農(nóng)林學類論文-山羊胚胎移植技術在農(nóng)村牧區(qū)的推廣.doc

農(nóng)林學類論文-山羊胚胎移植技術在農(nóng)村牧區(qū)的推廣論文關鍵詞:敏蓋絨山羊、同期發(fā)情、超數(shù)排卵、胚胎移植論文摘要:從農(nóng)村牧區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)實際出發(fā),系統(tǒng)論述了敏蓋內蒙古白絨山羊在生產(chǎn)性胚胎移植中的技術程序。主要包括:提前的準備工作：選擇適宜的供、受體羊，并加強飼養(yǎng)管理；胚胎移植條件的準備：在適宜的季節(jié),用寧波激素廠促卵泡素（寧波三生激素廠）,以減量法進行供體超排；供、受體比例為1:812；用陰道栓配合促性腺激素,或用氯前列烯醇()進行受體同期發(fā)情處理；從供體輸卵管手術回收的胚胎,移植于受體羊輸卵管；完整的記錄體系。胚胎移植是現(xiàn)代生物工程高新技術，能充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，迅速擴大優(yōu)良畜群和純種規(guī)模，加速雜交改良速度，縮短改良周期和育種進程，增加雙胎率，防止不育，盡快培育出我國優(yōu)良絨山羊新品種。是一項投資少、見效快、利潤豐，具有事半功倍的良種擴繁和現(xiàn)代育種技術。1內蒙古鄂爾多斯伊金霍洛旗蘇布爾嘠鎮(zhèn)先后引入遼寧絨山羊品種與當?shù)匕捉q山羊育種形成了敏蓋內蒙古白絨山羊品種進行養(yǎng)殖，收益較大，一些農(nóng)牧民積極購買此絨山羊搞起了養(yǎng)殖,而且其他地區(qū)的人也常在這里購買此羊（如通遼的三高肉羊培育責任有限公司等）回去將把這些羊作為供體羊進行胚胎移植，使得此品種在市場上處于供不應求的狀態(tài)，為滿足需求和幫助農(nóng)牧民脫貧致富，政府投大量資金進行胚胎移植來提高繁殖率，同時也加快了山羊胚胎移植技術在農(nóng)村牧區(qū)的迅速發(fā)展與推廣。1關于開展農(nóng)村牧區(qū)零散養(yǎng)殖胚胎移植的建議在廣大農(nóng)村牧區(qū)每戶養(yǎng)殖數(shù)很少，而開展胚胎移植工作又需要進行集中處理，所以根據(jù)這一特點，提出以下建議，供參考：1.1分戶飼養(yǎng)與集體飼養(yǎng)相結合要在同期發(fā)情處理的第15天將所要接受移植的個體全部結合到一塊進行集中飼養(yǎng)，集中飼養(yǎng)時間為8-10天。1.2胚胎移植受體羊只的統(tǒng)計在胚胎移植前3個月進行村內移植受體羊統(tǒng)計，具體數(shù)量根據(jù)現(xiàn)有供體羊的數(shù)量進行確定，供受體參考比例為1：10。1.3胚胎移植處理時間確定鄂爾多斯地區(qū)一般在每年8月下旬至11月上旬進行同期發(fā)情處理較為合適。1.4受體羊的選擇及飼養(yǎng)管理1.4.1受體選擇：受體羊健康狀況良好,膘情適中，選擇繁殖機能正常，無傳染性疾病、無生殖器官疾病，年齡在26歲之間的經(jīng)產(chǎn)的羔羊斷奶一月以上的母羊。2而且在移植前2個月進行定期驅蟲，以利于個體抓膘，提高同期發(fā)情及受胎率。1.4.2公母分群所要進行移植的羊只一定要進行公、母羊分群飼養(yǎng)，以防受體羊只提前懷孕而流產(chǎn)造成不必要的經(jīng)濟損失。1.4.3飼養(yǎng)管理（短期優(yōu)飼）要求被處理個體在移植前加強飼養(yǎng)管理，使個體達到中等膘情，但也不能過肥或過瘦。