離體蛙心灌流.ppt

離體蛙心灌流,【目的要求】,1、學習斯氏離體蛙心灌流法。 2、觀察離子及藥物等對離體心臟活動的影響。,【基本原理】,心臟的正常節(jié)律性活動需要一個適宜的內(nèi)環(huán)境（如na，k，ca2等的濃度及比例、ph值和溫度），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動。 將失去神經(jīng)支配的離體心臟保持于適宜的理化環(huán)境中（任氏液ringer solution），在一定時間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動節(jié)律性興奮和收縮。,離子對心臟活動的影響,改變?nèi)问弦旱慕M成成分，離體心臟的活動就會受到影響。 k+參與心肌細胞的復極化和自律細胞的4期自動去極化過程，其改變不僅取決于細胞內(nèi)外k+濃度梯度，還與細胞膜對k+通透性有關(guān)，因此其影響是多方面的。 ca2+對na+內(nèi)流存在競爭抑制作用，稱膜屏障作用，對靜息電位無影響。ca2+o ，可使心肌細胞的興奮性降低，傳導減慢，收縮力增強。,在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配 交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，與心肌細胞受體結(jié)合，使心肌收縮力加強，傳導速度加快，心率加快；阻斷劑心得安 迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，與心肌細胞m受體結(jié)合，使心肌收縮力減弱，心肌傳導速度減慢，心率減慢；阻斷劑阿托品,【動物、器材與試劑】,蟾蜍或蛙、紗布、毀髓針、眼科鑷、手術(shù)剪、眼科剪、蛙板、蛙釘、玻璃分針、滴管、細棉線、蛙心夾、鐵支架、萬能滑輪、小燒杯、斯氏蛙心套管、雙凹夾、套管夾、張力換能器、生物信號計算機采集系統(tǒng) 任氏液、0.65% nacl 、2% cacl2 、1% kcl 、1/10000腎上腺素、1/10000乙酰膽堿、阿托品、300u/ml肝素。,【方法與步驟】,1、儀器準備 2、離體蛙心的制備 3、連接實驗裝置 4、實驗觀察,1、儀器準備,打開計算機生物信號采集系統(tǒng)，選擇實驗項目-循環(huán)實驗-離體蛙心灌流。 熟悉實驗標記的使用。 參考：生理模擬實驗軟件-離子和藥物對離體蛙心的影響,2、離體蛙心的制備（斯氏蛙心插管法）,在左主動脈下方穿線，靠上端結(jié)扎，作插管時牽引用 在主動脈干下方穿線，在動脈圓錐上方打一活結(jié)備用（用以結(jié)扎和固定插管）。,取蛙或蟾蜍，雙毀髓后背位置于蛙板上，暴露心臟。仔細識別心臟周圍的大血管。,左手提起左主動脈上方的結(jié)扎線，右手用眼科剪在結(jié)扎線下方、沿向心方向?qū)用}管壁剪一斜口（注意要剪破血管內(nèi)膜，每次心縮時有血自切口涌出，但不要把血管剪斷，剪口位置視套管尖端長度與心臟大小而定）。 選擇大小適宜的斯氏蛙心套管，盛入少量任氏液（內(nèi)加一滴肝素溶液，套管內(nèi)23cm高度） 。 左手用眼科鑷提起切口緣，右手將注有任氏液的斯氏套管插入動脈干內(nèi)，然后左手持左側(cè)血管分支上的結(jié)扎線向外拉，右手將蛙心套管送入動脈圓錐。,當套管尖端到達動脈圓錐基部時，應(yīng)將套管稍向后退（因主動脈內(nèi)有螺旋瓣會阻礙插管前進），并將套管尾端稍向右主動脈方向及腹側(cè)面傾斜，使插管尖端向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進，在心室收縮時經(jīng)主動脈瓣進入心室。,注意插管不可插得過深，插管的斜面應(yīng)朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此時可見血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動而上下移動，表明操作成功（否則需退回并重新插入） 用滴管吸去套管中的血液，換新鮮任氏液。,穩(wěn)定住套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管用雙結(jié)扎緊（不得翻液），再將結(jié)線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結(jié)扎線上方的血管。 看清靜脈竇的位置，在心臟的下方繞一線，將左右肺靜脈及前后腔靜脈一起結(jié)扎（注意切勿損壞靜脈竇）。