北師大版高考生物復(fù)習(xí)講義：微生物技術(shù)

THEELEVENTH][UNIT

第十一單元

生物技術(shù)實(shí)踐

第37講微生物技術(shù)

［考綱要求］1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。4.利用微

生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用。

考點(diǎn)一培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用及微生物的純培養(yǎng)

■知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)強(qiáng)化要點(diǎn)

一、培養(yǎng)基的制備

1.培養(yǎng)基的配制和滅菌

(1)實(shí)驗(yàn)原理

①培養(yǎng)基

a.含義：人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的食養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定和保存各種

微生物。

b.成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和無機(jī)鹽等。

②選擇培養(yǎng)基

a.選擇依據(jù)：不同種類微生物的生長繁殖對(duì)營養(yǎng)的要求丕回。

b.選擇途徑：人為控制培養(yǎng)基的過、碳遮、氮源、滲透壓等條件。

c.選擇結(jié)果：使選擇的培養(yǎng)基利于某類或某種微生物的生長，而不利于其他微生物的生存,可以達(dá)到分離、

培養(yǎng)不同微生物的目的。

③滅菌

a.滅菌原因：及時(shí)殺滅培養(yǎng)基中的微生物,同時(shí)防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的改變。

b.常用的滅菌方法：高壓蒸汽滅菌。

(2)方法步驟

培養(yǎng)基的制作流程為：稱量一溶化一調(diào)pH-分裝,加塞和包扎一滅菌擺斜面及倒平板。

2.培養(yǎng)基的種類

培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

二、培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用

1.探究不同培養(yǎng)基中生長的優(yōu)勢(shì)菌群

探究程序：問題f作出假設(shè)f設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)f實(shí)施實(shí)驗(yàn)f得出結(jié)論f表達(dá)交流。

2.菌落

(1)含義：將微生物通過某種方法接種到適于生長的固住培養(yǎng)基表面上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間后，

單個(gè)的菌傕或殘壬生長繁殖成的一個(gè)個(gè)肉眼可見的細(xì)胞群體。

(2)細(xì)菌與酵母菌的菌落特征

細(xì)菌菌落的共同特征為：“、易用接種環(huán)挑起,菌落各部位顏色一致。酵母菌菌落外形上與細(xì)菌

極為相似，但比細(xì)菌菌落大而厚,顏色也較單調(diào)。霉菌菌落較疏松,常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般

比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍。

(3)優(yōu)勢(shì)菌群的培養(yǎng)基

細(xì)菌生長需要的氮源高(C/N為4：1),DH中性或微堿性(pH7.2?7.6),因此培養(yǎng)細(xì)菌常采用牛肉膏蛋白陳

培養(yǎng)基。酵母菌和霉菌生長所需的碳源含量高(C/N為叵1),pH偏酸性(pH5?6),因此分離真菌常采用

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(簡稱PDA)。

三、實(shí)驗(yàn)：微生物的分離與純化

(一)實(shí)驗(yàn)原理

1.分離的依據(jù)：微生物的分離與純化就是將待檢測微生物樣品通過劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品

中的每一個(gè)細(xì)胞或抱子都可以生長繁殖形成單個(gè)菌落。

2.純化的依據(jù)：將單個(gè)菌落接種到斜面培養(yǎng)基上,經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個(gè)微生物的純種。

(二)方法步驟

1.微生物的分離

(1)稀釋：用1mL無菌吸管吸取1mL大腸桿菌培養(yǎng)液,加入到盛有9mL無菌水的大試管中,充分混勻,

然后用無菌吸管從此試管中吸取1mL加入另一支盛有9mL無菌水的試管中，混合均勻，依次類推制成

IO-、io-、I。-3、I。-4、I。-5、I。-6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。

