項目二畜禽活體檢驗技術.ppt

項目二 畜禽活體檢驗技術,教學目的,熟悉畜禽流行病現(xiàn)狀特點及預防，病原菌的鑒定方法 ,病毒的分離和鑒定 掌握畜禽臨床檢疫步驟 , 病原菌的分離和培養(yǎng)方法, 各種動物臨床檢疫要點 ,病原菌的分離和培養(yǎng)方法,教學重點,教學難點,一、畜禽流行病現(xiàn)狀,1.很多病毒侵害宿主的免疫系統(tǒng) 2.動物病原體呈現(xiàn)加速變異的趨勢，畜禽間及向人類傳播的風險也越來越大 3.環(huán)境在疫病的流行中占有重要地位 4.全球氣候變暖擴大了傳染病的分布范圍,任務一 一般流行病的基本知識,二、畜禽流行病的特點,1.幼齡畜禽疫病突出 2.新的流行病增多 3.寄生蟲病是放牧牲畜的主要危害,三、畜禽流行病發(fā)生的條件及預防,傳染源 指在體內有病原體微生物、寄生蟲生長繁殖并能不斷向外界排出病原體的患病畜禽或其他動物。 傳染途徑 就是病原體由傳染源排出，經(jīng)過一定方式再傳入其他易感動物所經(jīng)過的途徑。 易感動物 是指對某種傳染病、寄生蟲病易于感染的動物。,傳染源,傳染途徑,易感動物,基本環(huán)節(jié),四、動物免疫接種,1.預防接種 為了防患于未然，平時有計劃地按一定的免疫程序給健康畜群進行的免疫接種，稱為預防接種。,2.緊急接種 和終止疾病的流行，使疫區(qū)和受威脅區(qū)尚未發(fā)病的畜禽盡快建立起特異性保護所進行的應急性免疫接種。,任務二 臨床檢疫,1.畜禽的群體檢查 靜態(tài)觀察 運動檢查 采食觀察,一、臨床檢疫步驟,2.畜禽的個體檢查 包括群體檢查時發(fā)現(xiàn)異常個 體或抽樣檢查（5%20%）的個體,1）視診 2）觸診 3）叩診 4）聽診 5）檢查體溫、脈搏、呼吸數(shù) 6）檢查滲出物、漏出物、分泌物、病理性產物的顏色、質度、氣味等,二、各種動物臨床檢疫要點,1.豬的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運動時的檢查 2）休息時的檢查 3）采食飲水狀態(tài)的檢查,2）體溫檢查 豬患急性熱性傳染病時，在病的發(fā)生和發(fā)展期，大多表現(xiàn)體溫升高，所以在豬的檢疫中，檢查體溫是個非常必要的步驟。 在檢疫中，要把檢查體溫和其它方面的檢查結合起來進行綜合判斷。,3）個體檢查 個體檢查的著眼點為 精神外貌，姿態(tài)步樣。眼、鼻、口腔及咽喉，被毛、皮膚及四蹄，肛門及排泄物，攝食及飲水，以及體溫的變化等。,2.牛的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運動時的檢查,2）休息時的檢查,3）攝食飲水時的檢查,（2）體溫檢查 牛的急性傳染病和焦蟲病等，常表現(xiàn)體溫升高，因此在牛的檢疫中，檢查體溫是一個重要步驟。 對大群牛的檢溫，一般常采用“排隊保定法”或“檢疫夾道”，在保定后再進行測溫。測溫時為5min左右，測溫后記錄每頭牛的體溫度數(shù)。當發(fā)現(xiàn)體溫異常時應做上標記，待全群檢查完畢后，再進行復檢。