從同期發(fā)情放栓之日起要適當增加豆類飼料和蘿卜等多汁飼料的供應，進行短期優(yōu)飼能提高同期發(fā)情及受胎率。1.5供體羊的選擇及飼養(yǎng)管理1.5.1供體選擇供體羊(敏蓋內蒙古白絨山羊)為經(jīng)產(chǎn)2-5胎的母羊，身體健康狀況良好,生殖器官正常,正常繁殖史,繁殖力較高,遺傳性穩(wěn)定，生產(chǎn)性能優(yōu)良，羔羊斷奶1個月以上，未孕。21.5.2供體的飼養(yǎng)管理對供體羊進行常規(guī)傳染病和寄生蟲病的防治。飼養(yǎng)管理遵循一般繁殖羊群的原則。保持羊群體況適度,根據(jù)羊群營養(yǎng)狀況適時調整日糧標準,即增加蛋白質、能量飼料補充料,并注意礦物質和維生素的供應。81.5.3供體羊準備期的日糧配制A、優(yōu)青草2公斤B、優(yōu)質紫花苜蓿干草粉0.5-1公斤或鮮紫花苜蓿2-2.5公斤C、胡蘿卜0.4公斤D、干玉米秸、胡蘿卜秧等混合草粉0.5公斤E、精料0.5公斤，（精料配方：玉米面59斤，麩皮15斤，豆粕22斤，母羊專用預混料1斤，石粉或磷酸氫鈣1斤，食鹽1斤，微量元素添加劑1斤，合計100斤）52準備工作2.1物品準備32.1.1器材高壓滅菌鍋、20ml注射器、10ml注射器、5ml注射器、1ml注射器、胚胎移植手術架、手術刀片、醫(yī)用縫合線、體視顯微鏡、沖胚管、集卵皿、培養(yǎng)皿、消毒衛(wèi)生紙、醫(yī)用噴壺、黑色記號筆、宮頸擴張器、移胚器、檢胚皿、剪毛剪、外科剪、手術刀、止血鉗、創(chuàng)巾鉗、持針鉗、手術鑷、縫合針、創(chuàng)巾、止血紗布、脫脂棉、盆等。2.1.2藥品沖胚液、胚胎培養(yǎng)液、冰袋、生理鹽水、新潔爾滅洗滌液、碘酊、酒精、青霉素、黃胺粉、FSH、孕馬血清、CIDR、陰道海綿栓、氯前列烯醇(PG)、黃體酮、麻醉劑（2靜松靈）、蘇醒靈等。2.2胚胎移植操室準備50m2的以上房間,分隔為2個房間，胚胎移植手術室和胚胎操作室。并設置工作臺及藥械臺等。室溫保持在22-25,并用新潔爾滅進行室內消毒。43.供、受體羊的同期發(fā)情及供體的超排具體方案如下：日期供體山羊受體山羊0天早8時，放置海綿栓5天早8時，放置陰道海綿栓9天早8時，取出海綿栓、放入一新的海綿栓15天晚6時，肌注PMSG200iu晚6時，肌注PMSG200iu16天晚6時，肌注FSH28-30iu17天早8時，肌注FSH28-30iu晚6時，肌注FSH23-25iu18天早8時，肌注FSH23-25iu晚6時，a、肌注FSH18-20iub、肌注PG0.5ml晚6時、肌注PG0.5ml19天早8時，a、撤出海綿栓（青霉素沖陰道）b、肌注FSH18-20iu晚6時，a、開始試情b、發(fā)情后立即靜注LH130-140IUc、發(fā)情后立即進行輸精早8時，撤出陰道海綿栓晚6時，開始試情20天進行手術輸精(發(fā)情12小時)早8時試情22天輸卵管沖胚（建議在下午開始較好）輸卵管移植4胚胎回收及胚胎檢查4.1供體羊術前準備胚胎回收手術前1天停止飼喂草料而只給少量飲水，否則由于腹壓過大，會造成手術的困難和供體生殖器官的損傷。飼喂干草的母羊，停飼的時間不能少于24小時，飼喂青草或在草地上放牧的羊，停飼時間可減少至18個小時。在術前一天術部進行剪毛和剃毛，常有許多剃斷的毛粘于皮膚，很難消除干凈，手術中易帶入創(chuàng)口造成污染，可采用干剪毛濕剃毛，剪毛完畢后用肥皂涂于要剃毛的部位，再用剃毛刀剃毛，然后用干毛刷將斷毛刷除干凈。第二天進行沖胚手術。4.2供體羊沖胚：供體羊的沖胚手術在授精后68-72小時進行。（采用輸卵管沖胚法可獲2-8細胞期的胚胎及少量的16細胞期胚胎。用于鮮胚移植。）