細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法研討

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法1 目的該SOP用來判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素是否符合規(guī)定。2適用范圍該SOP適用于中國獸藥典要求檢查該項(xiàng)的藥品和適合中國獸藥典要求的其它品種的藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。3職責(zé)進(jìn)行該項(xiàng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)員應(yīng)該按該SOP進(jìn)行檢驗(yàn)，檢測室主任負(fù)責(zé)監(jiān)督該SOP的正確執(zhí)行。4檢驗(yàn)4.1 技術(shù)依據(jù)及原理本法系用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)即內(nèi)毒素在二價(jià)陽離子的參與下，作用于鱟血凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生的一系列酶聯(lián)反應(yīng)，最后形成凝膠，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定。4.1.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)的目的不僅是考查鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)是否準(zhǔn)確，也是考查檢驗(yàn)人員操作方法是否正確和實(shí)驗(yàn)條件是否符合規(guī)定。因此要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)室在將一批新的鱟試劑用于干擾試驗(yàn)或供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。4.1.2 供試品干擾試驗(yàn)項(xiàng)用于建立新品種細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法以及供試品的配方和工藝有變化，鱟試劑來源不同或供試品陽性對照結(jié)果呈陰性時(shí)確定供試品是否存在抑制或增強(qiáng)作用。4.1.3 檢查法項(xiàng)為供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。陰性對照、陽性對照和供試品陽性對照必須同時(shí)進(jìn)行，否則試驗(yàn)結(jié)果無效。4.2 注意事項(xiàng)4.2.1 實(shí)驗(yàn)前，須用肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒4.2.2 實(shí)驗(yàn)時(shí)，須戴工作帽和口罩。尤其在配制洗液和洗滌玻璃器皿時(shí)一定要戴手套、工作帽和口罩。4.2.3 試驗(yàn)應(yīng)在潔凈室或潔凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。4.2.4 用移液管或刻度吸管等吸取樣品時(shí)，須使用洗耳球，勿用嘴吸、吹，防止唾液濺入。也可使用加樣器等其它方法。4.2.5 注意所用鱟試劑的批號(hào)、有效期、規(guī)格、靈敏度等。4.2.6 進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)對照和供試品陽性對照（含供試品的內(nèi)毒素溶液）應(yīng)同時(shí)進(jìn)行。4.2.7 在進(jìn)行靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)和供試品內(nèi)毒素檢查時(shí)，各個(gè)實(shí)驗(yàn)所要求的對照應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，并在有效的條件下才能進(jìn)行計(jì)算和判斷。4.3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求4.3.1 天平 供試品稱量用，感量為0.1mg以下。4.3.2 電熱干燥箱 除外源性內(nèi)毒素用，溫度應(yīng)能維持250以上至少一小時(shí)。4.3.3 恒溫水浴箱或適宜的恒溫器，應(yīng)能在371保持一小時(shí)。4.3.4 水銀溫度計(jì)或酒精溫度計(jì)，精度在1以下。4.3.5 旋渦混合器4.3.6 鱟試劑，應(yīng)具有國家主管部門的批準(zhǔn)文號(hào)。4.3.7 細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品（NSE），細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（WSE）。4.3.8 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水） 系指與靈敏度為0.03Eu/ml或更高靈敏度的鱟試劑在371條件下不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水。4.3.9 實(shí)驗(yàn)用具 移液管（或刻度吸管，定量移液器）、凝集管（1075mm）、三角瓶、小試管（16100mm）、試管架、洗耳球、封口膜或金屬試管帽、時(shí)鐘、脫脂棉、吸水紙、剪刀、砂輪。所用玻璃器皿須經(jīng)250干烤至少1小時(shí)。