BG11液體培養(yǎng)配方

1、BG11液體培養(yǎng)基就是： Stock1 定容100mL 檸檬酸 0.3g 檸檬酸鐵胺 0.3g EDTANa2 0.05g Stock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO47H2O 1.5g Stock3 定容100mL CaCl22H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2g Stock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl24H2O 1.81g ZnSO47H2O 0.222g Na2MnO42H2O 0.391g CuSO45H2O 0.079g Co(NO3)26H2O 0.049g Stock1 取用2mL

2、 Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 總定容 1000mL D1 (Diatom medium)Component Amount Stock Solution (1) NaNO3 1 mL/L12 g/100ml dH2O (2) K2HPO4 1 mL/L 4 g/100 mL dH2O (3) MgSO47H2O1 mL/L 7g/100 mL dH2O (4 ) CaCl22H2O1 mL/L 2 g/100 mL dH2O (5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O (6 ) Na2SiO3

3、.9H2O1 mL/L 10g/100ml dH2O(7) MnSO4 0.1mL/L0.2g/100ml dH2O(8) 檸檬酸鐵 1 mL/L 0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution） 1ml/L H3BO3 2.86g/L dH2O MnCl24H2O1.86g/L dH2O ZnSO47H2O 0.22g/L dH2O Na2MoO4.2H2O0.39g/L dH2O CuSO4. 5 H2O0.08g/L dH2O Co(NO3)2.6 H2O0.05g/L dH2O(10) 土壤提取液 20 mL/L 土壤提取液配制方法:取花園土未

4、施過肥200g置于燒杯或三角瓶中，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱3小時，冷卻，沉淀24小時，此過程連續(xù)進行3次，然后過濾，取上清液，于高壓滅菌鍋中滅菌后于4冰箱中保存?zhèn)溆?。f/2 mediumComponent Amount (1) NaNO3 75 mg/L(2) NaH2PO4 2H2O 0.6 mg/L(3) Vitamin B12 0.5 g/L (4) Biotin 0.5 g/L (5) Thiamine HCl 100g/L (6) Na2SiO3 9H2O10 mg/L (7) f/2 metals 1 mL/L Na2EDTA 2H2O 4.4g

5、FeCl3 6H2O 3.16 g CoSO4 7H2O 0.012g ZnSO4 7H2O 0.021g MnCl2 4H2O 0.18 g CuSO4 5H2O 0.007g Na2MoO4 2H2O0.007g Distilled water 1000 mL(8) Seawater 1000 mL BG-11是培養(yǎng)藍藻使用最廣泛的培養(yǎng)基，微量元素溶液 A5 是BG-11培養(yǎng)基微量元素的重要組成部分。試劑名稱g/L備注NaNO31.5gK2HPO40.04gMgSO4.7H2O0.075gCaCl2.7H2O0.036gNa2CO30.02gCitric acid(檸檬酸)0.006gAm

6、monium ferric citrategreen(檸檬酸鐵銨)0.006g或檸檬酸鐵0.004gEDTA0.001 g微量元素溶液A5 1ml氨芐青霉素(終濃度)50g/ml蒸餾水919ml*微量元素溶液A5A5溶液1mlH3BO32.86gMnCl2.4H2O1.81gZnSO4.7H2O0.222gNa2MoO40.39gCuSO4.5H2O0.079gCo(NO3)2.6H2O0.049g參考：中科院水生生物研究所淡水藻種庫一、目的要求了解培養(yǎng)基的配制原理。了解培養(yǎng)基常規(guī)配制程序。了解培養(yǎng)基配制過程各環(huán)節(jié)的要求和注意事項。二、基本原理正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學實驗工作的重

7、要基礎，由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同，例如器皿的準備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相向。三、實驗材科(一)藥品待配各種培養(yǎng)的組成成分，瓊脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L (升，統(tǒng)一用大寫)HCl溶液。(二)儀器天平或臺秤，高壓蒸汽滅菌鍋。(三)玻璃器皿移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。(四)其他物品藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等。四、實驗內(nèi)容(

