需氧革蘭陽性桿菌ppt課件.ppt

需氧革蘭陽性桿菌 芽胞桿菌屬 Bacillus 李斯特菌屬 Listeria 丹毒斯菌屬 Erysipelothrix 加德納菌屬 Gardnerella 需氧芽胞桿菌屬（Bacillus）48個(gè)種 與醫(yī)學(xué)有關(guān)5個(gè)種 炭疽芽胞桿菌（B.anthracis） 蠟樣芽胞桿菌（B.cereus） 蕈狀芽胞桿菌（B.mycoides） 巨大芽胞桿菌（B.megaterium） 蘇云金芽胞桿菌（B.thuringiensis ） 1 臨床意義 引起人、蓄共患的急性傳染病，包括皮膚炭疽、肺炭 疽、腸炭疽、敗血性炭疽，烈性傳染病, 死亡率極 致病因子： 莢膜：抗吞噬，有利于細(xì)菌在組織內(nèi)繁殖擴(kuò)散 炭疽毒素：保護(hù)性抗原、致死因子、水腫因子 病后可獲得持久免疫力 炭疽芽胞桿菌2 炭疽芽胞桿菌 革蘭陽性大桿菌，兩端截平，竹節(jié)狀排列，有芽胞、 無鞭毛、可有毒株有莢膜，芽胞橢圓形，小于菌體， 位于菌體中央，多在有氧條件下形成，2530，在 培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動(dòng)物尸體解剖后暴露在空氣中， 都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞 ，尸體嚴(yán)禁解剖 3 普瓊平板：灰色、粗糙型菌 落；卷發(fā)狀邊緣（低倍鏡下 ） BAP：不溶血 NaHCO3 BAP： 有毒株產(chǎn)生莢膜呈黏液 型菌落，挑取時(shí)呈粘絲狀(鑒 別要點(diǎn)) 無毒株粗糙型菌落 培養(yǎng)特性 n肉湯培養(yǎng)基：絮狀 沉淀 n明膠371824h 表面液化成漏斗狀 ，由于細(xì)菌沿穿刺 線向四周擴(kuò)散形成 倒松樹狀。 4 生化反應(yīng) 葡萄糖+ 、麥芽糖+ 、蔗糖+、 卵磷脂酶弱+、觸酶+ 硝酸鹽還原試驗(yàn)+、VP、吲哚、硫化氫 、檸檬酸鹽、尿素 明膠液化 胨化牛乳：在牛乳中生長24天后牛乳凝固 并緩慢胨化 5 抗原 l菌體多糖抗原：與毒力無關(guān)，耐熱，特異性 不高，病獸臟器皮毛加熱后仍可與相應(yīng)抗體 反應(yīng)，稱Ascoli熱沉淀反應(yīng) l莢膜多肽抗原：抗吞噬，與毒力有關(guān) l芽胞抗原： l炭疽毒素Anthrax toxin： 由保護(hù)性抗原、 致死因子、水腫因子形成。 6 抵抗力 耐熱、耐干燥 對(duì)氧化劑敏感 對(duì)青霉素、磺胺類抗生素敏感 7 微生物學(xué)檢查 標(biāo)本的采集：分泌物、痰、血液、糞便 、嘔吐物、腦脊液等，嚴(yán)禁宰殺解剖死 蓄。 標(biāo)本的處理：液體標(biāo)本取沉渣分離培養(yǎng) ；固體標(biāo)本用生理鹽水浸泡，水浴殺死 非芽胞菌；血液、臟器、滲出液增菌或 直接分離培養(yǎng) 8 痰、嘔吐物、CSF 及炎癥分泌物 2%兔血清肉 湯快速增菌 374h 莢膜熒光抗體染色 或莢膜腫脹試驗(yàn) 直接涂片 莢膜染色 G染色 初步報(bào)告 0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖 涂片G染色、 莢膜染色 初步報(bào)告 快速檢驗(yàn)程序 核 酸 檢 測 Ascoli試驗(yàn) 皮毛、腐 敗臟器等 9 生化反應(yīng) 噬菌體裂解 青霉素抑制 毒力試驗(yàn) 皮毛、腐敗臟器等血液 以NG制成懸液 經(jīng)加溫或飽和 尿素處理 肉湯增 菌培養(yǎng) BAP或戊 烷脒平板 2%兔血清肉湯48hG染色鏡檢菌落特征 動(dòng)力觀察 串珠試驗(yàn) 確定報(bào)告 莢膜腫脹試驗(yàn) 分離培養(yǎng) 檢驗(yàn)程序 法定報(bào)告?zhèn)魅静?