,（3）個體檢查 牛個體檢疫時的著眼點，除精神外貌、姿態(tài)、步樣、皮膚、被毛等處，大群檢疫時還應逐頭看牛鼻鏡是否干燥，服、鼻孔有無分泌物，嘴角是否流出唾液，被毛是否有光澤.如遇到牛排糞、尿時，也應注意觀察其糞便的性狀等。,3.羊的臨床檢查 （1）群體檢查 1）運動時的檢查,2）休息狀態(tài)的檢查,3）攝食飲水時的檢查,（2）體溫檢查 羊只的疫病常有體溫升高的表現(xiàn)。因此，在羊的臨床檢疫中，進行測溫是很重要的。 凡發(fā)現(xiàn)體溫異常者，應及時剔出進行細致的檢查。,（3）個體檢查 一般是以大群檢疫中剔出的疑似病羊為重點。此外，對可疑被感染的羊只也要做某些病的重點檢疫。 羊個體檢疫時，還要特別注意可視黏膜及分泌物、排泄物的檢查，同時注意皮膚、被毛的檢查。,4.禽的臨床檢查 （1）大群檢疫,1）休息狀態(tài)的檢查,3）飲食時檢查,2）動態(tài)檢查,（2）個體檢疫 禽只的檢疫以雞新城疫，禽流感、法氏囊病、雞白痢、雞傷寒、雞痘、雞傳染件喉氣管炎、雞白血病、雞馬立克氏病、鴨痘、禽巴氏桿菌病等為主要對象。,（2）個體檢疫 禽只檢疫重點項目為精神外貌，行走姿態(tài)，冠、肉髯、鼻孔、耳道、眼、嘴、嗉囊或食道膨大部，頸、體、羽毛、皮膚、泄殖孔部、呼吸及飲食狀態(tài)等。禽類除必要時測體溫外，一般不做檢查。,5.兔的臨床檢查 （1）觀察食欲 （2）觀察精神及眼色 （3）觀察耳朵 （4）觀察背毛和營養(yǎng)狀況 （5）觀察糞便 （6）觀察體溫、呼吸,任務三 動物病原菌實驗室檢驗,一、病料的采集 分離病原菌，必須準確采集含菌最多的病料，必須充分了解各種病原菌在患畜體內及其分泌物和排泄物中的分布情況。 采集病料時應盡可能避免雜菌污染。病料應作顯微鏡檢查和分離培養(yǎng)。,二、病原菌的分離和培養(yǎng)方法,1.分離方法 （1）病變組織，又是用無菌方法采集的，可將病料直接涂抹在固體培養(yǎng)基平皿上，或用鉑耳環(huán)鉤取少許組織，劃線接種于瓊脂平皿上或斜面上。如果雜菌太多，可采用平皿法或毛細吸管法分離出純培養(yǎng)物。,（2）病料是痰、乳、陰道分泌物、糞、尿等材料，污染雜菌較多，則需根據(jù)分離的病原菌特性，采用一些對病原菌無害、但對雜菌有殺死作用的方法，事先處理材料，以除去雜菌，然后接種培養(yǎng)基或在培養(yǎng)基中加入一些不妨礙病原菌生長，但對雜菌有抑制作用的抑菌藥物，以得到純的培養(yǎng)物。,（3）如果從腸道內容物，或從被不產生 芽孢的雜菌污染的培養(yǎng)物中分離能形成芽孢的細菌,可將材料或培養(yǎng)物在80加熱15min。 （4）有些污染雜菌的病料和培養(yǎng)物，可 以通過易感動物排除雜菌，而得到病原菌純培養(yǎng)物。,（5）液體病料，含菌太少，先作集菌處理，然后接種，以提高陽性檢出率。 （6）有些病原菌能通過一般隔菌濾板，如鉤端螺旋體能通過石棉濾板，而其他細菌則不能隨液體病料過濾，取濾過液作培養(yǎng)，可獲得鉤端螺旋體純培養(yǎng)物。,2.培養(yǎng)方法 （1）溫度 絕大多數(shù)病原菌最適宜的生長溫度是37 （2）厭氣條件 梭菌屬的病原菌 （3）CO2環(huán)境,3.