(2)劃線或涂布

①平板劃線分離法：在近火焰處，左手拿皿底,右手拿接種環(huán),挑取大腸桿菌培養(yǎng)液一環(huán)在壬板上劃線，

常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋,做好標(biāo)記。

②涂布分離法：取3個(gè)平板，底面分別用記號(hào)筆寫上10一4、10-5、10-6三種稀釋度,然后用無菌吸管分別

吸取相應(yīng)稀釋度的稀釋液各0.1mL,放入已標(biāo)記好的平板上，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均

勻，室溫下靜置5?10min,使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基。

(3)培養(yǎng)：將劃線或涂布接種的平板倒置土培養(yǎng)箱或溫室中37℃培養(yǎng)即可長出單個(gè)菌落。

2.接斜面

分別從培養(yǎng)后長出的單個(gè)菌落上挑取少誑細(xì)胞，接種到斜面培養(yǎng)基上，置培養(yǎng)箱或溫室37℃培養(yǎng)區(qū)h,

斜面上菌種長好后，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

「常考基礎(chǔ)診斷」

(1)培養(yǎng)基一般都含有水分、碳源、氮源和無機(jī)鹽等，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)(V)

(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(X)

(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(V)

(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(X)

(5)用涂布分離法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落(V)

「教材熱點(diǎn)拓展」

如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)思考：

AB

(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？

提示獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為平板劃線分離法。

(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作

才可避免此種現(xiàn)象？

提示最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀

釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。

(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？

提示火焰附近存在著無菌區(qū)域。

■S命題探究預(yù)測考向總結(jié)方法

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命題點(diǎn)一培養(yǎng)基及其制備方法分析

1.(2018?天津一中調(diào)研)下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是()

成分蛋白陳葡萄糖K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸儲(chǔ)水

含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL

A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基

B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白膝

C.該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì)

D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用

答案B

解析分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分齊全，但存在伊

紅、美藍(lán)等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項(xiàng)錯(cuò)誤；該培養(yǎng)基中的蛋白陳既是唯一的氮源，也是碳源，而

葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，B項(xiàng)正確；該培養(yǎng)基中存在的無機(jī)鹽和蛋白陳中的某些物質(zhì)可以

看作是生長因子，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進(jìn)行滅菌等操作后才能使用，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

2.(2017?濟(jì)寧模擬)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)

高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答：

1號(hào)堵■喬基11弓雪t喬基

(1)I號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入作為凝固劑，從用途來看屬于選

擇培養(yǎng)基，應(yīng)以作為唯一碳源。

(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是()

A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌

B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板

D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板

(3)溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地,防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法一般

為。

(4)①過程是,②過程所使用的接種方法是法。

(5)部分嗜熱菌在I號(hào)培養(yǎng)基上生長時(shí)可釋放分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選

相應(yīng)的菌落，接種到II號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行培養(yǎng)。

答案⑴瓊脂淀粉(2)C⑶攪拌高壓蒸汽滅菌(4)稀釋涂布分離(5)淀粉酶擴(kuò)大

解析固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實(shí)驗(yàn)的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培

養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培

養(yǎng)基加熱溶化時(shí)，要注意加入瓊脂后需不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對(duì)培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸

汽滅菌。仔細(xì)觀察題圖可知過程，①是菌液稀釋過程，②是采用涂布分離法接種。能產(chǎn)生淀粉酶的部分細(xì)

菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以擴(kuò)大

培養(yǎng)用于生產(chǎn)。

“歸納整合

1.培養(yǎng)基的配制原則

(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。

(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。

(3)pH要適宜：細(xì)菌為7.2?7.6,酵母菌和霉菌為5.0?6.0,培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。

2.微生物對(duì)主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點(diǎn)

⑴自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機(jī)鹽，碳源可來自大氣中的CO2,氮源可由含氮無機(jī)鹽提供。

⑵異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提

供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機(jī)氮源。

命題點(diǎn)二大腸桿菌的純化方法及過程分析

3.下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線分離法的操作結(jié)果-

稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液稀釋液

甲

乙

下列敘述中錯(cuò)誤的是()

A.甲中涂布前要將玻璃涂棒灼燒，冷卻后才能取菌液

B.對(duì)于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102,則所得的菌落不一定是由單一的細(xì)胞或抱子繁殖而

