PCR引物流程設計詳解.doc_第1頁
PCR引物流程設計詳解.doc_第2頁
PCR引物流程設計詳解.doc_第3頁
PCR引物流程設計詳解.doc_第4頁
PCR引物流程設計詳解.doc_第5頁
已閱讀5頁，還剩12頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

PCR引物設計流程詳解本文目的：復制出IL-4基因片段一、 查找基因序列1、 進入NCBI主頁，下拉選框選擇Nucleotide，在搜索欄輸入要查找的目的基因，即IL-4，點擊搜索2 、在搜索結(jié)果選擇靈長類（Homo sapiens）2、 在靈長類IL-4基因中選擇需要的mRNA序列3、 查看基因的相關信息外顯子區(qū)域CDs區(qū)域4、 點擊FASTA格式，并將序列保存到文檔二、 使用primer premier 5.0設計引物1、 建立新文件，將所得的序列復制進輸入框內(nèi)2、 點擊搜索按鈕，搜索引物3、 設置引物設計參數(shù)（因為在之前查找基因序列的時候獲知，外顯子區(qū)域分別為：1-200、201-248、249-425、426-618，又知在引物設計時引物位置最好跨越一個內(nèi)含子，PCR產(chǎn)物長度通常為100-150bp，故設定上游引物位置為201-248，下游引物位置為249-425，產(chǎn)物長度為100-150bp）4、確認條件后，顯示搜索結(jié)果4、 雙擊選中得分最高的引物查看引物情況（上圖為上游引物情況，下圖為下游引物情況）5、 將設計的上下游引物復制出來，保存到文檔中三、 使用oligo 6.0對設計的引物進行評價1、 建立新文件，將從cnki上獲得的cDNA復制進輸入框，并點擊accept接收2、 接收后顯示出該序列的相關信息3、 點擊edit按鈕錄入用primer設計的上游引物，每一次輸入新數(shù)據(jù)后都需要點擊accept按鈕接收4、 同理，錄入下游引物5、 分析上下游引物二聚體形成情況6、 分析上下游引物發(fā)卡形成情況7、 分析上下游引物GC%8、 檢測上下游引物與PCR模板其它位置錯配情況9、 分析PCR整體情況四、 引物特異性檢驗（primer blast）1、 進入NCBI主頁，并選擇blast2、 選擇primer blast3、 在輸入框內(nèi)輸入模板序列和上下游引物，并設定對比數(shù)據(jù)庫，點擊get primer進行對比4、 查看blast結(jié)果Blast 結(jié)果顯示，盡管IL

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論