應(yīng)綜合考慮的因素，如滅菌物品的熱穩(wěn)定性、熱穿透力以及微生物污染程度等修訂了F0值的概念，突出了等效121℃標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間的含義規(guī)定當(dāng)選用F0值概念進(jìn)行滅菌程序控制時(shí)，除了對(duì)滅菌程序進(jìn)行驗(yàn)證外，還必須在生產(chǎn)過程中對(duì)微生物進(jìn)行監(jiān)控，證明其數(shù)量低于設(shè)定的限度對(duì)熱不穩(wěn)定物品，強(qiáng)調(diào)應(yīng)在生產(chǎn)全過程對(duì)產(chǎn)品中污染的微生物進(jìn)行連續(xù)監(jiān)控，并防止耐熱菌的污染。規(guī)定這一類產(chǎn)品的F0值一般不低于8min，刪除了“如產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性很差時(shí)，可允許濕熱滅菌的F0低于8”的規(guī)定。29過濾除菌法對(duì)過濾器孔徑的定義進(jìn)行了說明，強(qiáng)調(diào)孔徑與微生物的截留性能有關(guān)，而不是平均孔徑的分布系數(shù)根據(jù)濾器孔徑的定義，規(guī)定用于最終除菌的過濾器，必須選擇除菌級(jí)過濾器，并應(yīng)提供截留實(shí)驗(yàn)證明對(duì)過濾器的穩(wěn)定性以及與被過濾液體的相容性進(jìn)行了規(guī)定，明確過濾器使用者具有了解并評(píng)估這些性能的責(zé)任增訂了濾膜完整性測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)，指出該測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)來自于相關(guān)細(xì)菌截留實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)規(guī)定了過濾操作的生產(chǎn)環(huán)境－無菌環(huán)境，將原標(biāo)準(zhǔn)中的“建議”修訂為“應(yīng)”30生物指示劑的制備規(guī)定生物指示劑在制備完成后，應(yīng)測(cè)定D值和孢子總數(shù)。31藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則前言人員培養(yǎng)基菌種實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行設(shè)備文件實(shí)驗(yàn)記錄結(jié)果的判斷32前言規(guī)定了該指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)質(zhì)量控制指出制訂實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的必要性人員人員的專業(yè)背景人員培訓(xùn)應(yīng)覆蓋儀器設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室生物安全等應(yīng)通過內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗(yàn)證或使用標(biāo)準(zhǔn)菌株等方法評(píng)估檢驗(yàn)人員的能力33培養(yǎng)基培養(yǎng)基的制備應(yīng)按處方配制培養(yǎng)基，也可使用市售的脫水培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的水應(yīng)該是純化水培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。應(yīng)對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證，確保在一定裝載方式下的正常熱分布應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（25℃下測(cè)定）應(yīng)對(duì)分裝后的培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢查，并記錄批數(shù)量、有效期及無菌情況等信息34培養(yǎng)基的貯藏自配培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、配制日期等信息，商品化的成品培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、生產(chǎn)日期和失效期等信息。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快從滅菌器內(nèi)取出，瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)防止冷凍，容器應(yīng)密閉，防止水分流失；瓊脂平板宜臨用新配，如置冰箱保存，一般不超過一周，如需延長(zhǎng)，則應(yīng)對(duì)保存期進(jìn)行驗(yàn)證。固體培養(yǎng)基滅菌后只允許再融化一次，一般采用水浴加熱或流通蒸汽的方式，如使用微波爐，應(yīng)避免過度加熱和水分流失。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)置45～50℃的水浴中保溫，時(shí)間不得超過8小時(shí)。35培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制的項(xiàng)目有：pH值、適用性檢查和定期的穩(wěn)定性檢查當(dāng)培養(yǎng)基的配制和滅菌程序等均已驗(yàn)證，則同一批次的脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行一次用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，用于關(guān)鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基宜雙層包裝和終端滅菌，以防出現(xiàn)假陽(yáng)性36菌種菌種的來源：已認(rèn)可的國(guó)內(nèi)或國(guó)外菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株由標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)活得到的為