6首先，對供體羊全身麻醉，術部消毒后,采取前低后高半仰姿勢將其保定在手術臺上。在腹底部偏右側距乳房基部3-4cm處做一長4-5cm的縱向切口，逐層切開,切開腹膜后,將中指和食指伸入腹腔在骨盆腔前沿膀胱之下觸摸子宮角,把子宮角牽引到切口之外,再把卵巢引出,檢查黃體發(fā)育情況,如果黃體發(fā)育正常，即沖胚。沖胚時，在輸卵管傘部前端插入一個帶有膠管的回收圓針，并用手卡住，準備收集沖出的胚胎；再向輸卵管的壺腹部處,插入裝有沖胚液的進液針頭,緩慢推入沖胚液，將胚胎沖入器皿中,沖胚液用量30-50ml。一側沖洗結束時,除去器械,檢查針孔,確認無出血現(xiàn)象,將輸卵管送回腹腔內,然后按同一操作辦法進行另一側沖胚。兩側沖洗完畢后,將子宮送回腹腔并向腹腔內注入2530生理鹽水,最后逐層進行縫合。4.3胚胎檢查：4.3.1檢卵將收集的沖卵液于37溫箱內靜置10-15分鐘。胚胎沉底后，移去上層液。取底部少量液體移至平皿內，靜置后，在視體顯微鏡下先在低倍(10-20倍)下檢查胚胎數(shù)量，然后在較大倍數(shù)(50-100倍)下觀察胚胎質量。4.3.2吸胚用移植器先吸一段1cm長的保存液，再吸一段0.5cm的空氣，然后吸取胚胎。含胚胎的液柱不超過1.5cm。吸胚是為了移取、清洗、處理胚胎，要求目標準確，速度快，帶液量少，無丟失。吸胚可用1毫升的注射器裝上特別的吸頭進行，也可使用自制的吸卵管。4.3.3胚胎質量鑒定正常發(fā)育的胚胎，其中細胞(卵裂球)外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無卵裂現(xiàn)象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。處于二分體到四分體的胚胎4.3.4胚胎保存：用吸卵管吸取發(fā)育成熟的胚胎,放入PBS培養(yǎng)液中保存,在24-26下,保存時間不超過4-5小時。5受體羊胚胎移植(術前準備同供體)首先，對受體羊注射麻醉劑，實行全身麻醉，術部消毒,采取前低后高半仰姿勢將受體羊保定在手術臺上,在腹底部偏右側距乳房基部3-4cm處做一個長4-5cm的縱向切口,逐層切開,切開腹膜后,引出子宮、輸卵管以及卵巢，檢查黃體，無黃體或黃體過小的受體羊不能做胚胎移植；若有孕妊黃體,且生殖系統(tǒng)無炎癥,即作為受體羊。將受體羊黃體一側的輸卵管傘部拔開，用裝入胚胎的注射器從此處插入3-4，將胚胎注入輸卵管內。移植結束后,把子宮角送入腹腔,在創(chuàng)口灑上抗菌素，防止感染，按手術要求縫合好腹壁創(chuàng)口。6術后護理6.1供體術后護理及配種繁殖胚胎回收手術后注意傷口護理,注意觀察，有問題及時處理。對季節(jié)性繁殖的品種,為了不影響其自然繁殖及次年羔羊管理,當年只進行一次超排,并在下次發(fā)情時配種,自然繁殖。76.2受體術后護理與妊娠、分娩完成受體胚胎移植后,應加強術后護理、觀察，對妊娠受體適當增加日糧營養(yǎng),以滿足妊娠需要,妊娠后期更應加強管理,防止流產(chǎn),并做好接產(chǎn)和羔羊護理工作。97結果與存在的問題7.1總體移植情況共處理供體63只，其中懷孕3只，未發(fā)情1只，未沖胚1只，可用胚493枚，未受精卵141枚，共處理受體（同期發(fā)情處理）500只，受體移植數(shù)量431只。7.2存在的問題（1）由于參加胚胎移植的人員中有幾個是教師，所以移植只好安排于暑假期間，但是對于鄂爾多斯地區(qū)來說，最佳的移植時間一般是在8月下旬-11月上旬，略有些早，影響供體的超排效果。（2）超排效果不夠穩(wěn)定，利用外源性促性腺激