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文檔簡介

酶聯(lián)免疫吸附實驗 (ELISA) 目的和要求 v掌握ELISA的原理、操作過程及注意事項 v了解ELISA實驗結(jié)果的讀取和分析 實驗原理 v借助酶標記抗體（或抗原）在體外與 抗原（或抗體）結(jié)合，通過相應(yīng)底物被 酶解后出現(xiàn)顯色反應(yīng)。反應(yīng)顏色深淺與 抗原（或抗體）量的多少有關(guān)。 v特點：靈敏、特異 v類型： 雙抗體夾心法、競爭法、間接法等 雙抗夾心法ELISA 競爭法 ELISA 實驗材料 vBSA包被的測定板 v酶標抗鼠IgG抗體 v待檢血清，陽性血清，陰性血清 v洗滌液： PBS吐溫-20 v底物液：鄰苯二胺（OPD） v終止液：10% H2S04 實驗步驟 加入稀釋好的待測血清每孔100ul， 37孵育40min 加入100ul酶標抗體, 37孵育30min 洗板3次,每次1min 洗板3次,每次1min 實驗步驟 加入100ulTMB底物液避光室 溫孵育15min 終止反應(yīng):每孔加1滴10硫酸 結(jié)果觀察 注意事項 u加樣：應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，并 注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 u洗板：每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘使清洗 更加徹底。末次洗板盡量將水甩干。 u液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕 輕晃動30秒，混勻液體。 u底物有毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，盡量避 免接觸。 將待測血清1:100稀釋后，再做倍比稀釋到各孔 ，每孔100l，見表。注意混勻。 1: 100 1: 200 1: 400 1: 800 1: 1600 1: 3200 1: 6400 1: 12800 陰性 血清 陰性 血清 100ul 血清稀釋及加樣 1: 100 1: 200 1: 400 1: 800 1: 1600

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