8、一)玻璃器皿的洗滌和包裝1玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將錐形瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中，用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡。再用自來水及蒸餾水沖洗，洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2滅菌前玻璃器皿的包裝(1)培養(yǎng)皿的包裝培養(yǎng)皿由一蓋底組成一套?？捎脠蠹垖滋着囵B(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。(2)移液管的包裝在移液管的上端塞入小段棉花(勿用脫脂棉)。它的作用是避免外界及口中雜菌吹入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左有。棉花

9、自身長度約1-15cm。塞棉花時，可用一外圈拉直的曲別針，將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長條報紙的一端，約成45度角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準備滅菌。(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過程1液體培養(yǎng)基配制(1)稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計算各成分的用量，然后進行準確稱量。(2)溶化將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水(根據(jù)實驗需要可用自來水或蒸餾水

10、)，用玻棒攪動，加熱溶解。(3)定容待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用量太少時，可預先配成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入至培養(yǎng)基中。(4)調(diào)pH一般用pH試紙測定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液進行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH時，應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達到所需pH為止。(5)過濾用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時，此步可省去。2固體培

11、養(yǎng)基的配制配制固體培養(yǎng)基時，應將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(15-2)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補足因蒸發(fā)而失去水分。(三) 培養(yǎng)基的分裝根據(jù)不同需要，可將己配好培養(yǎng)基分裝入試管或錐形瓶內(nèi)，分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去。1試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內(nèi)，以右手拇指及食指開放彈簧夾，

12、中指及無名指夾住玻璃管嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。裝入試管培養(yǎng)基的量視試管大小及需要而定，若所用試管大小為15150 mm時，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度14左右為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時，在瓊脂完全融化后，應趁熱分裝于試管中。用于制作斜面的固體培養(yǎng)基的分裝量為管高15(約34m1)；半固體培養(yǎng)基分裝量為管高的13為宜。2錐形瓶的分裝用于振蕩培養(yǎng)微生物用時，可在250 m1錐形瓶中加入50 ml的液體培養(yǎng)基，若用于制作平板培養(yǎng)基用時，可在250 m1錐形瓶中加入150ml培養(yǎng)基，然后再加入3g瓊脂粉(按2計算)，滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化。(四)棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎為了培養(yǎng)好氣性

13、微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或錐形瓶內(nèi)空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及錐形瓶口加上棉花塞等。1試管棉塞的制作制棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的圓孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團孔中制成棉塞，然后直接壓入試管或錐形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入。棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的23在試管內(nèi)，13在試管外(圖514)。目前也有采用金屬或塑料試管帽代替棉塞。直接蓋在試管口上。滅菌待用。將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或蓋好

14、管帽的試管擁成一捆，外面包上一層牛皮紙。用鉛筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期，滅菌待用。2錐形瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上。目前也有采用無菌培養(yǎng)容器封口膜直接蓋在瓶口，既保證良好通氣，過濾除菌又操作簡便，故極受歡迎。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包上八層紗布或蓋好培養(yǎng)容器封口膜的錐形瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用。(五)培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基經(jīng)分裝包扎之后，應立即進行高壓蒸汽滅菌，100Pa滅菌20min（滅菌條件根據(jù)培養(yǎng)基不同有所差異，含糖培養(yǎng)基105，30min）。如因特殊情況不能及時滅菌，則應暫存于冰箱中。(六)斜面和平板的制作1斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱置于木棒上，使成適當斜度，凝固后即成斜面(圖515)。斜面長度不超過試管長度12為宜。如制作半固體或固體深層培養(yǎng)基時，滅菌后則應垂直放置至冷凝。2平板的制作將裝在錐形瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多，溫度低于50，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應采用無菌操作，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶的底部或試管，左于同時用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，月左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開