塑料用具應(yīng)使用其它適宜的除細(xì)菌內(nèi)毒素方法。4.3.10 試劑 75%乙醇、純化水、鉻酸洗液。4.4 檢驗(yàn)步驟4.4.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備4.4.1.1 洗液的配制 配制鉻酸洗液或其他適宜的細(xì)菌內(nèi)毒素滅活劑。4.4.1.2 玻璃器皿的洗滌 將被洗滌的玻璃器皿用洗滌劑和自來水洗凈并空干水分后置洗液中浸泡4小時(shí)，取出將洗液濾干，用自來水將殘余的洗液洗凈，再用新鮮純化水沖洗干燥后置適宜的密閉金屬容器中，迅速置烤箱中。4.4.1.3 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性內(nèi)毒素 玻璃器皿置烤箱后將烤箱調(diào)至250，待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始記時(shí)，須干烤至少1小時(shí)。達(dá)到規(guī)定時(shí)間后，關(guān)斷電源。待烤箱溫度自然降至室溫，在不開啟金屬容器的情況下，可在兩周內(nèi)使用，否則須再次加熱除去可能存在的外源性內(nèi)毒素。4.4.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核4.4.2.1 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備4.4.2.1.1 取NSE或WSE一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。4.4.2.1.2 按標(biāo)準(zhǔn)品使用說明書用移液管加入規(guī)定量的BET水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)。置旋渦混合器上混合15分鐘，然后制備成所需濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液即2.0、1.0、0.5、0.25（為所復(fù)核鱟試劑的標(biāo)示靈敏度），每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒（詳細(xì)過程請參見使用說明書）。若為NSE，可按其使用說明書將其稀釋至規(guī)定濃度后分裝并保存。例如使用NSE（內(nèi)毒素含量為9000EU/支）時(shí)的方法如下：復(fù)溶：準(zhǔn)確吸取BET水1ml加入NSE的安瓿內(nèi)，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置旋渦混合器混合15分鐘，即為9000EU/ml內(nèi)毒標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液。稀釋：取0.3ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液加上2.7mlBET水即為110稀釋液，得到900EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液。取0.3ml110稀釋液，加上2.7mlBET水即為1100稀釋液，得到90EU/ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。往后依次類推，也可寫成下列格式：0.3ml 0.3ml 0.3ml 0.3ml 1ml 1ml9000EU/ml 900EU/ml 90EU/ml 9EU/ml 1EU/ml0.5EU/ml 2.7ml 2.7ml 2.7ml 2.4ml 1ml 1ml1ml 1ml 1ml0.25EU/ml 0.125EU/ml 0.0625EU/ml 0.03125EU/ml1ml 1ml 1ml在上述稀釋過程中，每稀釋一步，均須在旋渦混合器上混合30秒鐘。4.4.2.2 待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備4.4.2.2.1 在制備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的同時(shí)，取0.1ml/支的鱟試劑18支輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底。用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%乙醇棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)，加入0.1mlBET水復(fù)溶，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。4.4.2.2.2 若待復(fù)核鱟試劑的規(guī)格不是0.1ml/支時(shí)，按標(biāo)示量加入BET水復(fù)溶，將復(fù)溶后的鱟試劑溶液混勻后每0.1ml分配到1075mm凝聚管中，要求至少分配18管備用。4.4.2.3 加樣4.4.2.3.1 將已充分溶解的待復(fù)核鱟試劑18支（管）放在試管架上，排成5列，其中4支（管）4列分別加入2.0、1.0、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液；2支（管）1列分別加入BET水。內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液和BET水的加樣量均為0.1ml/支。4.4.2.4 加樣結(jié)束后，用封口膜封口，輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，連同試管架放入371水浴或適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫602分鐘，觀察結(jié)果。