飼料中基本營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)

1、實(shí)際上, 100多年來(lái)世界各國(guó)一直沿用的是由德國(guó)科學(xué)家 Hennberg 和 Stohman 所創(chuàng)立 的 Weende 飼料分析體系。 該分析體系是把飼料分成 6種組分來(lái)分析測(cè)定:水分 (干物質(zhì) ; 粗灰分 (礦物質(zhì) ;粗蛋白 (N x 6. 25 ; 粗脂肪 (乙醚浸出物 粗纖維;無(wú)氮浸出 物 (NFE,計(jì)算值 。這種飼料分析體系顯然是飼料的概略分析 (Feed Proximate Analysis , 但也是最基本的飼料成分分析。按照 GB10648-1999 飼料標(biāo)簽的規(guī)定:蛋白質(zhì)飼料、配合 飼料、 濃縮飼料和復(fù)合頂混料等飼料都要把水分、 粗蛋白、 粗纖維和粗灰分做為保證值項(xiàng)目 進(jìn)行標(biāo)注

2、。 飼料組成成分的分析對(duì)飼料組成成分的分析是研究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用,評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最基礎(chǔ)的工作。 飼料中最重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂類、礦物質(zhì)和維生素。概略養(yǎng)分 分析法把飼料組成成分分為水分、粗灰分、粗蛋白質(zhì)(CP 、粗脂肪或乙醚浸出物(EE 、 粗纖維(CF 和無(wú)氮浸出物(NEF 。(一 水分飼料中的水分有兩種存在形式,游離水和結(jié)合水。飼料分析中經(jīng)常測(cè)定總水分,采用 干燥失重的方法。 對(duì)于不同飼料, 干燥的方法應(yīng)考慮其理化性質(zhì)而有所區(qū)別。 盡管飼料中的 水分營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不大, 但是測(cè)定飼料中的水分可得出飼料干物質(zhì)的含量, 這與飼料的能量含量 密切相關(guān),因此水分的測(cè)定意義重大。本方法依據(jù)

3、 GB6435 86 飼料中水分的測(cè)定, 它適用于配合飼料和單一飼料水分含量 的測(cè)定,但不適用于做飼料的奶制品、動(dòng)植物油中的水分測(cè)定。1. 方法原理試樣在 (1052 烘箱內(nèi)和常壓條件下烘干至恒重的質(zhì)量為水分。2. 儀器設(shè)備(1植物樣品粉碎機(jī)或研缽;(2試驗(yàn)篩:孔徑 0.42mm (40目(3分析天平:分度值 0. 0001g ;(4稱量皿:玻璃或鋁質(zhì),直徑 40mm 、高 25mm(5電熱式恒溫烘箱:控制2;(6干燥器:變色硅膠干燥劑3.樣品的制備(1選取有代表性的原始樣品不少于 1000g 。 按四分法縮分到 250g , 風(fēng)干或以 60烘干, 用植物樣品粉碎機(jī)碾細(xì),過(guò) 0.42mm 試驗(yàn)

4、篩 (注意一定要將樣品全部過(guò)篩,并混合均勻 。封 入樣品袋,放在陰涼處保存,以備測(cè)定。(2如果飼料樣品是含多汁的鮮樣,如青貯、牧草等,無(wú)法直接粉碎,應(yīng)進(jìn)行預(yù)干燥處 理:稱取 200-300g(準(zhǔn)確至 0.01g 鮮樣,在 105烘箱中烘殺 15min ,立即把溫度降至 65, 烘 6-8h ,取出,在空氣中冷卻 4h ,稱量。失重即初水分 w 0(H 20 。將得到的烘干樣,粉碎, 過(guò)篩,裝袋,以備測(cè)定。4測(cè)定步驟(1將稱量皿洗凈, 在 (1052 烘箱內(nèi)烘干 1 2h , 取出在干燥器內(nèi)冷卻 30min , 用分 析天平稱量。再放入烘箱烘干 30min ,冷卻,稱量,直至兩次稱量之差小于 0