，發(fā)現(xiàn)疑是病例應(yīng)于24小時(shí)內(nèi)上報(bào)CDC 10 戊烷脒多粘菌素瓊脂 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 25g/L戊烷脒: 殺滅利什曼原蟲等寄生蟲 3000IU/L多粘菌素 2%脫纖維羊血 11 檢驗(yàn)方法 涂片染色：革蘭陽性大桿菌、竹節(jié)狀排列、 有明顯莢膜和芽胞初步報(bào)告 莢膜熒光抗體染色或莢膜腫脹試驗(yàn) 核酸檢測：核酸雜交 分離培養(yǎng)：BAP或戊烷脒多粘菌素B等選擇性 培養(yǎng)基。 2%兔血清肉湯增菌分離培養(yǎng) 12 菌落特征 形態(tài)染色 生化試驗(yàn):表131 串珠試驗(yàn): 接種于含青霉素(0.050.5U/ml) 的肉湯中，37 6h，大而均勻成串的圓球 狀菌體，與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān) ，類炭疽無此現(xiàn)象 鑒定試驗(yàn) 13 接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板， 3724h 生長 受抑制不生長 串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗(yàn)： 兔血瓊脂平板 抑菌環(huán) 青霉素紙片 青霉素抑制試驗(yàn) 串珠形成區(qū) 14 噬菌體裂解試驗(yàn)：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗(yàn)：接種于含0.5%NaHCO3和10% 馬血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株 形成莢膜黏液型菌落，無毒株不形成莢膜粗糙型 菌落 毒素動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠、家兔或豚鼠皮下接種 植物凝集素試驗(yàn)：熒光或酶標(biāo)記PHA與菌體多糖反應(yīng) Ascoli熱沉淀試驗(yàn)：可作追溯性診斷 其它實(shí)驗(yàn) 15 臨床意義 l 食物中毒：含菌量達(dá)105/g以上，夏、秋季多 見，中毒食物大多無腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感 官性狀正常，應(yīng)引起注意 嘔吐型耐熱腸毒素 腹瀉型不耐熱腸毒素 l 全眼球炎（外傷后） l 心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎 蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus 16 蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus 形態(tài)：革蘭陽性大桿菌、兩端鈍圓 、有芽胞、周鞭毛、無莢膜 培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適 溫度3035，營養(yǎng)要求不高。 普通瓊脂平板：菌落較大，灰白色， 表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有 蠟樣光澤 BAP 有溶血 卵黃平板生長迅速，培養(yǎng)3h后， 雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷 脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反 應(yīng)或卵黃反應(yīng) 17 生化反應(yīng) 葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等 卵磷脂酶+ 、VP 胨化牛乳、液化明膠， 多次傳代后生化特性?？筛淖?18 微生物學(xué)檢查 嘔吐物、殘留食物等 活菌計(jì)數(shù)接種 BM BAP 卵黃瓊脂平板 371824h 直接涂 片染色 鏡檢 動(dòng)物試驗(yàn) 生化反應(yīng)血清凝集 報(bào)告結(jié)果 19 結(jié)果解釋 l因食品暴露于空氣中，在一定程度都會(huì)受到 本菌污染，所以不能分離出該菌就認(rèn)為是引 起食物中毒的病原菌。 