GB 29689-2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法.pdf

ICS G 中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn) GB 296892013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 Determination of Thiamphenicol residues in milk by High Performance Liquid Chromatographic method （電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013-09-16 發(fā)布 2014-01-01 實(shí)施 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布 I 目目 次次 目 次 . I 前 言 II 牛奶中甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 1 范圍 2 規(guī)范性引用文件 3 原理 4 試劑和材料 5 儀器和設(shè)備 6 樣品的制備與保存 6.1 樣品的制備 . 6.2 樣品的保存 . 7 測(cè)定步驟 7.1 提取 . 7.2 凈化 . 7.3.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備 7.4 高效液相色譜測(cè)定 . 7.5 空白試驗(yàn) . 8 結(jié)果計(jì)算和表述 . 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 9.1 靈敏度 . 9.2 準(zhǔn)確度 . 9.3 精密度 . 附錄 A II 前前 言言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國(guó)內(nèi)首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。 牛奶中甲砜霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 1 范圍范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛奶中甲砜霉素殘留量檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛奶中甲砜霉素殘留量的檢測(cè)。 2 規(guī)范性引用文件規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。 凡是注日期的引用文件， 其隨后所有的 修改單（不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究 是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 GB/T 1.1-2000 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理原理 試料中殘留的甲砜霉素，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，C18柱凈化，高效液相色譜-紫外測(cè)定， 外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料試劑和材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純，水為符合 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 4.1 甲砜霉素對(duì)照品：含量99.0。 4.2 乙酸乙酯 4.3 正己烷 4.4 乙腈：色譜純。 4.5 C18固相萃取柱：200 mg/3 mL，或相當(dāng)者。 4.6 1 mg/mL 甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取甲砜霉素對(duì)照品 10 mg，于 10 mL 量瓶中，用乙腈溶解 并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。28保存，有效期 1 個(gè)月。 4.7 10 g/mL 甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密量取 1 mg/mL 甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1.0 mL，于 100 mL 量瓶 中，用流動(dòng)相稀釋，配制成濃度為 10 g/mL 的甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。 5 儀器和設(shè)備儀器和設(shè)備 5.1 高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。 5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。 5.3 天平：感量 0.01 g。 5.4 離心機(jī) 5.5 固相萃取裝置。 5.6 氮?dú)獯蹈蓛x。 5.7 振蕩混合器。 5.8 雞心瓶：150 ml。 5.9 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 5.10 具塞塑料離心管：50 mL。 5.11 濾膜：0.45 m。 6 試料試料的制備與保存的制備與保存 6.1 試料的制備 取適量新鮮或冷藏的空白或供試牛奶，混合均勻。 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。 取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為空白添加試料。 6.2 試料的保存 -20以下保存。 7 測(cè)測(cè)定步驟定步驟 7.1 提取 稱取試料（5 0.05）g，于 50 mL 離心管中，加乙酸乙酯 20 mL，振蕩 10 min，4 000 r/min 離心 5 min，取上清液于雞心瓶中，殘?jiān)屑右宜嵋阴?20 mL，重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，于 45旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加水 5 mL 于雞心瓶中，超聲 5 min 使充分溶解，轉(zhuǎn)至 50 mL 離心管中。再加水 5 mL 于雞心瓶中重復(fù)溶解后轉(zhuǎn)至同一離心管中。加 20 mL 正己烷，振蕩 5 min，4 000 r/min 離心 2 min，取 下層液備用。 7.2 凈化 C18柱依次用乙腈 5 mL 和水 5 mL 活化。取備用液過(guò)柱，控制流速 1 mL/min，擠干。用乙腈 5 mL 洗脫，收集洗脫液，于 45氮?dú)獯蹈?，用流?dòng)相 1.0 mL 溶解殘余物，濾膜過(guò)濾，供高效液相色譜測(cè) 定。 7.3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取 10 g/mL 甲砜霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，用流動(dòng)相稀釋，配制成濃度為 20、50、125、250 和 500 g/L 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測(cè)定。以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 7.4 高效液相色譜測(cè)定 7.4.1 色譜條件 色譜柱：C18（250 mm 4.6 mm，粒徑 5 m） ，或相當(dāng)者； 流動(dòng)相：乙腈+水（20+80，v/v)，使用前經(jīng)濾膜過(guò)濾，超聲； 流速：1.0 mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm； 柱溫：30； 進(jìn)樣量：20 L。 7.4.2 測(cè)定法 取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣 溶液中甲砜霉素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白組織添加 試樣溶液的高效液相色譜圖分別見(jiàn)附錄 A。 7.5 空白試驗(yàn) 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果結(jié)果計(jì)算和表述計(jì)算和表述 試料中甲砜霉素的殘留量（g/kg） ：按下式計(jì)算： X m VC 式中： X - 供試試料中甲砜霉素的殘留量，g/kg； C - 試樣溶液中甲砜霉素的濃度，ng/mL； V - 溶解殘余物流動(dòng)相體積，mL； m - 供試試料質(zhì)量，g。 注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 9.1 靈敏度 本方法的檢測(cè)限為 10 g/kg，定量限為 10 g/kg。 9.2 準(zhǔn)確度 本方法在 10100 g/kg