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文檔簡介

1《糧油檢驗糧食中γ-氨基丁酸的測定高效液相色譜法》編制說明根據國家標準化管理委員會《關于下達2024年第三批推薦性國家標準計劃及相關標準外文版計劃的通知》(國標委發(fā)〔2024〕25號)的要求,推薦性國家標準《糧油檢驗糧食中γ-氨基丁酸的測定高效液相色譜法》(計劃號:糧食籽粒中各種營養(yǎng)成分含量分布不均勻,γ-氨基丁酸既損失了γ-氨基丁酸(GABA)等營養(yǎng)物質,又2加工的糧食,保留了γ-氨基丁酸(GABA)等營養(yǎng)成分。以糙米為例,其γ-度加工過程中,糧食中的γ-氨基丁酸(GABA)得到了有效的保留。在糧食中,γ-氨基丁酸(GABA)的合成主要發(fā)生在胚芽中。γ-氨基丁酸(GABA)在很多更加廣泛的檢測需求。譜-質譜法、柱層析熒光測定法、紙電泳比色法、毛細管氣相色譜法、及其類似物第7部分:γ-氨基丁酸》。國外方面,國際標準化組果有較大差異,如糙米、大豆等樣品在測定過程中目標峰與雜質峰2024年7月,國家糧食和物資儲備局科3建立的方法均按照GB5009.295-2023《食品安全國家標準化學分析方法驗證-2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》進行了方法學考察。4實驗室內和實驗室間驗證,符合GB5009.295-2023《食品安全國家標準化學圖1全波長掃描比例,另一種是調節(jié)流動相pH。經對比,通過調節(jié)流動相比例大豆中γ-氨基丁5選擇乙腈與25nmol/L乙酸鈉作為分析γ-氨基丁酸的流動相,出峰時間在表1乙腈與25nmol/L乙酸鈉流動相比例優(yōu)化流動相種類流動相比例35:65出峰時間/min色譜峰對稱因子分離度9.7540.6820.81乙腈:25nmol/L乙酸鈉45:5525:755.27890min內目標物未出峰0.458/0.32(并肩峰)/經查閱文獻,γ-氨基丁酸的pKa值為4.031,流動相緩沖溶液pH值高于或表2不同pH乙酸鈉溶液流動相的出峰情況流動相種類流動相比例溶液pH值出峰時間色譜峰對稱因子分離度乙腈:25nmol/L乙酸鈉35:658.355.905.709.75414.06116.6560.6820.7490.6530.8165.5019.5940.8655.1028.0550.894圖2γ-氨基丁酸標準圖譜前處理條件的優(yōu)化主要包括1)樣品稱樣量2)提取方式3)樣品粒徑4)提取試劑種類5)料液比6)提取時間7)提取次數。衍生條件優(yōu)化1)衍生劑濃度2)衍生溫度3)衍生時間。表3條件優(yōu)化的種類條件序號優(yōu)化種類具體優(yōu)化條件前處理1樣品粒徑(1)20目2)40目3)60目2稱樣量(1)1g2)2g3提取方式(1)渦旋振蕩2)超聲3)水浴振蕩(40℃)4提取試劑(1)純水(2)20%乙醇3)40%乙醇4)60%乙醇;(5)80%乙醇6)無水乙醇5料液比(1)1:102)1:206提取時間(1)10min2)20min3)30min4)40min7提取次數(1)1次2)2次3)3次;7衍生1溫度(1)50℃2)60℃3)70℃4)80℃5)2(1)10min2)20min3)30min4)40min為了進一步保證樣品均勻性和提取效率的最優(yōu)性,選取全部通過20目、40目、60目篩網發(fā)芽糙米和大豆樣品,稱取1.0g樣品于50mL離心管中,加人20mL80%乙醇溶液,渦旋振蕩30min后,于8000r/min離心10min,將上清液轉入表4)表明,樣品粒徑20目、40目和60目時均能保證樣品的均勻性,但樣品粒徑表4不同粒徑的測定結果比較樣品類別樣品粒徑含量(mg/kg)平均值(mg/kg)相對相差(%)糙米20目1107.703.422112.453112.954109.205103.356106.0540目1143.552.042143.253146.904140.105142.206147.9560目1159.852157.553156.254153.555152.556158.40大豆20目131.5032.782.49233.60333.10433.558532.75632.2040目140.1538.512.36237.65338.75438.60537.85638.0560目141.1039.882.72239.95340.60439.00540.40638.20量瓶。搖勻待衍生化后進行液相色譜法檢測。數據結果(見表5)表明,稱樣量為1g或者2g對于檢測結果影響較小,表5不同稱樣量的測定結果比較稱樣量2g含量(mg/kg)48.346.3510min,將上清液轉入50mL容量瓶中表6不同提取方式的測定結果比較9樣品類別發(fā)芽糙米大豆提取方式超聲渦旋振蕩水浴振蕩(40℃)超聲渦旋振蕩水浴振蕩(40℃)含量(mg/kg)154.96184.86188.3237.4642.6039.30實驗室常用的多種提取體系,包括:純水、20%乙醇溶液、40%乙醇溶液、60%搖勻待衍生化后進行液相色譜法檢測。數據結果(見表7)表明,80%乙醇溶液表7不同提取試劑的測定結果比較提取試劑純水20%乙醇40%乙醇60%乙醇80%乙醇無水乙醇含量(mg/kg)3.927.0435.452.085.08上清液轉入25mL容量瓶和50ml容量瓶中。樣品殘渣再用20mL80%乙醇溶液表8不同料液比的測定結果比較樣品類別發(fā)芽糙米藜麥米提取液體積(mL)10mL提取液20mL提取液10mL提取液20mL提取液含量(mg/kg)39.12543.25為了進一步考察提取時間對于提取效率的影響,我們分別比較提取時間為提取時間20min30min40min含量(mg/kg)樣品類別發(fā)芽糙米藜麥米提取次數2次2次含量(mg/kg)35.444.0245.96起草組在實驗操作過程中發(fā)現(xiàn)2mg/mL的4-二甲基mL碳酸氫鈉溶液和0.4mL4-二衍生溫度50℃60℃70℃90℃含量(mg/kg)142.125148.65143.425142.675mL碳酸氫鈉溶液和0.4mL4-二甲基胺基偶氮-4-磺酰氯衍生試劑,混勻后在型濾膜針頭濾器,濾液置于進樣瓶中,待測。