5、. 0005g 為恒 重。(2用分析天平稱取 2-5g 樣品, 均勻平攤在已恒重的稱量皿中, 厚度小于 0. 5cm 。 不蓋 稱量皿蓋,在 (1052 恒溫烘箱內(nèi)烘干 2 4h 。取出,蓋上稱量皿蓋,放在干燥器內(nèi)冷卻 30min ,稱量,同樣再烘 1h ,冷卻、稱量。直至兩次稱量之差小于 0. 002g 為恒重。5.結(jié)果計(jì)算(1飼料中水分含量按公式 (3 1 計(jì)算 式中:W(H2O 飼料中水分的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%;m 1 105烘干前試樣和稱量皿總質(zhì)量,m 2一 105烘干后試樣和稱量皿總質(zhì)量,m 0 105烘干的稱量皿質(zhì)量, g 。(2每個(gè)試樣應(yīng)取兩個(gè)平行樣測(cè)定,以算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。兩個(gè)平行

6、樣的相對(duì)誤差應(yīng) 小于 0.2%。(二 粗灰分粗灰分是飼料中有機(jī)物被全部氧化除去后剩余的殘?jiān)?主要為礦物質(zhì)氧化物和鹽類等 無(wú)機(jī)物質(zhì)。粗灰分的測(cè)定方法為高溫灼燒法,即將飼料樣品放入別 5505的高溫電爐 中灼燒, 至灰白色, 稱殘?jiān)闹亓俊?測(cè)定飼料中的粗灰分含量, 對(duì)評(píng)定飼料礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值 意義不大。(三 粗蛋白質(zhì)飼料中的一切合氮物質(zhì)的總稱為粗蛋白質(zhì),用飼料中的含氮量乘以 6.25進(jìn)行計(jì)算。粗 蛋白質(zhì)包括真蛋白質(zhì) (TP和非蛋白質(zhì)性含氮化合物。飼料總氮中的非蛋白氮 (NPN部分對(duì) 水產(chǎn)動(dòng)物幾乎無(wú)用, 評(píng)定飼料蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有時(shí)需要對(duì)飼料中真蛋白質(zhì)進(jìn)行分析, 如蝦粉 中含有大量的幾丁質(zhì)氮。本方法依

7、據(jù) GB /T6432 94飼料中粗蛋白測(cè)定方法,適用于配合飼料、濃縮飼料和單 一飼料中粗蛋白的測(cè)定。1原理凱氏法測(cè)定試樣蛋白質(zhì)含量,是在催化劑作用下用濃硫酸將含氮化合物轉(zhuǎn)化為硫酸銨, 將生成的硫酸銨在強(qiáng)堿性條件下餾出氨, 經(jīng)硼酸溶液吸收, 再用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定, 將測(cè)得的 氮含量乘以換算系數(shù) 6. 25,即粗蛋白的含量。2儀器設(shè)備(1植物樣品粉碎機(jī)或研缽。(2試驗(yàn)篩:孔徑 0, 42mm(40 目 。(3分析天平:分度值 0. 0001g(4專用消煮爐或可調(diào)電爐。(5酸式滴定管:10mL 或 25mL 。(6專用消化管或 250mL 凱氏瓶。(7凱氏蒸餾裝置:常量直接蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾也

8、可采用專用定氮儀。(8三角燒瓶:150mL 或 250mL 。3試劑(1硫酸 (AR, =1.84。(2混合催化劑:0.4硫酸銅 (CuSO45H 2O , AR 和 6g 硫酸鉀 (K2SO 4, AR ,磨細(xì)混均。(340%氫氧化鈉溶液:稱取 40g 氫氧化鈉 (NaOH,CP溶于 1mL 蒸餾水中。(42%硼酸溶液:稱取 20g 硼酸 (H3BO3, AR1000mL 蒸餾水中。(5混合指示劑:將 0.1%甲基紅乙醇溶液與 0.5%溴甲酚綠乙醇溶液, 按 1:1等體積混 合。(60.1000mol/L鹽酸 (HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液:取 8. 3mL 鹽酸 (AR注入 1000ml 蒸餾水。用無(wú)水

9、 碳酸鈉 (280烘干 法標(biāo)定準(zhǔn)確濃度。稱取 0. 2000g ,溶于 50mL 水,加混合指示劑,用 0.1mol/L鹽酸滴定至暗紅色。同時(shí)滴定空白,加以校正。(7蔗糖 (AR(8硫酸銨 (AR4操作步驟(1選取有代表性的樣品用四分法縮分至 200g ,風(fēng)干或以 65烘干后粉碎,過(guò) 0.42mm 試驗(yàn)篩,封入樣品袋,在陰涼處保存,以備分析。(2用分析天平準(zhǔn)確稱取 0.3 1.0g 制好的試樣,放入專用消化管或凱氏瓶中,加入混合 催化劑 2.0g 和 12mL 硫酸,蓋好專用消化管蓋或凱氏瓶口蓋一漏斗,置于專用消煮爐或可 調(diào)電爐上消煮, 開始用小火加熱消煮, 待泡沫消失后再加大火力保持微沸狀態(tài)