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株；應(yīng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株進(jìn)行純度和特性確認(rèn)；建議采用凍干、液氮或超低溫保存的方法使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備工作菌株冷凍菌株解凍后，不得重新冷凍和再次使用工作菌株的傳代次數(shù)不得超過5代代的定義：活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立文件化的程序管理菌種（從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株）37實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行實(shí)驗(yàn)室布局的原則：最大程度防止微生物的污染，防止檢驗(yàn)過程對(duì)環(huán)境和人員造成危害實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備：滿足無菌檢查、微生物限度檢查和無菌采樣等活動(dòng)的獨(dú)立設(shè)置的潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng)；配套的細(xì)菌（真菌）實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室、準(zhǔn)備區(qū)、樣品接受和貯藏區(qū)、標(biāo)準(zhǔn)菌株貯藏區(qū)、污染物處理區(qū)和文檔處理區(qū)等輔助實(shí)驗(yàn)室；上述區(qū)域應(yīng)明確標(biāo)識(shí)應(yīng)建立潔凈區(qū)的使用、維護(hù)、驗(yàn)證等活動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程實(shí)驗(yàn)室的操作應(yīng)避免交叉污染應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)室生物安全的應(yīng)急控制預(yù)案應(yīng)建立微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物的處理規(guī)程38設(shè)備微生物實(shí)驗(yàn)室所用的儀器設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)，并記錄培養(yǎng)箱、冰箱等重要設(shè)備應(yīng)確保狀態(tài)正常，并有措施保證其工作的連續(xù)性培養(yǎng)箱、冰箱、滅菌器等應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行連續(xù)觀測(cè)和記錄，應(yīng)評(píng)估發(fā)生的偏差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期清潔和消毒無菌器具應(yīng)有明顯的標(biāo)識(shí)39文件一般包括以下內(nèi)容人員培訓(xùn)與資格確認(rèn)設(shè)備驗(yàn)收、檢定（校準(zhǔn)、期間核查）和維修設(shè)備關(guān)鍵參數(shù)和使用記錄（如24小時(shí)或7天記錄圖）培養(yǎng)基制備、貯藏和質(zhì)量控制檢驗(yàn)過程中的關(guān)鍵步驟數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計(jì)算數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查40實(shí)驗(yàn)記錄原始記錄至少包括以下內(nèi)容實(shí)驗(yàn)日期檢品名稱實(shí)驗(yàn)人員姓名實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差（存在時(shí)）實(shí)驗(yàn)參數(shù)（設(shè)備、菌種、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基信息等）簽名41結(jié)果的判斷主要是對(duì)不符合標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果進(jìn)行判斷導(dǎo)致不符合的原因?qū)嶒?yàn)過程中的污染樣品污染了超過限度標(biāo)準(zhǔn)的微生物對(duì)前一種原因，應(yīng)充分考慮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、抽樣條件、樣品檢驗(yàn)過程等環(huán)節(jié)如確定為第一種原因，則應(yīng)判結(jié)果無效，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)重試應(yīng)加以監(jiān)控42微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則制訂該指導(dǎo)原則的目的在于指導(dǎo)對(duì)微生物限度檢查法的應(yīng)用，是對(duì)該檢查法某些未盡事宜的說明主要對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行了說明應(yīng)采用產(chǎn)品中可能污染的微生物進(jìn)行表面活性劑、滅活劑、中和劑等的毒性試驗(yàn)應(yīng)選擇操作簡(jiǎn)便、快速的檢驗(yàn)方法，避免對(duì)微生物的損傷；去除抑菌作用首選薄膜過濾法對(duì)離心法限制使用的原因作出了解釋43對(duì)培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)中提到的對(duì)照培養(yǎng)基作出了說明，并指出由中檢所提供。對(duì)方法驗(yàn)證中允許使用更高稀釋級(jí)供試液進(jìn)行驗(yàn)證作出了解釋，指出應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的微生物限度確定更高稀釋級(jí)的上限對(duì)供試品中檢出疑似菌的情況，指出應(yīng)采用被認(rèn)可的菌種鑒定方法明確了附錄收載的“藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”的法律地位44對(duì)制劑通則中沒有規(guī)定必須進(jìn)行微生物限度檢