數據結果(見表12)表明,衍生反應10min、20min、30min和40min對測定結果無明顯影響,考慮品的復雜性和環(huán)境條件的極限性,因此最終選擇衍生反應衍生時間10min20min30min40min含量(mg/kg)187.05187.55187.85致使用現(xiàn)有檢測標準NY/T2890-2016中規(guī)定的用乙腈溶解γ-氨基丁酸標準曲線濃度(ug/mL)0.10.512520峰面積49.694.9405.4867.11673.9標曲y=83.6953458x+7.0675806相關性0.99977標準曲線濃度(ug/mL)0.10.512520峰面積8.340.781.5361.7723.7標曲y=69.7811091x+10.046274相關性0.99986b.標準曲線濃度NY/T2890-2016《稻米中γ-氨基丁谷物中GABA含量約為5.67mg/kg~74mg/kg,糙米中的γ-氨基丁酸含量約為8將γ-氨基丁酸標準溶液配制成0.1~2序號峰面積S/N結果14.1684.425.2196.436.6549.044.4183.254.6763.464.14873.6036.685.4804.294.4793.65.6313.33.7354.04.7255.84.9145.53.7764.66.6586.95.1313.84.0798.6513.44.5208.0276.6序號濃度(ug/mL)S/N結果測定結果(mg/kg)10.05552.7820.05212.6130.05582.7940.05492.7550.05172.5960.05542.77平均值0.05423/2.71RSD(%)3.38//0h2h4h24h48h72h平均值RSD(%)峰面積(mAU*s)561.5565.5559.7561.9563.5565.3567.4560.7563.460.50表18大米中添加γ-氨基丁酸標準標準溶液加標回收率和精密度結果匯總表大米2.7113.772.86.772.713.6593.52.713.7099.02.713.5483.02.713.5381.52.713.5482.52.7124.5390.85.262.714.4687.52.714.6094.32.714.3682.52.714.4386.02.714.4687.32.7167.7083.22.77.642.718.2592.32.717.7584.02.717.6582.32.717.8585.7表19小麥粉添加γ-氨基丁酸標準標準溶液加標回收率和精密度結果匯總表小麥粉8.84497.86.778.8495.38.848.848.8495.38.8492.88.84893.95.268.8497.68.8493.38.8490.18.8491.48.8496.48.842430.3089.42.37.648.8430.4590.08.8428.7583.08.8429.6086.58.8430.6590.9表20藜麥米添加過γ-氨基丁酸標準標準溶液加標回收率和精密度結果匯總表藜麥米41.5202.86.7741.541.541.541.541.541.5405.2641.541.541.541.541.541.52.77.6441.541.52.717.6582.32.717.8585.7表21發(fā)芽糙米添加γ-氨基丁酸標準標準溶液加標回收率和精密度結果匯總表發(fā)芽糙米90286.897.892.34.45283.894.4274.984.5287.498.4282.693.1275.885.6370.495.393.70.6369.995.0366.593.2364.391.9366.693.2367.793.8540725.497.593.54.31695.091.9698.992.6704.193.6697.192.3表22大豆添加過γ-氨基丁酸標準標準溶液加標回收率和精密度結果匯總表樣品名稱本底值(mg/kg)添加水平(mg/kg)加標回收值(mg/kg)回收率(%)平均回收率(%)相對標準偏差RSD(%)極值的相對相差(%)大豆57.22076.093.790.02.7957.274.385.557.276.496.057.275.591.557.274.486.057.274.687.057.24090.282.485.057.292.287.457.291.385.357.290.783.857.289.681.057.293.490.457.293.394.14.5657.291.657.294.957.293.557.293.024。經驗證,6家實驗室和本起草組驗證測定值每在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的本標準經河北省糧油質量檢測中心、上??泼Z油食品質量檢測有限公司、的線性關系,線性相關系數(R2)≥0.9996,滿足準確性要求;根據GB/T6379.2-2004對6家實驗室返回的檢測結果進行統(tǒng)計分析,采用柯克倫驗證單位實測值平均值相對標準實測值平均值相對標準實測值平均值相對標準實測值平均值相對標準實測值平均值相對標準實測值平均值相對標準(mg/kg)(mg/kg)偏差(%)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)(mg/kg)發(fā)芽糙米大米藜麥米麥芯粉大豆表24γ-氨基丁酸含量實驗室間聯(lián)合驗證統(tǒng)計結果參數發(fā)芽糙米大米藜麥米麥芯粉大豆參加實驗室數目66666樣品的數量3636363636去除離群值后的測試實驗室數量66666所有可接受結果的數量3636363636平均值/(mg/kg)2032.7742.88.8958.0重復性的標準偏差,Sr/(%)2.38060.05310.65840.16171.1614重復性的變異系數/(%)2.0重復性限,r/(%)6.73720.15041.86330.45763.2866再現(xiàn)性的標準偏差,SR/(%)5.16330.16081.52330.40613.2696再現(xiàn)性的變異系數/(%)2.55.83.64.65.6再現(xiàn)性限值,R/(%)

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