GB15193.10-2003非程序性DNA合成試驗.pdf

ICS07.100C53中華人民共和國國家標準GB15193.102003代替GB15193.101994非程序性DNA合成試驗UnscheduledDNAsynthesistest2003-09-24發(fā)布2004-05-01實施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布中國國家標準化管理委員會GB15193.102003本標準全文強制。本標準代替GB15193.10一1994非程序性DNA合成試驗。本標準與GB15193.101994相比主要修改如下：在范圍”中增加了受試物的具體內容：食品生產、加工、保藏、運輸和銷售過程中所涉及的可能對健康造成危害的化學、生物和物理因素，檢驗對象包括食品添加劑(含營養(yǎng)強化劑）食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設備、洗滌劑、消毒劑農藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等；-在試劑”中，增加了參考陽性對照物”,7,12-二甲基苯并蔥(7.12-dimethylbenzathracene),2-乙酰氨基芬(2-acetylaminofluorene),4-硝基隆啉氧化物（4-nitroquinolineoxide）,N-甲基亞硝胺(N-dimethylnitrosamine);-在UDS的液體閃煉計數(shù)顯示法”中；增加“每組(包括對照組)至少做6個培養(yǎng)瓶。在UDS的放射自顯影顯示法”中，增加了應同時設有陽性對照組和陰性對照組,包括加S-9和不加S-9兩種情況”；增加了“結果判定”內容。自本標準實施之日起,GB15193.101994同時廢止。本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口。本標準起草單位：浙江醫(yī)科大學。本標準主要起草人：徐應年、丁辰、本標準于1994年首次發(fā)布.本次為第一次修訂。GB15193.102003非程序性DNA合成試驗范圍本標準規(guī)定了非程序性DNA合成試驗的基本技術要求本標準適用于評價食品生產、加工、保藏、運輸和銷售過程中所涉及的可能對健康造成危害的化學生物和物理因素的誘變性和/或致癌性，檢驗對象包括食品添加劑(含營養(yǎng)強化劑)食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設備、洗滌劑、消毒劑、農藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等。用這種短期篩選方法可以檢測出一些短期體外試驗法所不能檢出的誘變劑和)或致癌劑、術語和定義下列術語和定義適用于本標準27非程序性DNA合成unscheduledDNAsynthesis,UDS當DNA受損傷時,損傷修復的DNA合成主要在S期以外的其他細胞周期,稱非程序性DNA合成3原理正常情況下,于細胞有絲分裂周期中.僅S期是DNA合成期。當DNA受損傷時,損傷修復的DNA合成主要在其他細胞周期,稱程序外DNA合成,即DS.因此發(fā)現(xiàn)UDS增高.即表明DNA發(fā)生過損傷。在體外培養(yǎng)細胞中,用UDS的測量來顯示DNA修復合成的主要關鍵在于如何鑒別很高水平的半保留DNA復制和水平較低(充其量只有半保留DNA復制的5%)的UDS。這可以用同步培養(yǎng)將細胞阻斷于G1期并用藥物(常用羥基豚)抑制殘留的半保留DNA復制后顯示。同步培養(yǎng)可用缺乏必需氨基酸精氨酸的培養(yǎng)基(ADM)使DNA合成的始動受阻而使細胞同步于G1期。在這些半保留DNA合成明顯抑制和阻斷了的細胞中,UDS即可用H-胸腺喀啶核苷的摻入增加顯示。它可用放射自顯影或液體閃煉計數(shù)法進行測量試劑與器材4.1試劑全部試劑除注明外,均為分析純，試驗用水為雙蒸水4.1.1參考陽性物對照物：可用7,12-二甲基苯并意(7,12-dimethylbenzathracene),2-乙酰氨基芬（2-acctylaminofluorene)，4-硝基喹啉氧化物（4-nitroquinolineoxide），N-甲基亞硝胺(N-dimethylnitrosamine）4.1.2細胞增殖用培養(yǎng)基：Eagle氏最低要求培養(yǎng)基(MinimalEssentialMedium,簡稱EMEM)85份.小牛血清15份，加入青霉素、鏈霉素貼存液1份.使青霉素、鏈霉素的最終濃度分別為100單位及100%g/mL。iMEM培養(yǎng)基可選用各種商品供應之粉