4.4.3 干擾試驗(yàn)4.4.3.1 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定4.4.3.1.1 按供試品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限值4.4.3.1.2 供試品最大有效稀釋倍數(shù)的計(jì)算：MVDCL/L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，為測試用鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值，C表示供試品的濃度，或供試品復(fù)溶后所得溶液的濃度。當(dāng)L以EU/ml表示時(shí)C為1.0ml/ml，當(dāng)L以EU/mg或EU/u表示時(shí)，C為mg/ml或u/ml。如需計(jì)算供試品的測試濃度C，可設(shè)MVD為1。4.4.3.2 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備同4.4.2.1。4.4.3.3 含供試品的內(nèi)毒素溶液的制備4.4.3.3.1 根據(jù)供試品的限值（L）和使用鱟試劑的靈敏度（）計(jì)算供試品測試濃度（C）或MVD。4.4.3.3.2 將供試品稀釋，其稀釋倍數(shù)不應(yīng)超過MVD，并通過預(yù)試驗(yàn)確定正式試驗(yàn)供試品測試濃度。4.4.3.3.3 在制備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的同時(shí)用未檢出內(nèi)毒素的供試品溶液或其不超過最大有效稀釋倍數(shù)的稀釋液將WSE以相同方法制備成所需濃度的含供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液（2.0、1.0、0.5、0.25）。4.4.3.3.4 簡化法制備含供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液 取0.5ml內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)液（1.0EU/ml）0.5ml供試品溶液（10mg/ml）1ml0.5EU/ml（5mg/ml）含供試品內(nèi)毒素溶液。同理分別用0.5ml濃度為0.5EU/ml、0.25EU/ml和0.125EU/ml的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液加入0.5ml濃度為10mg/ml的供試品溶液制備0.25EU/ml、0.125EU/ml和0.0625EU/ml含5mg/ml濃度的供試品陽性對照溶液（其體積大小根據(jù)試驗(yàn)所需量而定）。4.4.3.4 鱟試劑的準(zhǔn)備4.4.3.4.1 在制備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對照溶液和含供試品的內(nèi)毒素溶液的同時(shí)，取0.1ml/支的鱟試劑36支輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)，加入0.1mlBET水復(fù)溶，輕輕搖動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。4.4.3.4.2 若鱟試劑的規(guī)格不是0.1ml/支時(shí)，按標(biāo)示量加入水復(fù)溶，將復(fù)溶后的鱟試劑混勻后每0.1ml分配到1075mm凝集管中，要求至少分配36管備用。4.4.3.5 加樣4.4.3.5.1 將準(zhǔn)備好的鱟試劑18支（管）放在試管架上，排成5列，其中4支（管）4列分別加入2.0、1.0、0.5、0.25的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對照溶液；2支（管）1列加入BET水。4.4.3.5.2 將準(zhǔn)備好的另外18支（管）放在試管架上，排成5列，其中4支（管）4列分別加入2.0、1.0、0.5、0.25的含供試品的內(nèi)毒素溶液；2支（管）1列加入供試品溶液。4.4.3.5.3 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液和BET水、含供試品的內(nèi)毒素溶液和供試品溶液的加樣量均為0.1ml。4.4.3.6 加樣結(jié)束后，用封口膜封口，輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，連同試管架放入恒溫水浴或適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)保溫602分鐘后，觀察結(jié)果。4.4.3.7 在進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)前可進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，用L和（通常用0.50.03EU/ml）計(jì)算出C的范圍，以12的濃度比例，制備含2和0.25的系列濃度供試品溶液，每一濃度取2支（管）鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，判定無干擾濃度進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。4.4.4 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查4.4.4.1 供試品溶液的制備4.4.4.1.1 計(jì)算 MVDCL/。