成

C.乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求

D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端

答案C

解析灼燒后的玻璃涂棒如果沒有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過低會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌

體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線分離法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)

胞或抱子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)

是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或施

子繁殖而成，D正確。

4.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請(qǐng)回答有關(guān)檢測飲用水中大腸桿菌的問題：

(1)檢測飲用水中大腸桿菌的含量時(shí)，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用玻璃涂棒

分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為=

判斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是。

(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？(填“需要”或“不需要”)，

其原因是需要判斷培養(yǎng)基________________,對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將的培養(yǎng)

基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。

(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行(填“消毒”或“滅

菌”)處理；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因

是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性，還能損傷它的的結(jié)構(gòu)。

(4)檢測大腸桿菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過處理才能丟棄，以防

止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。

答案(1)涂布分離法D(2)需要是否被雜菌污染(滅菌是否合格)未接種(3)滅菌消毒DNA(4)

滅菌

解析D中菌落分布情況為平板劃線分離法所得。為判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格，本實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對(duì)照。要

判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，若發(fā)現(xiàn)有菌落說明培養(yǎng)

基已被污染。消毒是指使用較溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽抱和抱

子)。滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)

行滅菌處理，對(duì)操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒。

考點(diǎn)二微生物的利用

IE知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)強(qiáng)化要點(diǎn)

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一、從土壤中分離有益微生物

實(shí)驗(yàn)：從土壤中分離纖維素分解菌

1.實(shí)驗(yàn)原理

(1)反應(yīng)依據(jù)：土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶,分解

和利用纖維素和半纖維素。

(2)檢測依據(jù)：因此在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中,纖維素分解菌能很好地生長，并產(chǎn)生黃色或棕綠

魚色素，其他微生物則不能生長。

2.方法步驟

方法一：(1)制備培養(yǎng)基：依據(jù)小辭典，配制依姆歇涅茨基液體培養(yǎng)基。

(2)分裝：按每試管5mL分裝,然后加入7cmX1cm濾紙條,濾紙條緊貼內(nèi)壁,且一半浸入培養(yǎng)基中，121℃

滅菌20min。

(3)制備土壤稀釋液：制備KEI、IO、、［0-3、J。-4、io=的土壤稀釋液。

(4)接種培養(yǎng)：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液1mL接種到濾紙條上,每個(gè)稀釋度重復(fù)4次，置培養(yǎng)箱中

28℃培養(yǎng)14do

(5)觀察：檢查各試管中濾紙條上出現(xiàn)的菌落和濾紙顏色變化情況。

方法二：(1)制備培養(yǎng)基：制備依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板，在平板上鋪一張直徑略小于平板的濾紙，用少量

上述液體培養(yǎng)基潤濕。

(2)接種培養(yǎng)：在濾紙上等距放8個(gè)直徑約10mm的土粒,蓋上培養(yǎng)皿蓋以保持濕度,置恒溫培養(yǎng)箱中28~

30℃培養(yǎng)。

(3)觀察：每隔2d觀察土粒周圍濾紙變色情況，直到濾紙顏色變化，長成菌落,于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

二、微生物對(duì)有機(jī)物質(zhì)的分解

1.探究纖維素分解菌是否只能分解纖維素

(1)問題：分解纖維素的微生物能查分解其他物質(zhì)呢？

(2)作出假設(shè)：假設(shè)分解纖維素的微生物還能分解其他物質(zhì)，包括淀粉、木質(zhì)素、果膠等大分子含碳有機(jī)物。

(3)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：分組設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，用圓二獨(dú)分解纖維素的微生物分解不同的其他物質(zhì)(淀粉、果膠和木質(zhì)

素等)，或者用不同分解纖維素的微生物分解回二種物質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中注意設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)重復(fù)等。

(4)實(shí)施實(shí)驗(yàn)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),認(rèn)真進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

(5)得出結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)過程分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,得出結(jié)論。

