抗腫瘤藥長春新堿pegpe聚合物膠束的課件

北京師范大學(xué)資源學(xué)院,抗腫瘤藥長春新堿PEG-PE聚合物膠束的 制備和理化性質(zhì)及體外細胞毒性的研究,PREPARATION, PHYSICOCHEMICAL CHARACTERISTICS AND IN VITRO CYTOTOXICITY OF VINCRISTINE ENCAPSULATED IN PEG-PE MICELLES,主要內(nèi)容,一、研究背景、目的和意義 二、研究內(nèi)容 三、總結(jié) 四、討論,1. 癌癥正在嚴重地威脅著人類的生命與健康 2. 抗腫瘤藥存在的問題 （1）缺乏選擇性 （2）毒副作用大 （3）存在耐藥性等 3. 聚合物膠束的特點 （1）相對粒徑較小（100nm） （2）長循環(huán)作用 （3）在腫瘤、梗塞、炎癥部位易蓄積等,一、研究背景、目的和意義,研究背景,一、研究背景、目的和意義,研究背景,4. 聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺（PEG-PE） （1）與PEG修飾的脂質(zhì)體相比，PEG-PE膠束能更有效 地使藥物在截留尺寸小的腫瘤部位釋放。 （2）能裝載多種水溶性差的抗腫瘤藥物，粒徑為560 nm，顯示了較高的腫瘤組織分布率和良好的抗腫 瘤效果。 5. 模型藥長春新堿（Vincristine，VCR） （1）臨床上常用的抗腫瘤藥物（急性淋巴細胞白血病、 何杰金及非何杰金淋巴瘤 ） （2）較大的神經(jīng)系統(tǒng)毒性和局部組織刺激性,本課題首次用PEG-PE包載水溶性較強的抗腫瘤藥VCR，制備包載VCR 的PEG-PE膠束（VCR/PEG-PE膠束），以期提高VCR的抗腫瘤活性，降低其毒副作用。,一、研究背景、目的和意義,研究目的和意義,VCR/PEG-PE 膠束的制備,VCR/PEG-PE膠束 體外細胞毒性研究,VCR/PEG-PE膠束 理化性質(zhì)的研究,二、研究內(nèi)容,研究內(nèi)容,含量測定分析方法研究 評價指標建立(包封率） 處方工藝篩選(藥/脂）,外觀形態(tài) 粒徑與粒度分布 耐稀釋性 穩(wěn)定性 體外釋放,人乳腺癌細胞MCF-7 （以游離VCR 作對比）,2.1 VCR/PEG-PE膠束的制備,VCR溶液配制 （無水乙醇/三乙胺） 10mgmL-1,PEG-PE溶液 配制（三氯甲烷） 20mgmL-1,旋轉(zhuǎn)蒸干 形成一層薄膜,減壓真空 干燥過夜,HBS水化，濾過(0.2m),+,圖1 VCR/PEG-PE膠束制備工藝流程圖,5mmol L-1 HEPES 0.9%NaCl, pH 7.0,遮光，4保存 VCR終濃度：2mgmL-1,VCR的含量測定方法學(xué)的研究,色譜柱：Discovery C18色譜柱（250mm4.6mm，5m） 流動相：甲醇-0.01molL-1磷酸二氫鈉水溶液（70:40，pH 7.0） 流速：1.0mLmin-1 進樣量：20L 檢測波長：298nm VCR保留時間 ：約13min,色譜條件,2.1 VCR/PEG-PE膠束的制備,A,圖2 VCR對照品（A）和VCR/PEG-PE膠束樣品（B）HPLC色譜圖,B,VCR的含量測定方法學(xué)的研究,色譜圖,圖3 空白載體HPLC色譜圖,VCR的含量測定方法學(xué)的研究,方法專屬性試驗,Y=390587X + 1451.5 r=0.9997,圖4 VCR標準曲線,VCR的含量測定方法學(xué)的研究,線性關(guān)系考察,包封率的測定,VCR的總量（F總） 游離VCR的量（F游離） 取樣量：200L 離心過濾管：MWCO 30K Da 離心濾過：10,000 r.min-1，15min 包封率計算公式,2.1 VCR/PEG-PE膠束的制備,載體用量的考察,表1 不同載體用量對包封率的影響,2.1 VCR/PEG-PE膠束的制備,VCR/PEG-PE膠束的含量測定,表2 三批樣品含量測定結(jié)果,2.1 VCR/PEG-PE膠束的制備,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,外觀形態(tài),圖5 