輕輕提起套管和心臟，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈竇與心臟的聯(lián)系，使心臟離體。,用任氏液反復沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致（1.52cm，或在套管的下1/3處結(jié)一線作為標志，每次換任氏液時使液面與此線相平），即可進行實驗。,其他方法技巧,用蛙心夾提起心尖，使心室與動脈圓錐約呈100-200的鈍角，然后當心室縮緊時把套管平直往心室方向推進。當感覺套管進入心室后再把心尖放平，隨即將套管稍向心室推進，調(diào)整合適位置，可見套管內(nèi)液面隨心跳而升降。,3、連接實驗裝置,將套管固定在支架上，用蛙心夾在心舒期夾住少許心尖部肌肉（不要夾多，以免夾破心室而漏液）。 將蛙心夾上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。勿使灌流液滴到傳感器上。,調(diào)節(jié)記錄儀器上的收縮曲線的幅度適中。,4、實驗觀察,1)記錄正常心搏曲線。 2)改用0.65% nacl溶液灌流，并作好加藥標記，觀察心搏變化。待曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即吸去套管中的灌流液，同時做好沖洗標記，并用新鮮任氏液清洗23次，待心搏恢復正常。 注意：換液時切勿碰套管，以免影響描記曲線的基線，同時保持灌流液面一致（下同）。,3)向套管內(nèi)加26滴5% nacl溶液，作好加藥標記，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化。當曲線出現(xiàn)明顯變化時，應(yīng)立即吸去套管中的灌流液，并做好沖洗標記，迅速用新鮮任氏液清洗23次，待心搏恢復正常。 4)向套管內(nèi)加12滴2% cacl2溶液，作好加藥記號，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化。標記、沖洗至心搏恢復正常 5) 向套管內(nèi)加入12滴1% kcl溶液，記錄心搏曲線的變化。當心搏曲線變化時，同法更換灌流液，待心搏恢復正常。,6)同法記錄套管中加入12滴腎上腺素溶液(1/10000)后心搏曲線的變化。 7)同法記錄套管中加入12滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線的變化。 8)同法記錄套管中先加入阿托品后再加12滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線的變化。,【注意事項】,1、制備離體心臟標本時，勿傷及靜脈竇。 2、蛙心夾應(yīng)在心室舒張期一次性夾住心尖，避免因夾傷心臟而導致漏液。 3、每一觀察項目都應(yīng)先描記一段正常曲線，然后再加藥并記錄其效應(yīng)。加藥時應(yīng)在心跳曲線上予以標記，以便觀察分析。 4、各種滴管應(yīng)分開，不可混用。 5、在實驗過程中，插管內(nèi)灌流液面高度應(yīng)保持恒定；儀器的各種參數(shù)一經(jīng)調(diào)好，應(yīng)不再變動。,6、標本制備好后，若心臟功能狀態(tài)不好（不搏動），可向插管內(nèi)滴加12滴2%cacl2或1：10000腎上腺素，以促進（起動）心臟搏動。在實驗程序安排上也可考慮促進和抑制心臟搏動的藥物交換使用。 7、給藥后若效果不明顯，可再適量滴加，并密切注意藥物劑量添加后的實驗結(jié)果。給藥量必須適度，加藥出現(xiàn)變化后，就應(yīng)立即更換任氏液，否則會造成不可挽回的后果，尤其是k稍有過量，即可導致難以恢復的心臟停跳。 8、謹防灌流液沿絲線流入張力傳感器內(nèi)而損壞其電子元件。,實驗結(jié)果,cacl2灌流,kcl灌流,1:10000 e灌流,4期 if 、i cat通道,4期自動去極速度,自律性,心率,與心肌1受體結(jié)合,ca2+內(nèi)流 肌漿網(wǎng)釋放ca2+,興奮-收縮耦聯(lián),收縮力,camp,1:10000 ach灌流,與心肌m受體結(jié)合,k+外流, ca2+內(nèi)流,e-c耦聯(lián),收縮力,最大復極電位 4期k+外流,自律性,心率,ca2+i,【思考題】,1、心臟灌流說明心肌的哪些生理特性？ 2、用實驗說明內(nèi)環(huán)境相對恒定的重要意義。 3、試分析任氏液中適量的鈉離子、鈣離子與鉀離子對心肌的作用。 4、為何強調(diào)實驗中保持灌流液面的恒定?灌流量對心臟活動會有什么影響？ 5、試想，活的機體在心交感神經(jīng)興奮或心迷走神經(jīng)興奮時對心臟會有什么影響？,實驗拓展,溫度的影響：把套管內(nèi)