(6)表達(dá)交流。

2.分解纖維素的微生物的意義與作用

(1)在自然界碳素循環(huán)中具有重要意義。

(2)微生物的種類繁多、分布廣、數(shù)量大，而且所起的作用也多種多樣。

三、利用微生物制作食品

實(shí)驗(yàn)：利用微生物制作豆豉

1.實(shí)驗(yàn)原理

(1)豆豉是用煮熟的大豆經(jīng)過納豆菌發(fā)酵制成的。納豆菌分泌的蛋白酶能夠分解大豆中的蛋白質(zhì),產(chǎn)生小分

子多肽及多種氨基酸，制成風(fēng)味獨(dú)特的發(fā)酵食品。

(2)在制備過程中，根據(jù)納豆菌的地對(duì)熱不敏感的特性，可采用高溫控制雜菌污染。

2.方法步驟

(1)制備豆豉菌懸液：在錐形瓶中倒入30?40inL開水,加入新鮮的豆豉5?6粒,搖勻，備用。

(2)浸泡：將黃豆裝入杯中加水浸泡加h左右。

(3)煮豆：將浸泡過的黃豆煮20?30min,直到黃豆用手輕輕一掐就破即可。

(4)接種：在容器內(nèi)鋪上一塊雙層紗布，將煮好的黃豆趁熱撈入容器內(nèi)，將豆豉菌懸液灑在豆子表面,用消

過毒的玻璃棒快速攪拌均勻。

(5)發(fā)酵：用另一塊雙層紗布蓋在豆子表面，40℃發(fā)酵15h左右。當(dāng)黃豆表面長出一層菌膜時(shí),根據(jù)口味

加入鹽或醬密封保存。

「?？蓟A(chǔ)診斷」

(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(X)

(2)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源(V)

(3)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(X)

(4)纖維素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖(V)

(5)在篩選能分解纖維素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌株的濃度(V)

(6)制作豆豉要避免雜菌污染，要對(duì)原料進(jìn)行高壓蒸汽滅菌(X)

「教材熱點(diǎn)拓展」

研究人員在依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有棕綠色色素圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖

維素酶高產(chǎn)菌株Ji和L，在不同的溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見圖2,請(qǐng)分

析:

棕綠色圈

菌落①

菌落②

菌落③

圖1

5(，纖維素酶活性(UgTproiein)

°515253545556575

溫度（七）

圖2

(1)圖中棕綠色色素圈大小代表什么？降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是哪種？

提示棕綠色色素圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強(qiáng)的是菌株①。

(2)結(jié)合圖2推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？

提示J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。

命題探究預(yù)測考向總結(jié)方法

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命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析

1.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利

用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培

養(yǎng)基分別為()

A.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基

B.含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無機(jī)培養(yǎng)基

C.含氨的無機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基

D.含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基

答案B

解析酵母菌是真菌,通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)榍嗝顾匾种萍?xì)菌生長，但不能抑

制真菌生長。硝化細(xì)菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用土壤中氮氧化成亞硝酸，進(jìn)而將亞硝酸氧化成硝酸所釋放

的能量，把無機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物以維持自身生命活動(dòng)，利用含氟的無機(jī)培養(yǎng)基可進(jìn)行選擇培養(yǎng)。

2.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯

酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步

驟如圖所示，①為土壤樣品。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:

3⑤

Y

畬

一

①一②③

(1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基

(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用法。

(2)④為對(duì)照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于

;使用法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌

時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是o

(3)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染？

答案(1)苯酚影響涂布分離(2)④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為

碳源涂布分離法或平板劃線分離防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，

接種環(huán)境滅菌，接種過程進(jìn)行無菌操作

解析(1)選擇降解利用苯酚的細(xì)菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當(dāng)苯酚消

耗盡時(shí)，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以②中不同濃度的碳源會(huì)影響細(xì)菌數(shù)量；一般采用涂布分離

法來測定②中活菌數(shù)目。

(2)④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳

源；使用涂布分離法或平板劃線分離法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，以

防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。

(3)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程要無菌操作：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防

止雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵：a.實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和

手進(jìn)行清潔和消毒；b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；c.為避免周圍環(huán)境中微

生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；d.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物

品相接觸。

一規(guī)律方法?---------------------------------、

選擇培養(yǎng)基的制作方法

⑴在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入

某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑

制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素

時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。

⑵通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可分離自生固氮微生物，非

自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物

可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。

(3)利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生

長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。

(4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；

在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。

命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)

3.下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，據(jù)此回答下列問題：

培養(yǎng)基配方

KH2P。41.4g

Na2Hpe)42.1g

MgSO4-7H2O0.2g

葡萄糖10.0g

尿素1.0g

瓊脂15.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸儲(chǔ)水定容到1000mL

(1)從作用上看，該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基，提供氮源的物質(zhì)是,細(xì)菌能利用該氮源是由于體

內(nèi)能合成酶。

(2)在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入指示劑，若指示劑變,

說明有目的菌株存在。

(3)為了測定微生物的數(shù)量，接種時(shí)應(yīng)采用法，某同學(xué)在4個(gè)培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍

數(shù)為106的土壤樣液0.1mL,培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則每毫升原土壤樣液中上述微

生物的數(shù)量為個(gè)，測定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)(填“低”“高”或“基本一致”)。

答案(1)選擇尿素版(催化尿素分解的)

⑵酚紅紅

⑶涂布分離1.6X109低

解析(1)題干指出表中是分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，其中尿素是唯一氮源，能生長的菌落說明能利

用尿素中的氮源，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇尿素分解菌，所以從用途上屬于選擇培養(yǎng)基。(2)

在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說明有目的

菌株存在。(3)純化微生物可以用涂布分離法和平板劃線分離法，其中涂布分離法能用于微生物的計(jì)數(shù)。1mL

原土壤樣液中上述微生物數(shù)量=(180+155+176+129)+4X106x10=16X109個(gè)；涂布分離法計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)

的數(shù)量比實(shí)際數(shù)量會(huì)偏少，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。

4.(2018?天水一中期末)某實(shí)驗(yàn)小組欲從豆油污染的土壤中篩選出高效降解脂肪的菌株。請(qǐng)回答：

(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，

該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

(2)為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行

處理。為了排除,需設(shè)置接種等量無菌水的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。

(3)為了篩選出菌株，可將適量的試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)

象是,則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。

(4)純化菌種時(shí)，為了得到菌落，可采用法接種于新的培養(yǎng)基平板上。

(5)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行的原因是o

答案⑴豆油選擇

(2)倒置梯度稀釋實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(培養(yǎng)基被污染)

（3）蘇丹111（或蘇丹IV）出現(xiàn)透明圈（不出現(xiàn)橘黃色圈或紅色圈）

（4）平板劃線分離

（5）避免周圍環(huán)境中微生物的污染

矯正易錯(cuò)強(qiáng)記長句

易錯(cuò)警示突破選擇題

1.無菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥物消毒和紫外線消毒等；滅菌包

括火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。

2.培養(yǎng)基的制備包括稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞和包扎、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防

止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。

3.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者

所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。

長句應(yīng)答突破簡答題

下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問題：

圖甲圖乙

1.圖甲是利用平板劃線分離法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用涂布分離法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用

的接種工具分別是接種環(huán)和玻璃涂棒；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消

毒。

2.接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？

防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。

3.下圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是圖乙（填“圖甲”或“圖乙”）。

重溫高考演練模擬

1.漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌

株的過程，相關(guān)敘述正確的是（多選）（）

A.生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品

B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落

C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進(jìn)一步純化

D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在常溫下長期保存菌株

答案BC

解析漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場所，生活污水中含有大量微生物，但不

一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的

菌株，篩選時(shí)可通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長出的菌落可能還有其他雜菌，

可再通過平板劃線法進(jìn)一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在低溫下長期保存菌株，D

錯(cuò)誤。

2.（2017?全國I,37）某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。回答下列問題：

（1）有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生________________0能分解尿素的細(xì)菌不能