C、L、的意義同4.4.3.1.24.4.4.1.2 稀釋 其稀釋倍數(shù)不得超過MVD。4.4.4.2 陽性對照溶液的制備 按4.4.2.1用BET水制成2濃度的內(nèi)毒素溶液。4.4.4.3 供試品陽性對照液的制備 用被測供試品將WSE制成2濃度的內(nèi)毒素溶液。方法同4.4.3.3含供試品的內(nèi)毒素溶液制備。其中利用簡化法時(shí)，由于供試品原液必須稀釋一倍，采用的鱟試劑靈敏度要提高一倍（如輸液），供試品濃度也相應(yīng)調(diào)整。4.4.4.4 鱟試劑的制備4.4.4.4.1 在制備供試品溶液、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品陽性對照溶液的同時(shí)，取0.1ml/支的鱟試劑5支，手指輕彈瓶壁，使頸部瓶壁上的粉末落入瓶內(nèi)，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%乙醇棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)，加入0.1mlBET水復(fù)溶，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。4.4.4.4.2 若使用的鱟試劑的規(guī)格不是0.1ml/支時(shí)，按標(biāo)示量加入BET水復(fù)溶，將復(fù)溶后的鱟試劑溶液混勻后每0.1ml分配到1075mm凝集管中，要求至少分配5管備用。4.4.4.5 加樣取裝有0.1ml鱟試劑溶液的1075mm試管或復(fù)溶后的0.1ml/支規(guī)格的鱟試劑原安瓿5支，其中2支加入0.1ml按最大有效稀釋倍數(shù)稀釋的供試品溶液作為供試品管，1支加入0.1ml用BET水將WSE制成的2濃度的內(nèi)毒素溶液作為陽性對照，1支加入0.1mlBET水作為陰性對照，1支加入0.1ml供試品陽性對照溶液（相當(dāng)于用被測供試品溶液將WST制成2濃度的內(nèi)毒素溶液）作為供試品陽性對照管。4.4.4.6 將試管中溶液輕輕混勻后，用封口膜閉管口，垂直放入371水浴或適宜恒溫器中，試管保持水平狀態(tài)保溫602分鐘。保溫和拿取試管過程應(yīng)避免受到震動(dòng)，造成假陰性結(jié)果。4.4.4.7 將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性，記錄為（）；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（）。4.5 實(shí)驗(yàn)記錄與計(jì)算4.5.1 記錄格式如下： 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)記錄（一三綜合記錄）一、鱟試劑批 號(hào)：靈敏度： EU/ml供樣單位：規(guī)格： ml/支（瓶）生產(chǎn)單位：失效日期： 年 月 日檢驗(yàn)?zāi)康模红`敏度復(fù)核室溫： 檢驗(yàn)依據(jù)：中國獸藥典 年版檢驗(yàn)日期： 年 月 日檢驗(yàn)數(shù)量： 支（瓶）二、標(biāo)準(zhǔn)品NSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：WSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：BET水批號(hào) ml/支 來源：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶時(shí)的體積為 ml；稀釋方法為：三、反應(yīng)結(jié)果（反應(yīng)起止時(shí)間： ）內(nèi) 毒 素 濃 度 2 0.5 0.25 （ ） （ ） （ ） （ ）陰性對照反應(yīng)終點(diǎn)濃度重 1復(fù) 2管 3數(shù) 4結(jié)果是否有效計(jì)算結(jié)果：結(jié)果判斷檢驗(yàn)人員簽名校對人員簽名干擾試驗(yàn)記錄（一五綜合記錄）一、供試品檢品名稱：檢品數(shù)量： 支（瓶）批 號(hào)：規(guī) 格：生產(chǎn)單位：供樣單位：檢驗(yàn)?zāi)康模焊蓴_試驗(yàn)檢驗(yàn)依據(jù)：中國獸藥典 年版供試品溶液的制備：二、鱟試劑批 號(hào)：靈敏度： EU/ml供樣單位：規(guī) 格： ml/支（瓶）生產(chǎn)單位失效日期： 年 月 日靈敏度復(fù)核日期；結(jié)果： EU/ml三、標(biāo)準(zhǔn)品NSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：WSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：BET水批號(hào)： ml/支 來源：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶時(shí)的體積為 ml；稀釋方法為：四、含供試品內(nèi)毒素溶液的制備五、反應(yīng)結(jié)果（反應(yīng)起止時(shí)間： ）內(nèi) 毒 素 濃 度 2 0.5 0.25 （ ） （ ） （ ） （ ）陰性對照反應(yīng)終點(diǎn)濃度重 1標(biāo)準(zhǔn)復(fù) 2對照管 3數(shù) 4重 1供試復(fù) 2品陽管 3性對數(shù) 4照結(jié)果是否有效計(jì)算結(jié)果：結(jié)果判斷檢驗(yàn)人員簽名校對人員簽名供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（一五綜合記錄）一、供試品檢品名稱：檢品數(shù)量： 支（瓶）批 號(hào)：規(guī) 