食品中細(xì)菌菌落總數(shù)的測(cè)定.ppt

菌落總數(shù)的測(cè)定 (GB 4789.22010),一、 目的 1、 學(xué)習(xí)并掌握食品中菌落總數(shù)測(cè)定方法和原理。 2 、了解菌落總數(shù)測(cè)定在對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)中的意義 。,二、原理 1.菌落總數(shù):是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中形成的細(xì)菌菌落總數(shù)。以 CFU/g（mL）來(lái)表示。 一定條件包括培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)間、pH、是否需要氧氣等。,2 .菌落總數(shù)測(cè)定的衛(wèi)生學(xué)意義 （1）菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。,（2） 食品中細(xì)菌菌落總數(shù)越多，則食品含有致病菌的可能性越大，食品質(zhì)量越差；菌落總數(shù)越小，則食品含有致病菌的可能性越小。須配合大腸菌群和致病菌的檢驗(yàn)，才能對(duì)食品做出較全面的評(píng)價(jià)。,三 、 材料,試劑： 0.5mol/L NaOH 100ml：稱2gNaOH加蒸餾水定容至100ml，分裝。 0.85% 生理鹽水 300ml ：稱2.55g*組別NaCL 加蒸餾水定容至300ml*組別，分裝。,需滅菌器材： 1.試管1.5*15cm 3支 每支試管裝9ml生理鹽水 ，塞上硅膠塞，報(bào)紙包扎 2.500ml錐形瓶 1個(gè) 加225ml生理鹽水 加棉塞，報(bào)紙包扎 3.吸量管桶（兩組共用一個(gè)） 裝12支1ml吸量管 4.培養(yǎng)皿桶 裝10-12個(gè)培養(yǎng)皿（裝滿） 每組1個(gè)，共十個(gè)，剩下的組別自己用報(bào)紙包扎培養(yǎng)皿 5.培養(yǎng)基：胰蛋白胨0.75g 酵母浸膏0.375g 葡萄糖0.15g 瓊脂2.25g 蒸餾水 150ml 裝入250ml的錐形瓶，加棉塞，報(bào)紙包扎 6.研缽 1個(gè)、杵子1個(gè)、膠頭滴管橡膠頭2個(gè) 用報(bào)紙包扎 7.剪刀1把、鑷子1把用報(bào)紙包扎 8.濾紙三張，用報(bào)紙包扎,四、 流程,1、檢樣 2、做幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液 3、選擇23個(gè)適宜稀釋度各1 mL,分別加入滅菌平皿內(nèi) 4、平皿內(nèi)傾注1520 mL瓊脂培養(yǎng)基，混勻 5、36 1培養(yǎng)482小時(shí)或（242）小時(shí) 6、記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的各平板菌落數(shù)量 7、 計(jì)算菌落總數(shù) 報(bào)告,五、 步驟,(一) 取樣、稀釋和培養(yǎng) 1、 以無(wú)菌操作取檢樣25g（mL），放于225mL滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液 的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振蕩或研磨制成1:10的均勻稀釋液。 。,（二） 菌落記錄方法 做平板菌落數(shù)記錄時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平皿的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)。 到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于04，但不要超過(guò)24h。,1、 平皿菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。每一個(gè)稀釋度應(yīng)采用兩個(gè)平皿，大于300的可記為多不可計(jì)。,2、其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可以計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，以代表一個(gè)平板的菌落數(shù)。,3、當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，如呈鏈狀生長(zhǎng)的菌落之間無(wú)任何明顯界限，則應(yīng)作為一個(gè)菌落計(jì)，如存在有幾條不同來(lái)源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個(gè)菌落計(jì)算，不要把鏈上生長(zhǎng)的每一個(gè)菌落分開計(jì)數(shù)。,（三）菌落總數(shù)的計(jì)算 1、若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）中菌落總數(shù)結(jié)果。,2、若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算：,3、 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。,4、若所有稀釋度平板菌落數(shù)均30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)計(jì)算。 5、若所有稀釋度平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則應(yīng)按1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。,6、若所有稀釋度均不在30300之間，有的300，有的又30，則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。,（四） 菌落計(jì)數(shù)報(bào)告方法,1、菌落數(shù)在1100時(shí)，按四舍五入報(bào)告整數(shù)。 2、菌落數(shù) 100時(shí)，第三位數(shù)字按四舍五入計(jì)算，取前面兩位有效數(shù)字，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以10的指數(shù)表示。,3、若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。 4、 若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。 5、稱重取樣以CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL 為單位報(bào)告。,六、 結(jié)果,1、 將實(shí)驗(yàn)測(cè)出的樣品數(shù)據(jù)以表格的方式報(bào)告。 2 、對(duì)樣品菌落總數(shù)作出是否符合衛(wèi)生要求的結(jié)論。,報(bào)告方式,醬油（GB/T2717-2003）： 細(xì)菌菌落總數(shù)： 30000 CFU/mL 大腸菌群： 30MPN/100mL 腸道致病菌： 不得檢出,全脂奶粉、脫脂奶粉（GB5410-1999）： 特級(jí) 一級(jí) 二級(jí) 細(xì)菌菌落總數(shù)：20000 30000 50000 （CFU/ml） 大腸菌群 40 90 90 （MPN/100g） 腸道致病菌： 不得檢出 不得檢出 不得檢出,巴氏殺菌乳（GB5408.1-1999） 細(xì)菌菌落總數(shù)： 30000 CFU/mL 大腸菌群： 90 MPN/100mL 腸道致病菌： 不得檢出,生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006） 菌落總數(shù)cfu/ml： 100 總大腸菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得檢出 耐熱大腸菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得檢出 大腸埃希氏菌cfu/100ml或