用ModFit軟件分析DNA倍體和細(xì)胞周期.ppt

DNA倍體和細(xì)胞周期分析,細(xì)胞周期和DNA倍體分析的原理,1、正常細(xì)胞DNA含量穩(wěn)定在2C水平,2、性細(xì)胞DNA含量為1C,3、處于增殖期至分裂期細(xì)胞由 2C增加至4C,4、凋亡細(xì)胞DNA斷裂,含量2C,細(xì)胞經(jīng)熒光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞DNA含量，可得到細(xì)胞周期三個時(shí)相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（），可以反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)和非二倍體（異倍體）的DNA含量,Diploid: 100.00 % Dip G1: 54.38 % at 46.90 Dip G2: 15.91 % at 91.61 Dip S: 29.71 % G2/G1: 1.95 %CV: 5.23,G0/G1,S,G2/M,DNA檢測的常用術(shù)語,表示流式分析中DNA含量的分辨率或精確度。 通常由G0/G1峰的CV來反映【 %CV=（SD/mean）x 100】。 影響CV的因素主要包括兩方面：儀器因素（如液流、光路、機(jī)器調(diào)試等）和樣本制備及染色過程對標(biāo)本的人為影響。,1. 變異系數(shù)（Coefficient of Variation，CV）,DI指的是腫瘤樣本G0/G1峰的平均道數(shù)與人正常二倍體G0/G1峰的平均道數(shù)之間的比值。 DI為1 意味著二倍體（2c）（一般正常范圍為0.91.1）。 倍體（Ploidy）：原指染色體數(shù)目。流式中用來描述總的DNA含量。 二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的DNA含量但不除外染色體異常。 DI為1.9-2.1 的細(xì)胞為四倍體（CV為5%時(shí)）。在二倍體和四倍體區(qū)域之外的統(tǒng)稱異倍體。,2. DNA指數(shù)（DNA index，DI）和倍體（Ploidy）,DNA檢測的常用術(shù)語,結(jié)果分析,CellQuest、WinMDI等軟件均可以進(jìn)行分析，但需要手工進(jìn)行參數(shù)統(tǒng)計(jì)和計(jì)算； 推薦使用ModFit分析軟件（分析如下：） 1、打開軟件； 2、在FL2-W/FL2-A散點(diǎn)圖中設(shè)定單個細(xì)胞門（R1），去除聚集細(xì)胞，必要時(shí)可以設(shè)兩個門。 3、在FL2-A直方圖中顯示R1中細(xì)胞的DNA含量直方圖 注：該軟件可以自動分析，也可手動分析；可以分析凋亡、異倍體、各期比例等；結(jié)果均自動計(jì)算。,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,File analyzed: qq.003 Date analyzed: 3-Jun-2009 Model: 1DA0A_DSF Analysis type: Manual analysis Diploid: 100.00 % Dip G1: 63.02 % at 44.61 Dip G2: 18.55 % at 86.71 Dip S: 18.44 % G2/G1: 1.94 %CV: 6.12 Total S-Phase: 18.44 % Total B.A.D.: 5.45 % Apoptosis: 15.11 % Mean: 19.05 Debris: 6.04 % Aggregates: 1.72 % Modeled events: 2775 All cycle events: 2166 Cycle events per channel: 50 RCS: 6.238,ModFit分析,ModFit分析,【重要參數(shù)】,DI（DNA指數(shù), 判斷倍體數(shù)）=（標(biāo)本G0/G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù)）/（正常二倍體細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù)） PI(增殖指數(shù), 表示細(xì)胞的增殖活性)（%）（S + G2M）/（G0/G1 + S + G2M）100% SPF(S期細(xì)胞比率, 表示細(xì)胞的增殖活性)（%）= S /（G0/G1 + S + G2M）100%,【倍體和細(xì)胞周期分析】,發(fā)現(xiàn)DNA異倍體(二倍體峰DI1.1 或2.1 或15%的S期細(xì)胞，并伴有G0/G1峰的CV9%，提示為腫瘤或增生旺盛的病變 ； 如無明顯異倍體，但G0/G1峰的CV增大，并伴有10% 15%的S期細(xì)胞和一個突出的4倍體峰，診斷為可疑腫瘤或增生旺盛的病變。,發(fā)現(xiàn)癌前病變，協(xié)助腫瘤早期診斷 在腫瘤的診斷、預(yù)后判斷和治療中的作用 在指導(dǎo)腫瘤化療中的作用,【臨床意義】,乳腺癌DNA異倍體患者生存率,乳腺癌腫瘤細(xì)胞異倍體患者長期生存率顯著下降,【臨床病例】,Diploid: 46.75 % Dip G1: 97.54 % at 46.06 Dip G2: 0.58 % at 92.12 Dip S: 1.88 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.26 Aneuploid 1: 47.55 % An1 G1: 93.05 % at 49.83 An1 G2: 0.00 % at 99.67 An1 S: 6.95 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.13 DI: 1.08 Aneuploid 2: 5.70 % An2 G1: 94.97 % at 55.72 An2 G2: 5.03 % at 103.44 An2 S: 0.00 % G2/G1: 1.86 %CV: 4.52 DI: 1.21,AL 骨髓,Diploid: 64.50 % Dip G1: 92.45 % at 49.24 Dip G2: 2.30 % at 98.48 Dip S: 5.26 % G2/G1: 2.00 %CV: 3.21 Aneuploid 1: 35.50 % An1 G1: 97.69 % at 58.53 An1 G2: 0.00 % at 123.89 An1 S: 2.31 % G2/G1: 2.12 %CV: 3.14 DI: 1.19 Total Aneuploid S-Phase: 2.31 % Total S-Phase: 4.21 % Total B.A.D.: 0.35 % Debris: 1.14 % Aggregates: 0.00 % Modeled events: 3567 All cycle events: 3526 Cycle events per channel: 47 RCS: 2.356,MM 骨髓,宮頸脫落細(xì)胞,Diploid: 97.61 % Dip G1: 97.74 % at 49.78 Dip G2: 0.02 % at 99.57 Dip S: 2.25 % G2/G1: 2.00 %CV: 6.49 Aneuploid 1: 2.39 % An1 G1: 84.90 % at 75.79 An1 G2: 15.10 % at 109.99 An1 S: 0.00 % G2/G1: 1.