以尿素的分解產(chǎn)物CCh作為碳源，原因是,但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌

體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是

（答出兩點(diǎn)即可）。

（2）為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+

W

NH4NO3）作為氮源，不選擇其他兩組的原因是____________________________________________________

（3）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2P04和Na2HPO4,其作用有

_________________________________________________（答出兩點(diǎn)即可）。

答案（1）胭酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為

其他有機(jī)物的合成提供原料（2）尿素其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的

細(xì)菌都能利用NH4NO3,不能起到篩選作用（3）為細(xì)菌生長提供無機(jī)鹽離子，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長過

程中pH穩(wěn)定

解析（1）只有能合成腺酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細(xì)菌是一種分解者，屬

于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CC）2作為碳源。能分解尿素的細(xì)菌可以用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)

菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可

為多種有機(jī)物的合成提供原料。

（2）為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，而其他兩組

都含有含氟物質(zhì)NH4NO3,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3不能起到篩選作用。

（3）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2Hpe）右其作用：KH2PO4和Na2Hpe）4構(gòu)成緩沖液，

可維持培養(yǎng)基的pH相對(duì)穩(wěn)定；KH2P。4和Na2HPO4能為微生物生長提供無機(jī)鹽。

3.（2016?全國乙，39）空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教

室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①配制培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白膝、NaCkX、H2O）；

②制作無菌平板；

③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；

④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。

回答下列問題：

（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X

通常是0

（2）步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是____________________________________________________________________

（3）若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)

菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了現(xiàn)象。若將30（即36—6）個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均

值，該做法（填“正確”或“不正確”）。

答案（1）牛肉膏、蛋白膝瓊脂

（2）將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時(shí)間

（3）污染不正確

解析（1）牛肉膏和蛋白陳都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝

固劑瓊脂。（2）實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不

同高度下放置開蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，

需要設(shè)置多個(gè)平行組。（3）在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作

過程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。

4.（2016?四川，10）圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)服酶細(xì)菌的過程，圖乙是版酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。

逐級(jí)挑取

??稀釋單菌落2=^口

X----'

鑒別t

10g細(xì)菌選擇

土壤樣品培養(yǎng)基培養(yǎng)基培藻蠢菌種

甲

??CUGAGUGAGAAAUUUGGU???

-------------------------------------

271（表示從起始密碼開始算起的堿基序號(hào)）

乙

（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加作指示劑，產(chǎn)服酶細(xì)菌在該培

養(yǎng)基上生長一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。

（2）在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1mL,培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長出

的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。

該過程采取的接種方法是,每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為X108個(gè)；與血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

法相比，此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較。

（3）現(xiàn)有一菌株的麻酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核

昔酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼（終止密碼有UAG、UGA和UAA）。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密

碼為，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含個(gè)氨基酸。

答案⑴尿素酚紅紅（2）涂布分離法1.75少（3）UGA115

解析（1）腺酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氮，

氮會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。（2）用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是涂布分

離法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30?300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤

樣品中的細(xì)菌數(shù)為（156+178+191）+3+0.1X105=1.75X108。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)

計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測得的細(xì)菌數(shù)偏少。（3）密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2

個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，箭頭處插入的70個(gè)核甘酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊

隨其后是UGA,應(yīng)為終止密碼，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個(gè)氨基酸。

課時(shí)作業(yè)

1.（2018?張家口檢測）下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說法，正確的是（）

A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基

B.接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理

C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段

D.分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源

答案C

解析天然培養(yǎng)基是指用天然物質(zhì)制成的培養(yǎng)基，但也需要加工；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手應(yīng)消毒，不能滅菌；

分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機(jī)物（如葡萄糖）

作為碳源。

2.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是（）

A.高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上

答案D

解析A項(xiàng)，高壓蒸汽滅菌過程中加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻，待壓力表的壓力降到零時(shí)，再慢慢打開排

氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項(xiàng)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開

一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項(xiàng)，灼燒接種環(huán)之后，要在火焰旁冷卻后