VCR/PEG-PE膠束的透射電鏡照片,粒徑和粒度分布,圖6 VCR/PEG-PE膠束的粒度分布圖 （平均粒徑：11.1nm ）,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,耐稀釋實驗,表3 VCR/PEG-PE膠束耐稀釋實驗結(jié)果,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,穩(wěn)定性考察,表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,體外釋藥實驗,樣品：VCR 1mgmL-1 HBS溶液 含50%胎牛血清（FBS）的HBS溶液 透析袋： MWCO 1200014000Da 轉(zhuǎn)速：50rmin-1,體外釋放方法,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,釋放介質(zhì)：150mL HBS 取樣時間：0.5、1、2、4、6、12、24h 檢測方法：HPLC法 計算公式：,體外釋藥實驗,體外釋放方法,2.2 VCR/PEG-PE膠束的理化性質(zhì)的研究,VCR/PEG-PE膠束在HBS和含50%FBS的HBS （pH 7.0）中的釋放結(jié)果,體外釋藥實驗,結(jié)果,體外釋藥實驗,釋放模型擬合,表5 釋放模型方程,表6 VCR/PEG-PE膠束在HBS（pH 7.0）中的體外釋放擬合結(jié)果,體外釋藥實驗,釋放模型擬合結(jié)果,表7 VCR/PEG-PE膠束在50%FBS的HBS中的體外釋放擬合結(jié)果,體外釋藥實驗,釋放模型擬合結(jié)果,2.3 VCR/PEG-PE膠束的體外細胞毒性研究,細胞： MCF-7細胞 接種細胞數(shù) 3103/孔，96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h 藥物處理 濃度：0.1、 0.4、1.6、3.2、6.4、12.8nmolL-1 100L/孔，培養(yǎng)72 h,四唑鹽比色法（MTT法）,VCR和VCR/PEG-PE膠束對MCF-7細胞的存活率的影響,MTT法,測定結(jié)果,三、總 結(jié),本課題首次用PEG-PE 聚合物制備了包載水溶性較 強的VCR膠束，并對其制備工藝、理化性質(zhì)和體外 細胞毒性進行了研究。 VCR/PEG-PE膠束為透明的乳濁狀懸液，粒度分布 窄而均一，平均粒徑為11.1nm；包封率為94.67%。 VCR/PEG-PE膠束具有較強的耐稀釋性，稀釋1000 倍，于37孵育6h，仍有70%以上的藥物以膠束的 形式存在。,VCR/PEG-PE膠束遮光，于4保存，考察30天，外 觀性狀、藥物含量和包封率都很穩(wěn)定。 VCR/PEG-PE膠束在HBS和含50%FBS的HBS（pH 7.0）中釋藥緩慢，且無突釋現(xiàn)象，并均符合一級動力 學(xué)釋藥模型。 VCR/PEG-PE膠束可提高VCR的細胞毒性，其IC50值 為2.160.25nmolL-1，比游離VCR的IC50值（2.730.44nmolL-1） 低。,三、總 結(jié),一般都認為PEG-PE適合用于包載難溶于水的藥物， 不適合于包載水溶性藥物。本實驗中，以不同摩爾 比制得的VCR/PEG-PE膠束均具有較高的包封率 （94% 以上），表明PEG-PE膠束可以較好地包載水 溶性較強的VCR，結(jié)合其它的實驗結(jié)果，提示PEG- PE膠束在包載水溶性藥物方面具有較好的應(yīng)用前景。,四、討 論,VCR從PEG-PE膠束中釋放緩慢、穩(wěn)定，經(jīng)PEG-PE 包載后能提高體外細胞毒性，提示該載藥系統(tǒng)在腫 瘤治療中具有很大的潛力，因此，對VCR/PEG-PE 膠束的體內(nèi)抗腫瘤活性值得進一步研究。,四、討 論,衷心感謝我的導(dǎo)師王永炎教授和吳建梅副教授這三年來對我學(xué)業(yè)和科研等多方面的精心指導(dǎo)和鼓勵！ 衷心感謝資源藥物與中藥資源研究所的張文生副教