10、, 直至溶液透 明呈藍(lán)綠色并繼續(xù)消煮 2h.(3將消化的試樣放冷,加入 50-60mL 蒸餾水,搖勻,冷卻。將蒸餾裝置冷凝管末端浸 入內(nèi)裝 25mL 2%硼酸溶液的三角瓶底部,加入 2滴混合指示劑。然后小心地向消化液內(nèi)加 入 50mL40%氫氧化鈉溶液, 立即進(jìn)行加熱蒸餾, 直至餾出液體體積為 100mL 為止。 取下三 角瓶使冷凝管末端離開液面,繼續(xù)蒸餾 1-2min ,并用蒸餾水沖洗冷凝管末端,停止蒸餾。(4滴定:用 0.1mol/L 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榧t色為終點(diǎn)。(5空白測(cè)定:稱取 0. 5g 蔗糖代替試樣,按上述操作步驟測(cè)定。5.結(jié)果計(jì)算(1飼料中粗蛋白質(zhì)的含量按公式計(jì)

11、算 式中:w(CP 飼料中粗蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%;V 滴定試樣時(shí)所消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積, mLV 0滴定空白時(shí)所消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積, mLC B 標(biāo)準(zhǔn)溶液鹽酸的量濃度, MryLI0.0140 氮的摩爾質(zhì)量, kg/mol;m 試樣質(zhì)量, g(2每試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定,取平均值為分析結(jié)果方法允許相對(duì)偏差 5%。 6注意事項(xiàng)(1方法的可靠程度可用硫酸銨代替試樣進(jìn)行測(cè)定氮含量,與化學(xué)式計(jì)量氮作比較,誤 差應(yīng)為0. 2%。例如,準(zhǔn)確稱取 0.2000g 硫酸銨測(cè)定含氮量應(yīng)為 (21.190. 2 %(2如果試樣中蛋白質(zhì)含量高,可適當(dāng)減少稱樣量,同時(shí)考慮蒸餾完全的問(wèn)題,可適當(dāng) 多蒸幾分鐘,以

12、保證蒸餾完全,防止對(duì)下一個(gè)樣品造成的記憶效應(yīng)。(3凱氏定氮法己沿用了 l00多年, 目前已有全自動(dòng)定氮儀, 這類儀器從消化、 蒸餾到 滴定可自動(dòng)完成,但儀器價(jià)格較貴。目前國(guó)產(chǎn)半自動(dòng)定氮儀實(shí)際上是一套蒸餾裝置,消化、 滴定還要另行試驗(yàn)。(4GB6432 94 國(guó)標(biāo)方法中規(guī)定樣品消化時(shí)要加入玻璃球以防爆沸,但我們的經(jīng)驗(yàn)證 明,由于加入大量混合催化劑呈顆粒狀,不產(chǎn)生爆沸,故無(wú)需加入。另外,本實(shí)驗(yàn)考慮消化 需要回流過(guò)程和減少蒸餾逸出造成的氨損失,建議消化管或凱氏瓶要加蓋消化。(5國(guó)標(biāo)方法中使用鄰苯二甲酸氫鉀作為基準(zhǔn)物標(biāo)定鹽酸溶液。實(shí)際上使用無(wú)水碳酸鈉 基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定鹽酸溶液也是很方便的。(四 粗脂肪粗脂

13、肪包括了飼料中可溶于乙醚的所有成分,故又稱乙醚浸出物。通常用索氏抽提器 回流浸提飼料樣品進(jìn)行粗脂肪的測(cè)定。按照國(guó)標(biāo) GB /T6433 94,飼料中粗脂肪的測(cè)定方法適用于各種單一飼料、混合飼料 和配合飼料的分析。1原理采用索氏 (Soxhlet脂肪提取器用乙醚抽提試樣,抽提物的總質(zhì)量為粗脂肪含量。2.儀器設(shè)備(1植物樣品粉碎機(jī)或研缽 .(2試驗(yàn)篩:孔徑 0. 42mm(40 目 (3分析天平:分度值 0.0001g(4電熱恒溫水浴鍋:室溫 -100。(5鼓風(fēng)電熱烘箱:50-200。(6索氏脂肪提取儀 (帶球形冷凝管 100-150mL(7濾紙或?yàn)V紙筒:中速,脫脂。(8干燥箱:變色硅膠或無(wú)水氯化