格：生產(chǎn)單位：供樣單位：檢驗(yàn)?zāi)康模簝?nèi)毒素檢查 檢驗(yàn)依據(jù)：中國獸藥典 年版檢驗(yàn)人員：校對人員供試品溶液的制備：二、鱟試劑批 號(hào)：標(biāo)示靈敏度： EU/ml供樣單位：規(guī) 格： ml/支（瓶）生產(chǎn)單位：失效日期： 年 月 日靈敏度復(fù)核日期：復(fù)核結(jié)果： EU/ml三、標(biāo)準(zhǔn)品NSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：WSE批號(hào)：效價(jià)： EU 來源：BET水批號(hào)： ml/支 來源：內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶時(shí)的體積為 ml；稀釋方法為：四、供試品陽性對照溶液的制備五、反應(yīng)結(jié)果（反應(yīng)起止時(shí)間： ）供 試 品 管供試品管陰性對照2.0供試品陽性對照結(jié)果是否有效結(jié) 果結(jié)果判斷檢驗(yàn)人員簽名校對人員4.5.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核如最大濃度2.04管均為陽性，最低濃度0.254管均為陰性，陰性對照為陰性，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鱟試劑靈敏度的復(fù)核結(jié)果（C）。clg1（X/4）式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值（lg）。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列濃度遞減的內(nèi)毒素溶液中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度。4.5.3 干擾實(shí)驗(yàn)如標(biāo)準(zhǔn)溶液最大濃度2.04管均為陽性，最低濃度0.254管均為陰性，陰性對照為陰性，按下式計(jì)算用BET水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（Es）和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值（Et）。Eslg1（Xs/4）Etlg1（Xt/4）式中Xs、Xt分別為BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值（lg）。4.6 結(jié)果判定4.6.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核當(dāng)c在0.52.0（包括0.5和2.0）時(shí)，方可用于干擾實(shí)驗(yàn)和供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以（標(biāo)示靈敏度）為該批鱟試劑的靈敏度。4.6.2 干擾實(shí)驗(yàn)當(dāng)Es在0.52.0（包括0.5和2.0）時(shí)，且當(dāng)Et在0.5Es2.0Es（包括0.5Es2.0Es）時(shí)，則認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾實(shí)驗(yàn)，否則使用更靈敏的鱟試劑，對供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，這是排除干擾因素的簡單有效的方法（也可采用過濾法，干擾因素去除法等其他方法）。建立新品種細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法時(shí)，每個(gè)廠家至少取三個(gè)批號(hào)（不包括亞批）的供試品，用兩個(gè)以上生產(chǎn)廠家的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。若各批供試品干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果差別較大時(shí)應(yīng)考慮供試品內(nèi)毒素的影響。若鱟試劑的來源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時(shí)，須重復(fù)進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。4.6.3 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品2管均為（），應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定。如2管均為（+），應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2管中1管為（+），1管為（），按上述方法另取4支供試品復(fù)試，4管中1管為（+），即認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結(jié)果出現(xiàn)2管為（+）或2管中1管為（+），1管為（）時(shí)，按同樣方法復(fù)試和判定，復(fù)試時(shí)要求將其稀釋至MVD。陽性對照為（）或供試品陽性對照為（）或陰性對照為（+），試驗(yàn)無效。4.7 結(jié)果計(jì)算和判斷舉例4.7.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核設(shè)待復(fù)核的鱟試劑的標(biāo)示靈敏度為0.125EU/ml。內(nèi)毒素濃度EU/ml0.250.1250.06250.03125