從食物中分離出菌數(shù)105CFU/g，提示本菌 活躍生長，構(gòu)成潛在危險(xiǎn) 從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或 )嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型 20 三、枯草芽胞桿菌 21 生物學(xué)性狀形態(tài)染色 革蘭陽性大桿菌、 兩端鈍圓 有芽胞、無莢膜、 有鞭毛 22 培養(yǎng)特性 BM：灰白色、不透明、干燥、鋸 齒狀粗糙大菌落 BAP：溶血大菌落 23 生化反應(yīng) 觸酶+ 葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖 串珠試驗(yàn) 卵磷脂酶 24 炭疽芽胞桿菌與其他需氧芽胞桿菌的鑒別 鑒別項(xiàng)目 炭疽芽胞桿菌 枯草芽胞桿菌 蠟樣及其他芽胞桿菌 形態(tài) 菌體兩端平截、長鏈 兩端鈍園、短鏈 兩端鈍園、短鏈 莢膜 多肽莢膜 動(dòng)力 + + 菌落 卷發(fā)狀，有毒株為M型 鋸齒狀、R型 蠟樣或R型 肉湯生長 絮狀沉淀、上層清 形成菌膜 均勻混濁有菌膜 卵磷脂酶 + + 溶血反應(yīng) 不溶或微溶血 溶血 溶血 Ascolis試驗(yàn) + 串珠試驗(yàn) + 青霉素抑制試驗(yàn) + 植物凝集素試驗(yàn) + 莢膜腫脹試驗(yàn) + 熒光抗體染色 動(dòng)物毒力試驗(yàn) + 蠟樣芽胞桿菌的腸毒素可致 小鼠等動(dòng)物發(fā)病致死，但不產(chǎn)生莢膜，其他需氧芽胞桿菌（） 噬菌體裂解試驗(yàn) + 25 李斯特菌屬 產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌 紅斑丹毒絲菌 26 一、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌 生物學(xué)性狀 革蘭陽性短小桿菌成雙排列 有鞭毛（1820有動(dòng)力； 37動(dòng)力緩慢），無芽胞，無 莢膜 4可生長 BAP：灰白色菌落，有狹窄的 溶血環(huán) 半固體培養(yǎng)基：倒傘形生長 27 生化反應(yīng) 發(fā)酵多種糖類 硝酸鹽還原試驗(yàn) 甲基紅+ VP試驗(yàn)+ 抵抗力 n耐堿不耐酸 n對(duì)熱敏感 n對(duì)多種抗生素敏感（ 首選氨芐青霉素） 對(duì)磺胺、桿菌肽、多 粘菌素耐藥 28 臨床意義 主要引起腦膜炎、敗血癥 傳播途徑：糞口途徑，胎盤和產(chǎn)道 致病因子：溶血素和菌體表面成分 29 微生物檢查 標(biāo)本 涂片革蘭 染色鏡檢 熒光抗 體染色 動(dòng)力檢查 （25，37） 血液 肉湯增菌 腦脊液 沉淀物 咽喉拭子 、組織、 糞便冷增 菌 接種羊血瓊脂平板 生 化 反 應(yīng) 血清學(xué)試驗(yàn) 動(dòng)物試驗(yàn) 30 二、紅斑丹毒絲菌 革蘭陽性桿菌，無芽胞，無鞭毛，無莢膜 厭氧或微需氧 BAP：形成兩種菌落光滑型小菌落和粗造型大菌 落。 發(fā)酵葡萄糖及乳糖、液化明膠、產(chǎn)生硫化氫 主要引起家畜感染及人類丹毒 31 加德納菌屬 陰道加特納菌 32 生物學(xué)性狀 多形性，單個(gè)或成雙排列，染色不定（視菌 齡和菌種而定：臨床株G+，保存株 G）， 無芽胞、無莢膜、無鞭毛 兼性厭氧，營養(yǎng)要求高，BAP：可有溶血 葡萄糖、麥芽糖、蔗糖 氧化酶、觸酶 對(duì)青霉素類敏感、對(duì)磺胺類耐藥 33 臨床意義 與非特異性陰道炎（BV）有關(guān) BV是陰道內(nèi)乳酸桿菌被另一組厭氧 菌為主的細(xì)菌取代，同時(shí)伴有陰道分泌 物性質(zhì)改變的一組綜合征。 主要病因?yàn)殛幍纼?nèi)乳酸桿菌大量減 少，伴有陰道加特納菌、類桿菌、消化 球菌及支原體大量增殖。 34 微生物