才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項(xiàng)，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)

筆做標(biāo)記。

3.（2018?鄭州測試）下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5o下列敘述正確的是（）

A.在五個(gè)區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌

B.劃線操作時(shí)完全打開皿蓋，劃完立即蓋上

C.接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的

D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù)

答案C

解析在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌；進(jìn)行劃線操作時(shí)，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右

手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否

則難以達(dá)到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。

4.（2017?濟(jì)南模擬）某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是（）

A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌

B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線

C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

D.培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次

答案B

解析培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再從上次劃線的末端開始

進(jìn)行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)過程中一般每隔12h或24h觀察一次。

5.（2015?全國I,39）已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴

油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問題：

（1）顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通常可用染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，

可選用（填“溶劑浸提法”或“水蒸氣蒸儲(chǔ)法”）從菌體中提取。

（2）為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，

并應(yīng)選用以為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用____________________直接計(jì)數(shù)；若要測定其活

菌數(shù)量，可選用法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（4）為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測得相同時(shí)間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降

解10g油脂所需酶量依次為4mg、Img、6mg,則上述三個(gè)溫度中，。。條件下該酶活力最小。

為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞。。設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

答案（1）蘇丹111（或蘇丹W）溶劑浸提法（2）油脂（3）血球計(jì)數(shù)板涂布分離（4）4540

解析（1）生物組織中的油脂能被蘇丹111（或蘇丹IV）染成橘黃色（或紅色）。（2）為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微

生物B的單菌落，我們應(yīng)選用只能讓該菌落生長的選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中只能選用油脂作為唯一碳源。

（3）血球計(jì)數(shù)板可用于直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計(jì)數(shù)活菌數(shù)量可采用涂布分離法。

（4）溫度影響酶的活性，在三個(gè)溫度中，45°C需酶量最高，說明酶活性最低；在三個(gè)溫度實(shí)驗(yàn)中，40℃所

需酶量最少，低于35℃和45℃所用酶量，說明酶的最適溫度介于35℃和45℃之間，因此應(yīng)圍繞40℃

設(shè)計(jì)不同溫度梯度，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

6.（2017?重慶質(zhì)檢）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進(jìn)行微生物的分離和計(jì)數(shù)。

（1）下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方：

A組

葡萄糖尿素瓊脂

KH2PO4Na2Hpe)4MgSO4-7H2O

1.4g2.lg0.2g10.0g1.0g15.0g

B組

纖維Na2Hpe)中

酵母膏水解酪素

NaNO3KH2PO4MgSO47H2OKC1

素粉7H2O

5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g

注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質(zhì)溶解后，均用蒸僧水定容至1000mL。

①從功能上來看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于培養(yǎng)基。

②如果要對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離，則需要選擇培養(yǎng)基（填“A”或"B”），該培養(yǎng)基中

的碳源是o

③在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細(xì)菌能否分解

尿素，若有分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基將會(huì)呈現(xiàn)0

（2）下圖是某同學(xué)采用的接種微生物的方法，請(qǐng)回答下列問題：

①本實(shí)驗(yàn)采用的接種微生物的方法是法，把聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表

面，為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意：

____________________________________________________________________（至少答2項(xiàng)）。

②三位同學(xué)用涂布分離法測定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)

計(jì)結(jié)果：

甲同學(xué)涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是236和260,取平均值248；

乙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和250,取平均值233；

丙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是21、212和256,取平均值163；

在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中，同學(xué)的統(tǒng)計(jì)是正確的。

答案（1）①選擇②A葡萄糖③酚紅紅色

（2）①平板劃線分離稀釋每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線②乙

解析（1）①據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析，A組中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組

中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。②對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離時(shí)，需要使

用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)選擇A組培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是葡萄糖。③尿素分解菌可

以用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定。尿素分解菌產(chǎn)生的腺酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘倍筽H升高，使酚紅指示劑呈紅

色。(2)①據(jù)圖分析，圖示表示平板劃線分離法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上