14、鈣作干燥劑3試劑無(wú)水乙醚(AR 4.分析步驟(1選取有代表性的試樣, 用四分法縮分至 200g , 風(fēng)干或以 65烘干后粉碎, 過(guò) 0.42mm 試驗(yàn)篩,混勻封于樣品袋內(nèi),于陰涼處保存,以備分析。(2索氏提取器應(yīng)干燥無(wú)水, 把抽提瓶 (內(nèi)裝數(shù)粒沸石 在 (1502 烘箱內(nèi)烘干 1 2h , 取出放入干燥器內(nèi)冷卻 30min , 稱量。 再烘 30min , 同樣冷卻, 稱重。 兩次稱量之差小于 0. 0008g 為恒重。(3視飼料中脂肪含量稱取 l 5g(準(zhǔn)確至 0. 0002g 置于濾紙筒內(nèi),或用濾紙包好,放入 l05烘干 1 2h ,取出放入抽提器內(nèi),濾紙包應(yīng)完全浸入乙醚,向抽提瓶?jī)?nèi)加 6

15、0-100mL 乙 醚,裝好回流裝置,在 65-75水浴上加熱回流,控制乙醚回流速度為每小時(shí) 8-10次,共回 流 50-70次。取出試樣,仍用原抽提瓶回收乙醚,取抽提瓶,在水浴上蒸除殘存乙醚。(4將抽提瓶外水分擦干, 放入 (1502 烘箱內(nèi)烘干 2h , 取出放入干燥器內(nèi)冷卻 30min ,稱量。同樣再烘 lh ,冷卻,稱量。兩次稱量之差小于 0.001g 為恒重。5結(jié)果計(jì)算(1飼料中粗脂肪的含量按公式計(jì)算 式中:w(EE飼料中粗脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%:m 2己恒重的抽提瓶質(zhì)量, g ;m l 己恒重的拍提瓶和粗脂肪的總質(zhì)量m 風(fēng)干試樣質(zhì)量, g 。(2母?jìng)€(gè)試秤取兩個(gè)平行樣測(cè)定,取平均值作為分

16、析結(jié)果相對(duì)誤差應(yīng)小于 5%。6.注意事項(xiàng)(1本文介紹的方法又稱為油重法, GB/T6433 94中稱為仲裁法。如果樣品數(shù)量多, 又不作為仲裁,可采用減重法。將風(fēng)干樣稱量裝入于 105烘干恒重的濾紙筒內(nèi),包好,在 105烘干,冷卻稱量。放入拍提瓶?jī)?nèi)抽提 50 70次。取出濾紙包,吹干乙醚,放入 (1052 烘箱內(nèi)烘干 2h. 取出放入干燥器內(nèi)冷卻 30min ,稱量。濾紙包的減量為粗脂肪含量。 該方法抽提器內(nèi)一次可放 3-5個(gè)樣品抽提。由于樣品量大,抽提次數(shù)可適當(dāng)多些。(2目前,全自動(dòng)脂肪測(cè)定儀已有銷售,使用這類儀器可按儀器說(shuō)明書操作。(五 粗纖維粗纖維是植物細(xì)胞壁的主要組成成分,它包括纖維素、

17、半纖維素、多縮戊糖、木質(zhì)素 及角質(zhì)素等成分。 粗纖維影響飼料的消化, 但適宜的水平對(duì)動(dòng)物是必需的。 測(cè)定飼料中粗纖 維的含量是控制飼料中適宜的粗纖維水平的前提。 通常用稀硫酸和稀 Na0H 溶液溶解飼料樣 品,不溶性殘?jiān)鼮榇掷w維。概略養(yǎng)分分析法測(cè)定粗纖維時(shí),由于部分半纖維素、木質(zhì)素溶解于酸、堿中,導(dǎo)致結(jié) 果出現(xiàn)誤差。 V an Soest(1976騰出了改進(jìn)方案, 用中性洗滌纖維 (NDF 、 酸性洗滌纖維 (ADF、 酸性洗滌木質(zhì)素 (ADL,作為測(cè)定飼料中纖維性物質(zhì)的指標(biāo)。國(guó)標(biāo) GB /T6434-94 飼料中粗纖維的測(cè)定方法適用于各種混合飼料、配合飼料、濃縮 飼料和單一飼料。牧草、青貯等