分離病原菌用的培養(yǎng)基 大多數(shù)培養(yǎng)基都以肉或肝浸液為基礎，然后按需要加入各種成分配制成各種各樣的培養(yǎng)基,碳源,病原菌要求的營養(yǎng)成分,氮源,無機鹽類,生長因素,三、病原菌的鑒定方法,1.形態(tài)學觀察 （1）肉眼觀察要點 1）菌落形態(tài) 2）在半固體培養(yǎng)基中的生長情況 3）在特殊培養(yǎng)基上的生長情況,（2）顯微鏡觀察要點 1）注意菌體的形狀、大小和排列規(guī)律 2）注意是否產生芽孢和芽孢的位置 3）能不能運動 4）有無莢膜 5）染色反應如何,（3）細菌染色方法 常用的酸性染料有伊紅、酸性復紅、胭脂紅等。復合染料亦稱為中性染料，是堿性染料和酸性染料的結合物，如瑞氏染料中的伊紅化美藍，姬姆薩氏染料中的伊紅化天青等。,（3）細菌染色方法 最常用的染色法有革蘭氏染色、堿性美藍染色、石炭酸復紅染色、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色、印度墨汁染色法、抗酸染色、改良抗酸染色、瑞特氏染色法、姬姆薩氏染色法。,2.生化特性試驗 糖發(fā)酵試驗 靛基質（吲哚）試驗 VP試驗 甲基紅（MR）試驗 檸檬酸鹽利用試驗 硝酸鹽還原試驗 產生硫化氫試驗 明膠液化試驗 尿素酶試驗 牛乳試驗 3.血清學試驗,任務四 動物病毒性傳染病實驗室檢驗,1.待檢標本的采集和保存 （1）拭子標本 應用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉、結膜、陰道或直腸內的分泌物。蘸取分泌物后立即將拭子浸入保存液中，密封低溫保存。,一、病毒的分離和鑒定,（2）血液標本 無菌采血后加入1/1 000（約相當100 UL/mL）肝素做抗凝劑，也可將血液放入裝有玻璃珠的滅菌瓶內，振蕩脫纖維蛋白。需要時也可不加肝素，自然凝血后取血清做待檢標本。,（3）組織標本 無菌采取待檢組織35g，立即浸入保存液中，密封低溫保存。 （4）滲出物標本 在痘皰病灶破潰前，用無菌手術吸取滲出液，混入等量保存液（可用組織標本保存液），封閉低溫保存。也可應用滅菌玻璃毛細吸管，無菌操作吸取皰液、膿汁或滲出液，然后在火焰下迅速熔封兩端開口，置低溫保存。,2.待檢標本的運送 絕大多數(shù)病毒均對熱不穩(wěn)定，故均應低溫保存、運送。標本最好在48h內接種，在4左右保存、運送。如48h內不能接種時，需在-15以下保存、運送。保持溫度恒定，溫度波動往往對病毒有一定的滅活作用。,3.接種前待檢標本的處理 無論采用何種分離手段，都要求接種材料盡可能無菌，并盡可能地使標本中的病毒游離出來。,4.待檢標本的接種 由于病毒只能在活的動物或組織細胞內寄生和復制，所以病毒的分離培養(yǎng)技術較細菌的分離培養(yǎng)要復雜一些。通常分離培養(yǎng)病毒的方式有動物接種、胚胎卵接種和組織培養(yǎng)接種等。,.病毒的鑒定程序 病原鑒定的原則是在不斷觀察的基礎上逐漸縮小搜索范圍，以期最后的確診。 首先要詳細地進行流行病學調查，口岸檢疫要了解動物來源地的疫病流行情況。 在初步鑒定的基礎上，最后鑒定主要靠血清學方法，最常用的血清學方法有中和試驗、交叉保護試驗、補體結合反應、血細胞凝集抑制試驗、間接血凝試驗、免疫擴散、免疫熒光抗體