18、飼料中粗纖維高達(dá) 60% 80%(干物質(zhì)計(jì) ,而精料中,如玉 米、豆粕中粗纖維不過(guò) 2% 4%。1 原理飼料用稀酸和稀堿在規(guī)定條件下分別進(jìn)行消煮,再用乙醇除去可溶物,經(jīng)高溫灼燒后 扣除礦物質(zhì)所剩余的物質(zhì)總稱。 主要包括纖維素、 半纖維素、 木質(zhì)素和少量雜質(zhì), 如果膠等。 2儀器設(shè)備(1植物樣品粉碎機(jī)或研缽。(2試驗(yàn)篩:孔徑 1mm 。(3分析天平:分度值 0. 0001g 。(4可調(diào)電爐。(5高溫電阻爐。(6電熱恒溫箱。(7消煮器:有冷凝球的 600mL 高型杯或有冷凝管的瓶。(8抽濾裝置:包括真空泵、吸濾瓶和 30ML 濾堝 (內(nèi)鋪孔徑 0.42mm 不銹鋼網(wǎng) 或 G 2玻 璃砂濾堝。(9干

19、燥器:變色硅膠或無(wú)水氯化鈣作干燥劑。3.試劑(10.225molL 硫酸(1/2H2SO4溶液： 6.93mL 硫酸(AR， 將 98移入 500mL 蒸餾水， 冷卻后定容至 1000mL。用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其濃度，允許誤差0.005mol/L。 (20.313mol/L 氫氧化鈉(NaOH溶液：準(zhǔn)確稱取 12.52g 氫氧化鈉溶于 500mL 蒸餾水， 冷卻后定容至 1000mL。該溶液可用鄰苯二甲酸氫鉀基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定，濃度允許誤差 0.005mol/L。 標(biāo)定方法：稱取 1.8000g 105-110烘干的鄰苯二甲酸氫鉀基準(zhǔn)物，溶于 5mL 不合二氧 化碳的蒸餾水中，加 2 滴 1酚酞指

20、示劑，用配好的氫氧化鈉溶液滴定至粉紅色。同時(shí)滴定 空白。按以下式計(jì)算氫氧化鈉溶液的量濃度 c(NaoH： 式中：c(NaOHNaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L m鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，g V1滴定時(shí)所用 NaoH 溶液體積，mL； V0滴定空白時(shí)所用 NaoH 溶液體積，mL： 0.2042鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量，kg/mL。 (3酸洗石棉：將市售的酸洗石棉先用鹽酸溶液(1+3煮沸 30min， 過(guò)濾烘干后于 550 高溫電阻爐內(nèi)灼燒 16h。用 0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4溶液浸泡并煮沸 30min，過(guò)濾，用水 洗凈，再用 0313nDlL 氫氧化鈉(NaOH溶液煮沸 30

21、min，過(guò)濾，可先用少量酸洗一次， 再用水沖洗至中性，烘干后于 550高溫電阻爐內(nèi)灼燒 2h。冷卻裝瓶備用，此酸洗石棉空白 試驗(yàn)每克含粗纖維值應(yīng)小于 0.001g。 (495乙醇(CP (5乙醚(CP (6正辛醇：(AR。 4測(cè)定步驟 (1取有代表性飼料樣品用四分法縮至 200g，風(fēng)干或以 65烘箱烘干后，用植物粉碎機(jī) 粉細(xì)，全部通過(guò) lmm 試驗(yàn)篩，混勻，封入樣品袋，作為試樣以備測(cè)定。 (2用分析天平準(zhǔn)確稱取 12g 試樣，放入消煮器內(nèi)，加入 200mL 0.255mol/L 硫酸 (1/2H2SO4溶液和一滴正辛醇，裝好冷凝球或冷凝管立即快速加熱至沸，調(diào)節(jié)加熱器保持微 沸狀態(tài) 30min。 立即抽濾(古氏坍塌內(nèi)鋪孔徑 6.5m 尼龍布。 殘?jiān)谜麴s水洗至中性， 抽干， 用 200mL 0 313mol/L 氫氧化鈉(Na0H溶液將殘?jiān)耆D(zhuǎn)入原消煮溶器內(nèi)， 同樣煮沸 30min。 立即用已于 550恒重的濾堝鋪酸洗石棉 0.2-0.3g過(guò)濾。 先用 25mL0.255mol/L 硫酸(1/2H2SO4